膠體金試紙條在肉類食品中禁用獸藥殘留檢測中的應(yīng)用

梁文文

中國是世界第一的肉類生產(chǎn)大國，肉類食品在生活中也是必不可少的食物來源。近年來，我國肉類消費(fèi)占比進(jìn)一步上升，同時(shí)肉類食品問題事件也越來越突出。屢被曝光的肉類食品安全問題對(duì)人體健康、動(dòng)物疾病防控以及生態(tài)環(huán)境等造成了很大危害，也造成了我國動(dòng)物性食品出口他國的限制。在3月22日舉辦的“肉類食品安全的保障與控制網(wǎng)絡(luò)研討會(huì)”上，來自江蘇美正生物科技有限公司的研發(fā)總監(jiān)張勛對(duì)肉類食品的獸藥殘留進(jìn)行了講解，旨在提高肉類食品中獸藥殘留的檢測水平，加強(qiáng)我國肉類食品安全監(jiān)管，使我國肉類食品生產(chǎn)和消費(fèi)體制不斷健全、完善，保障人民生活中的食品安全。

常見的快速檢測產(chǎn)品形式

從事食品安全檢測的人都知道常見的食品安全檢測方法——儀器方法和快速方法，研討會(huì)上，張勛主要介紹了快速檢測。快速檢測方法從檢測原理上看，可分為基于理化性質(zhì)的檢測和基于免疫學(xué)的檢測，其中免疫學(xué)方法主要是利用抗原抗體的特異性結(jié)合建立的方法，目前產(chǎn)品使用較多的方法有ELISA、免疫層析等。

酶聯(lián)免疫（ELISA）產(chǎn)品檢測靈敏度高，但檢測過程中需要經(jīng)過洗板、多次加液等多個(gè)步驟，檢測過程還需要使用一定的儀器設(shè)備，如借助酶標(biāo)儀讀數(shù)。該檢測下限可達(dá)0.01μg/ kg（ppb），單批樣本檢測時(shí)間為1～2小時(shí)，更適用于批量樣本檢測。膠體金產(chǎn)品有兩種類型——檢測卡和試紙條，這兩種形式的產(chǎn)品雖包裝不同，但檢測原理相同，均具有靈敏度高、檢測速度快、耗時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)，單個(gè)樣本檢測僅需5～10分鐘，結(jié)果可以直接目測，也可與讀數(shù)儀聯(lián)用，接入數(shù)據(jù)平臺(tái)系統(tǒng)，適用于現(xiàn)場快速檢測。

儀器檢測和快速檢測各有優(yōu)缺點(diǎn)，但兩者并不是對(duì)立的關(guān)系，因?yàn)槠涓髯缘倪m用范圍和條件不同。在實(shí)際應(yīng)用中，最好的檢測模式就是使兩者相互配合，大量樣本初篩使用快速檢測，然后陽性或疑似陽性的樣本使用儀器檢測進(jìn)行確證。

常見的禁用獸藥種類

禁用獸藥的依據(jù)一般為（農(nóng)業(yè)部）公告、法規(guī)、國家標(biāo)準(zhǔn)等，常見的禁用農(nóng)藥有如下幾種。

①肉精類（β-興奮劑類）

瘦肉精主要包括克侖特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺、西馬特羅、苯乙醇胺A、班布特羅、齊帕特羅、氯丙那林、馬布特羅、西布特羅、溴布特羅等。瘦肉精類膠體金產(chǎn)品較早用于食品安全快速檢測，同時(shí)也是使用量最大的產(chǎn)品之一，一般檢測限3-3-5μg/kg，目前已出現(xiàn)0.5μg/kg的產(chǎn)品。瘦肉精一般通過動(dòng)物尿液和組織來進(jìn)行檢測，在對(duì)尿液樣本進(jìn)行檢測時(shí)要注意不同地區(qū)的動(dòng)物和不同種類的動(dòng)物其尿液基質(zhì)會(huì)存在差異。

②氯霉素

氯霉素很早就被我國列入禁止使用的范圍，儀器方法和膠體金方法檢測限均為0.1μg/kg，檢測精度較高，其在貝類、蜂蜜中檢出較多。值得注意的是，同類藥物中氟苯尼考在雞蛋中禁止檢出。

