高效液相色譜法測(cè)定食品中的苯甲酸、山梨酸和糖精鈉

◎ 高明陽(yáng)

（北京市工商行政管理局西城分局，北京 100035）

苯甲酸、山梨酸屬有機(jī)酸類防腐劑，酸性條件下，具有廣譜抑菌作用；糖精鈉（鄰苯甲?；酋啺封c），屬人工合成甜味劑，價(jià)格低廉，添加方便，適用范圍廣。若未嚴(yán)格控制添加量，過(guò)量會(huì)對(duì)人體健康造成危害[1]。本文的實(shí)驗(yàn)采用GB5009.28-2016《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測(cè)定》，選取一般性試樣、含膠基的試樣及高油脂試樣，對(duì)食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉進(jìn)行了測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)條件

1.1 主要試劑及標(biāo)準(zhǔn)品

試劑：甲醇（色譜純）、亞鐵氰化鉀、乙酸鋅、無(wú)水乙醇、正己烷、乙酸銨、氨水。除非另有說(shuō)明，分析中僅使用分析純?cè)噭┖虶B/T 6682-2008中規(guī)定的一級(jí)水。標(biāo)準(zhǔn)品（1.00 mg/mL）：苯甲酸、山梨酸和糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2 試劑溶液及標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

1.2.1 試劑溶液

①氨水溶液（1+99）：吸取1 mL氨水至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度。②亞鐵氰化鉀溶液（92 g/L）：稱取53 g亞鐵氰化鉀至500 mL容量瓶中，加適量水溶解，用水定容至刻度。③乙酸鋅溶液（183 g/L）：稱取110 g乙酸鋅至500 mL容量瓶中，加適量水溶解，加入30 mL冰乙酸，用水定容至刻度。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

①移取濃度為1.0 mg/mL的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.0 mL至10 mL容量瓶中用水定容，配制成100.0 μg/mL的混標(biāo)工作液。②在6個(gè)液相小瓶中分別準(zhǔn)確移入1 000.0、990.0、950.0、900.0、800.0、500.0、0.0 μL的水，再分別準(zhǔn)確移取上述100.0 μg/mL的混標(biāo)工作液 0.0、10.0、50.0、100.0、200.0、500.0、1 000.0 μL至其中，蓋蓋搖勻，配制成最終濃度為0.0、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0的7種混標(biāo)溶液；③另取2個(gè)液相小瓶分別準(zhǔn)確移入980.0、960.0 μL的水，再分別準(zhǔn)確移取上述10.0 μg/mL的混標(biāo)溶液20.0、40.0 μL至其中，蓋蓋搖勻，配制成最終濃度為0.2、0.4 μg/mL的兩種混標(biāo)溶液。④最終 得 到 0.0、0.2、0.4、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0 μg/mL共9個(gè)濃度的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的混標(biāo)溶液，分別注入液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)峰面積。

1.3 主要儀器

高效液相色譜儀（Agilent Technologies 1260 Infinity），高速冷凍離心機(jī)，大型超聲波提取器，隔膜真空泵，多管渦旋振蕩器，分析天平

1.4 液相色譜條件

色譜柱，Agilent ZORBAX SB-C18，5 μm，30 ℃；流動(dòng)相等度，B泵5%甲醇，D泵95% 20 mmol/L乙酸銨；流速，1.0 mL/min；進(jìn)樣量，10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)，UV 230 nm。

1.5 樣品處理

1.5.1 一般性試樣（果汁）

稱取樣品至50 mL離心管中，加水約25 mL，渦旋混勻，50 ℃水浴超聲10 min，8 000 r/min離心5 min，上清液移至50 mL容量瓶中。底部殘?jiān)铀?0 mL左右，渦旋混勻，50 ℃水浴超聲10 min，8 000 r/min離心5 min，水相移至同一容量瓶中，放冷，用水定容至刻度線，搖勻，上清液用0.22 μm濾膜過(guò)濾，待測(cè)。

1.5.2 含膠基的試樣（果凍）

稱取樣品至50 mL離心管中，加水約25 mL，渦旋混勻，70 ℃水浴超聲10 min，50 ℃水浴超聲20 min，8 000 r/min離心5 min，上清液移至50 mL容量瓶中。殘?jiān)铀?0 mL左右，渦旋混勻，50 ℃水浴超聲20 min，8 000 r/min離心5 min，水相移至同一容量瓶中，放冷，用水定容至刻度線，搖勻，上清液用0.22 μm濾膜過(guò)濾，待測(cè)。

1.5.3 高油脂試樣（植物油）

稱取樣品至50 mL離心管中，加正己烷10 mL，60 ℃水浴加熱5 min，并不時(shí)振搖，加氨水溶液（1＋99）25 mL、乙醇1 mL，渦旋混勻，50 ℃水浴超聲20 min，加入亞鐵氰化鉀溶液2 mL、乙酸鋅溶液2 mL，混勻，10 000 r/min離心10 min，棄去有機(jī)相，水相轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶。殘?jiān)铀?0 mL左右，渦旋混勻，50 ℃水浴超聲20 min，10 000 r/min離心10 min，水相移至同一容量瓶中，放冷，用水定容至刻度線，搖勻，上清液用0.22 μm濾膜過(guò)濾，待測(cè)。

2 加標(biāo)回收及精密度實(shí)驗(yàn)

采用果汁、果凍、食用油作為加標(biāo)基質(zhì)，分別在10、50、100 mg/kg 3個(gè)點(diǎn)進(jìn)行3水平加標(biāo)，每個(gè)點(diǎn)做6個(gè)平行，每個(gè)點(diǎn)的6個(gè)平行數(shù)據(jù)計(jì)算RSD值，選用3個(gè)平行數(shù)據(jù)計(jì)算加標(biāo)回收率。加標(biāo)回收及精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表1。

表1 加標(biāo)回收及精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

由表1可知，樣品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的平均回收率為96.5%、92.5%、99.8%。被測(cè)組分含量10 mg/kg的，RSD≤7.5%；被測(cè)組合含量50 mg/kg和100 mg/kg的，RSD≤5.3%，均符合GB/T 27074-2008的要求。

3 結(jié)語(yǔ)

在苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的檢測(cè)上，采用高效液相色譜法，通過(guò)外標(biāo)法定量，加標(biāo)回收及精密度實(shí)驗(yàn)都取得了較好的效果。

[1]萬(wàn)玉萍，段志敏，林 信，等.食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉含量檢測(cè)[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志，2005.21（6）：759-760.