染色體微陣列用于胚胎停育及自然流產(chǎn)原因的篩查

龐佳倫 馬 娜 彭 瑩 王 華 賈政軍

湖南省婦幼保健院(長沙，410000)

孕早期胚胎停育及自然流產(chǎn)的發(fā)生率超過1%[1]，嚴(yán)重影響患者的身心健康。輔助生殖技術(shù)(ART)雖然大大提高了妊娠率，但60%以上受術(shù)者發(fā)生自然流產(chǎn)和胚胎停育，查明原因?qū)μ岣呷焉锫始邦A(yù)防自然流產(chǎn)意義重要。盡管造成胚胎停育及自然流產(chǎn)的因素很多且存在諸多爭議，但染色體異常是多數(shù)學(xué)者認(rèn)可的最主要原因[2]。染色體異常檢測常采用絨毛細(xì)胞培養(yǎng)染色體G顯帶核型分析技術(shù)，但分辨率和敏感度較低，漏檢率和誤檢率較高。近年開展的染色體微陣列技術(shù)(CMA)在一定程度上克服了上述缺陷，對篩查有顯著的指導(dǎo)意義[3]。本文對此技術(shù)的臨床應(yīng)用進(jìn)行總結(jié)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性收集2017年8月-2018年3月本院確診為胚胎停育、自然流產(chǎn)并行清宮術(shù)的臨床資料(病例組)，納入標(biāo)準(zhǔn)為年齡21～42歲、無嚴(yán)重宮內(nèi)疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)[4-5]為患有子宮內(nèi)膜異位癥、子宮肌瘤等影響胚胎著床、發(fā)育的因素，男方精子不成熟。選擇同期正常妊娠女性(對照組)。本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 染色體檢測

1.2.1采集標(biāo)本及提取DNA[6]將新鮮絨毛組織標(biāo)本浸泡在裝有無菌磷酸緩沖鹽液離心管內(nèi)，采用基因組DNA提取試劑盒提取DNA并檢測濃度及純度，待測DNA含量應(yīng) 25g，-20℃存儲備用。

1.2.2單核苷酸多態(tài)性芯片雜交[7-9]使用CMA分析系統(tǒng)(Affymetrix GCS3000Dx v.2)檢測，Affymetrix Cytoscan 750K 芯片備檢，操作嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組對象基本情況

病例組86例，年齡(31.2±0.3)歲(21～42歲)，體質(zhì)量指數(shù)(22.6±1.5)kg/m2；第一胎79例，二胎7例；臨床癥狀表現(xiàn)為下腹疼痛31例(36.0%)，陰道出血32例(37.2%)、精神不佳23例(26.7%)；早期流產(chǎn)46例(53.5%)，晚期流產(chǎn)29例(33.7%)、胚胎停育11例(12.8%)；自然妊娠43例(50.0%)，宮腔內(nèi)人工受精28例(32.6%)、ART治療15例(17.4%)。對照組33例，年齡(31.5±0.2)歲(20～43歲)，體質(zhì)量指數(shù)(22.9±1.9)kg/m2；第一胎28例，二胎4例；自然妊娠16例(48.6%)，宮腔內(nèi)人工受精11例(33.3%)、ART治療16例(18.2%)。兩組一般情況比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。

2.2 不同妊娠結(jié)局者絨毛組織CMA異常情況比較

兩組均有不同程度異常染色體和非整倍體。病例組86例中，異常染色體65例(75.6%)、非整倍體56例(65.1%)；早期流產(chǎn)、晚期流產(chǎn)和胚胎停育的異常染色體和非整倍體發(fā)生率均高于對照組，且早期流產(chǎn)組高于胚胎停育組(P<0.05)，見表1。

2.3 妊娠方式與絨毛組織CMA異常關(guān)系

不同妊娠方式，絨毛組織CMA異常染色體和非整倍體發(fā)生率病例組均高于對照組(P<0.05)，但病例組中未見差異(P>0.05)，見表2。

表1 兩組不同妊娠結(jié)局者CMA異常類型比較[例(%)]

*與對照組比較#與早期流產(chǎn)組比較P<0.05

表2 兩組不同妊娠方式絨毛組織CMA異常比較[例(%)]

*與對照組同類妊娠方式比較P<0.05

2.4 病例組染色體異常類型

病例組中染色體異常65例中，異常類型分別為常染色體三體23例(35.4%)，常染色體單體15例(23.1%)，常染色體雙三體14例(21.5%)及X單體13例(20.0%)。

3 討論

胚胎停育及自然流產(chǎn)導(dǎo)致因素很多，如子宮異常、生殖道感染及不良環(huán)境等，其中色體異常是最為常見也是最重要的病因[10-11]。本次結(jié)果顯示，與正常妊娠對照組比較，胚胎停育及自然流產(chǎn)的病例組絨毛組織異常染色體及非整倍體等發(fā)生率明顯增高，提示檢測早孕絨毛組織染色體對評估胚胎停育及自然流產(chǎn)有一定臨床價值。同時在早期流產(chǎn)患者中，異常染色體或非整倍體均明顯增高，分析原因可是染色體異常的胚胎著床功能降低，提早出現(xiàn)了發(fā)育停滯；而妊娠方式與絨毛組織染色體異常類型未見差異。但有文獻(xiàn)認(rèn)為[12-13]，與自然妊娠相比，ART出現(xiàn)染色體異常的概率降低，與植入前胚胎經(jīng)過體外人工優(yōu)選相關(guān)。本文未見這種差異，除了納入的案例相對較外小，可能與CMA技術(shù)缺陷有關(guān)，比如CMA難以檢測染色體某些突變，無法檢測低水平的嵌合體、堿基的插入或缺失，DNA甲基化異常和其他堿基修飾異常等[14]。

本文病例組出現(xiàn)異常染色體類型包括常染色體三體、常染色體單體、常染色體雙三體及X單體，其中染色體三體發(fā)生率最高，與文獻(xiàn)報道相似[12-15]。染色體三體是導(dǎo)致早期胚胎停育的主要因素，產(chǎn)前診斷可最大限度防止染色體異?；純旱某錾鶾15]。有研究認(rèn)為染色體數(shù)目異常還與妊娠女性年齡相關(guān)[16-17]，由于本文納入者年齡跨度不大，提示今后有必要納入更多高齡女性案例分析研究。

目前，我國許多醫(yī)療機構(gòu)已經(jīng)開展了CMA用于產(chǎn)前診斷，但實踐時間不長，實際診斷和操作經(jīng)驗不足，也給該技術(shù)的應(yīng)用帶來了諸多挑戰(zhàn)。但在發(fā)現(xiàn)染色體異常相關(guān)的出生缺陷方面的優(yōu)勢仍無可比擬[19-19]。而應(yīng)用該技術(shù)檢測絨毛組織，對預(yù)測妊娠期胚胎停育和自然流產(chǎn)，具有重要臨床指導(dǎo)意義。