陜西省靖邊縣奶牛布魯氏菌病血清學(xué)調(diào)查

盛麗芬，張 利，董 平，武 艷，王宇慧，白崇生

（1. 靖邊縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陜西靖邊 718500；2. 榆林市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陜西榆林 719000）

布魯氏菌?。ㄒ韵潞?jiǎn)稱(chēng)布?。┦怯刹剪斒暇鸬囊环N人獸共患傳染病，是我國(guó)的二類(lèi)動(dòng)物疫病[1]，牛、羊、豬、鹿等多種動(dòng)物對(duì)其易感。人感染后嚴(yán)重影響生殖健康和生活質(zhì)量，甚至喪失勞動(dòng)能力[2]。靖邊縣是我國(guó)布病老疫區(qū)，對(duì)奶牛布病一直堅(jiān)持采取監(jiān)測(cè)、凈化的防控措施，但防控成效不佳。為進(jìn)一步摸清靖邊縣奶牛布病的流行情況，采集全縣存欄奶牛血清樣品進(jìn)行血清學(xué)抗體檢測(cè)，同時(shí)對(duì)比3種不同血清學(xué)檢測(cè)方法的一致性，為靖邊縣布病防控和凈化措施的制定提供參考。

1 材料與方法

1.1 血清樣品

本次研究的待檢血清采自全縣所有奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）的所有存欄奶牛，共98個(gè)場(chǎng)（戶），采集樣品總數(shù)為1 227份，其中規(guī)模化奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)2個(gè)，采集樣品682份，散養(yǎng)戶96個(gè)，采集樣品545份。

1.2 檢測(cè)試劑

虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清：購(gòu)自青島易邦生物工程有限公司；試管凝集試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清：購(gòu)自哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司；苯酚：購(gòu)自天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開(kāi)發(fā)有限公司；布病抗體C-ELISA檢測(cè)試劑盒：購(gòu)自SVANOVA公司。

1.3 檢測(cè)方法

按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T18646—2002）進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）、試管凝集試驗(yàn)（SAT）以及結(jié)果判定。RBPT 和SAT均為陽(yáng)性時(shí)判定為個(gè)體陽(yáng)性；競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（C-ELISA）的操作方法和結(jié)果判定，按照C-ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.4 數(shù)據(jù)分析

按表1方法進(jìn)行3種檢測(cè)方法結(jié)果的兩兩對(duì)比分析。按照下列公式計(jì)算一致率和Kappa 值，分析3種方法的一致性：

表1 不同檢測(cè)方法結(jié)果的兩兩對(duì)比分析單位：份

2 結(jié)果

1227份血清樣品的布病抗體檢測(cè)結(jié)果顯示：2017年全縣奶牛布病群體陽(yáng)性率為13.27%（13/98），個(gè)體陽(yáng)性率為3.50%（43/1 227）。具體結(jié)果見(jiàn)表2。3種檢測(cè)方法結(jié)果的一致率均大于99%，Kappa值均大于0.90（表3）。

表2 布病血清抗體檢測(cè)的判定結(jié)果匯總

表3 3種檢測(cè)方法的結(jié)果對(duì)比

3 分析與討論

靖邊縣禁止對(duì)奶牛實(shí)施布病免疫，因此抗體陽(yáng)性均為布病感染陽(yáng)性。2017年靖邊縣奶牛布病個(gè)體陽(yáng)性率為3.5%，高于我國(guó)規(guī)定的控制區(qū)標(biāo)準(zhǔn)[3]，表明該縣奶牛布病流行較為嚴(yán)重，布病防控工作仍需加強(qiáng)。從不同養(yǎng)殖環(huán)境分析，規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)奶牛布病陽(yáng)性率為0.29%，低于控制區(qū)而高于穩(wěn)定控制區(qū)標(biāo)準(zhǔn)，而散養(yǎng)戶奶牛布病陽(yáng)性率為7.52%，遠(yuǎn)高于控制區(qū)標(biāo)準(zhǔn)，表明散養(yǎng)奶牛是該縣布病防控的重點(diǎn)畜群，其原因有待進(jìn)一步分析研究。