③硝基呋喃類

硝基呋喃類物質(zhì)是我國食品藥品監(jiān)管部門比較重視的一類檢測物質(zhì)，其原型藥在生物體內(nèi)代謝迅速，但代謝產(chǎn)物和蛋白質(zhì)結(jié)合相當(dāng)穩(wěn)定，故常利用代謝物的檢測來反應(yīng)硝基呋喃類藥物的殘留狀況。儀器方法和膠體金方法檢測限均可達(dá)到0.5μg/kg，膠體金方法中使用消線法比使用比色法判讀優(yōu)勢更加明顯。

④孔雀石綠

孔雀石綠是一種有毒的三苯甲烷類化學(xué)物，并不是所有的肉類食品中都有，其常見于水產(chǎn)品之中，但近年來被多次通報(bào)，屢禁不止。膠體金方法檢測限均可達(dá)0.5μg/ kg，與儀器方法保持統(tǒng)一水平。一般禁用獸藥有兩個(gè)特點(diǎn)，一是有毒性、危害大，另一個(gè)是在體內(nèi)殘留時(shí)間長，而孔雀石綠就是這樣一種物質(zhì)。有文獻(xiàn)中提到室內(nèi)模擬實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)水體中LMG初始濃度為1 ng/mL，兩個(gè)月后在羅非魚肌肉中的積累濃度高達(dá)60 ng/g。

⑤硝基咪唑類

硝基咪唑類物質(zhì)包括甲硝唑（Metronidazole）、地美硝唑（Dimetronidazole）及其鹽、酯及制劑，具有致突變性和潛在的致癌性，被許多國家列為違禁藥物。農(nóng)業(yè)部公告第193號(hào)規(guī)定不準(zhǔn)以抗應(yīng)激、提高飼料報(bào)酬、促進(jìn)動(dòng)物生長為目的在食品動(dòng)物飼養(yǎng)過程中使用。儀器方法檢測限為0.2μg/kg，定量限1.0μg/kg，膠體金檢測限目前可以做到0.5μg/kg。

⑥喹乙醇代謝物MQCA

喹乙醇代謝物MQCA是2017年“3·15”晚會(huì)曝光的藥物，被稱為“新型瘦肉精”。農(nóng)業(yè)部公告第168號(hào)中規(guī)定：喹乙醇只能用于體重低于35千克的豬，飼料中添加量不得高于50 ppm，禁止用于家禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖。藥典辦[2017]14號(hào)，建議停止氨苯砷酸、洛克沙胂和喹乙醇用于動(dòng)物促生長；2015版獸藥典沒有收錄喹乙醇代謝物MQCA。儀器方法和膠體金方法檢測限均可達(dá)到0.5μg/kg，另外江蘇美正專門開發(fā)了免疫親和柱配套的儀器方法，回收率更穩(wěn)定。

⑦喹諾酮類/磺胺類

喹諾酮類/磺胺類中部分藥物為禁用，同時(shí)也是歐美主要關(guān)注的藥物之一，出口企業(yè)應(yīng)多加重視。相對(duì)于組織類樣本，蛋雞禁用較多，因此雞蛋中限制更嚴(yán)格。此類快速檢測產(chǎn)品大多數(shù)是識(shí)別一類藥物，因此與實(shí)際的需求可能有誤差，用戶需要理解交叉反應(yīng)的含義，針對(duì)自己的需求權(quán)衡。檢測時(shí)，一般多采用水性溶液提取，氮吹方法要注意某些藥物的回收率可能不夠好。

⑧其他項(xiàng)目

除以上主要禁用藥物外，還有抗病毒類藥物、激素與蛋白同化類藥物、精神鎮(zhèn)靜類藥物等，需要注意的是針對(duì)雞蛋或者牛奶，禁用的藥物種類會(huì)有所不同。

常見問題及注意事項(xiàng)

無論是儀器檢測還是快速檢測，首先要注意污染問題，因?yàn)槲廴緹o處不在，又難以發(fā)現(xiàn)，常常被人們忽視。此外，看似不經(jīng)意的動(dòng)作，往往會(huì)造成很大誤差，通常只有經(jīng)驗(yàn)豐富的操作員才能避免或分析其發(fā)生的原因。常見的污染有操作人員使用的化妝品、記號(hào)筆、人用藥物等?；瘖y品中常見的污染物質(zhì)為氯霉素、磺胺、喹諾酮、四環(huán)素類藥物；人用藥常帶來的污染有頭孢類、阿奇霉素、金剛烷胺等；記號(hào)筆含有較高含量的孔雀石綠，在檢測孔雀石綠時(shí)應(yīng)盡量避免記號(hào)筆的使用。與此同時(shí)，采樣環(huán)節(jié)的操作細(xì)節(jié)也會(huì)對(duì)后續(xù)檢測帶來影響，所以一定要有良好的操作習(xí)慣，避免污染源的帶入。

其次，需要注意的事項(xiàng)還有操作的濕度和溫度，因?yàn)闇囟群蜐穸冗^高或過低都會(huì)影響測量的準(zhǔn)確性，一般要求在室溫下操作（25℃左右）。產(chǎn)品打開之后應(yīng)盡快使用，或在產(chǎn)品要求的時(shí)間內(nèi)使用，否則產(chǎn)品將失效，檢測結(jié)果也會(huì)變得毫無意義。判讀時(shí)間、方式也應(yīng)詳細(xì)閱讀說明書，根據(jù)要求進(jìn)行操作。

對(duì)于快檢產(chǎn)品有一個(gè)很重要的環(huán)節(jié)就是產(chǎn)品的驗(yàn)證，因?yàn)榭鞕z產(chǎn)品是用來衡量某一物質(zhì)的“標(biāo)尺”，所以本身要準(zhǔn)確。一般大廠家的產(chǎn)品在出廠前會(huì)經(jīng)過質(zhì)控，然而一些小公司的產(chǎn)品沒有完整的質(zhì)控環(huán)節(jié)，用戶如果有條件的話，最好能自己準(zhǔn)備一些標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行驗(yàn)證。

快速檢測發(fā)展的方向

快速檢測的發(fā)展方向呈現(xiàn)以下幾個(gè)特點(diǎn)。首先，產(chǎn)品和技術(shù)種類越來越多，尤其是禁用藥物，雖然相關(guān)法律法規(guī)對(duì)禁用藥物的要求比較嚴(yán)格，但目前快檢產(chǎn)品種類還不能覆蓋全部的禁用獸藥，因此需要進(jìn)一步開發(fā)新項(xiàng)目相關(guān)的靈敏度高的抗體，以改善目前存在的問題?，F(xiàn)在檢測限達(dá)不到要求的會(huì)進(jìn)一步提高檢測限，已經(jīng)有產(chǎn)品的比色法判讀改進(jìn)成消線法判讀等。相信隨著技術(shù)的發(fā)展和對(duì)其研究的深入，快檢產(chǎn)品的應(yīng)用匯越來越多。

其次是出現(xiàn)了更多的標(biāo)記材料，如熒光、上轉(zhuǎn)化、磁珠等，需提醒用戶的是不要過度迷信新技術(shù)，滿足檢測需求是最基本的要求，根據(jù)自己的需求選擇合適的產(chǎn)品即可。在選擇時(shí)，可依據(jù)產(chǎn)品檢測限、穩(wěn)定性、檢測成本、檢測效率進(jìn)行選擇。目前膠體金的應(yīng)用較多，大多需求也都能滿足，且技術(shù)成熟，產(chǎn)品穩(wěn)定性較好，新材料可作為膠體金的補(bǔ)充。

目前市場上也出現(xiàn)了越來越多的更靈敏的識(shí)別原料，使用較多的是單克隆抗體，其穩(wěn)定性好，批間差異性小。另外還有適配體、受體等，這些原料在研究中較為常見，但應(yīng)用中較少。使用的較多的仍然是抗體，所以抗體也是衡量一個(gè)公司的關(guān)鍵，可以說是核心技術(shù)。

今后，快速檢測產(chǎn)品的優(yōu)化還會(huì)從更快速的前處理方案、多合一的檢測方案、自動(dòng)化等方面著手，提高產(chǎn)品的檢測效率，解放檢測人員的雙手。