一致率可用于檢驗(yàn)檢測(cè)方法的相關(guān)程度，而Kappa 值是評(píng)價(jià)一致性的測(cè)量值。一般認(rèn)為，一致率越高，檢測(cè)方法相關(guān)程度就越高；Kappa值≥0.75，表明一致程度較好[4]。從檢測(cè)結(jié)果對(duì)比來(lái)看，RBPT、SAT和C-ELISA方法的一致率極高，均大于99%，Kappa值均大于0.90，說(shuō)明這3種檢測(cè)方法具有良好的一致性。這與劉朋等[5]的研究結(jié)果一致。

目前，布病的血清學(xué)檢測(cè)方法較多，但沒(méi)有任何一種血清學(xué)方法適合于所有個(gè)體或群體的流行病學(xué)調(diào)查。用不同的血清學(xué)檢測(cè)方法對(duì)個(gè)體進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，因敏感性和特異性差異，導(dǎo)致檢查的效果有一定的局限性[6]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[7]，RBPT操作簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉、敏感性高，但特異性低，適合于樣品初篩；SAT和C-ELISA相比，C-ELISA具有更高的特異性，SAT的敏感性和特異性都低于C-ELISA。因此，C-ELISA 方法較RBPT和SAT具有更好的診斷效果。在奶牛布病監(jiān)測(cè)凈化過(guò)程中，將上述3種血清學(xué)檢測(cè)方法聯(lián)合應(yīng)用，能有效降低出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性的概率，能夠更加準(zhǔn)確識(shí)別布病野毒感染牛，從而減少布病陽(yáng)性牛處理過(guò)程中的誤殺和漏殺現(xiàn)象。

4 結(jié)論

本次調(diào)查是對(duì)全縣所有存欄奶牛布病流行情況的摸底普查。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，全縣奶牛布病流行率為3.50%，其中規(guī)模場(chǎng)奶牛為0.29%，散養(yǎng)戶奶牛為7.52%。該結(jié)果高于我國(guó)控制區(qū)標(biāo)準(zhǔn)，尤其是散養(yǎng)奶牛，因此該地的布病防控工作仍需加強(qiáng)。為驗(yàn)證RBPT、SAT和C-ELISA 3種方法檢測(cè)結(jié)果的一致性，開(kāi)展了對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)3種檢測(cè)方法具有良好的一致性，因此在布病監(jiān)測(cè)凈化時(shí)，可將上述3種血清學(xué)檢測(cè)方法聯(lián)合應(yīng)用，以準(zhǔn)確檢出野毒感染牛，從而避免誤殺和漏殺。

[1] 閆昱，屈雷. 陜北白絨山羊選育進(jìn)展（2003—2014年）[J]. 中國(guó)畜牧業(yè)，2014（21）：27-29.

[2] 權(quán)松安，彭珂珊，田發(fā)展，等. 陜北高效設(shè)施養(yǎng)羊業(yè)發(fā)展對(duì)策[J]. 草業(yè)科學(xué)，2004（11）：52-55.

[3] 農(nóng)業(yè)部，國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委. 國(guó)家布魯氏菌病防治計(jì)劃（2016—2020年）[A]. 北京：農(nóng)業(yè)部，國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委，2016-09-07.

[4] 齊景文，依穎新，周艷紅，等. 牛羊布魯氏菌病四種血清學(xué)檢測(cè)方法對(duì)比分析[J]. 中國(guó)動(dòng)物檢疫，2015，32（4）：57-59.

[5] 劉朋，陳萌，程子龍，等. 山東省部分地區(qū)奶牛場(chǎng)布魯氏菌病血清學(xué)調(diào)查[J]. 中國(guó)動(dòng)物檢疫，2017，34（10）：1-2.

[6] GODFROID J，SAEGERMAN C，WELLEMANS V，et al. How to substantiate eradication of bovine rucellosis when aspecific serological reactions occur in the course of brucellosis testing[J]. Veterinary microbiology，2002，90：461-477.

[7] 蔡一非，鐘旗，伊日蓋，等. 兩奶牛場(chǎng)布氏桿菌分離鑒定及四種血清學(xué)檢測(cè)方法比較[J]. 中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào)，2009，25（5）：456-459.