高效液相串聯(lián)質(zhì)譜法檢測辣椒油中的羅丹明B

羅丹明B是一種被懷疑致癌物質(zhì)，又稱玫瑰紅B，或堿性玫瑰精，俗稱花粉紅，是一種具有鮮桃紅色的人工合成的染料。辣椒油中羅丹明B的檢測是日常檢測項目，一般采用液相串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行檢測。本文優(yōu)化了已有方法，簡潔方便地檢測辣椒油中的羅丹明B。

實驗部分

儀器、試劑與材料ACQUⅠTY UPLC Ⅰ-Class超高效液相色譜儀、Xevo TQ-S micro電噴霧串聯(lián)四級桿質(zhì)譜儀；PCX柱子；乙腈，色譜純；正己烷，色譜純；實驗用水為milli-Q高純水；羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液。

實驗條件 液相色譜條件：Waters ACQUⅠTY UPLC BEH C18柱（50mmx2.1mm,1.7μm）色譜柱；柱溫40oC；進(jìn)樣量1μL；流速為0.3mL/min；流動相A為0.1%甲酸水溶液，B為乙腈。梯度洗脫程序為：0.00～1.00min,85%～85%A；1.00～2.00min,85%～15%A；2.00～3.00min,15%～15%A；3.00～4.00min,15%～85%A；4.00～5.00min,85%～85%A。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源；正離子掃描；毛細(xì)管電壓0.5kV；離子源溫度150oC；去溶劑氣500oC；去溶劑氣流量（氮氣）800L/h；氣簾氣流量50L/h；多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式檢測；羅丹明B的離子監(jiān)測條件為下表所示。

物質(zhì) 監(jiān)測離子(m/z)Cone voltage(V)Collision energy(V)羅丹明B 443.3/399.2 30 15 443.3/355.2 30 17

樣品處理：取1.0g辣椒油，加入10ml含2%三氯乙酸的正己烷溶液，超聲萃取5min。依次用5ml甲醇，5ml水，5ml甲醇活化PCX柱子。10ml上述正己烷提取液直接上樣凈化，棄去濾液。5ml氨水甲醇溶液洗脫，收集洗脫液。洗脫液用氮氣吹至近干，用初始流動相溶液重新溶解，定容至2ml。渦旋混勻后，LCMSMS測定。

結(jié)果與討論

樣品提取方法的優(yōu)化 本實驗對比了乙腈、正己烷、甲醇、二氯甲烷等萃取溶劑，結(jié)果表明，辣椒油易溶于正己烷，不易溶于乙腈等，所以采用正己烷溶液提取。羅丹明B在酸性提取液中呈離子狀態(tài)，有利于在PCX柱子上的保留，所以添加三氯乙酸調(diào)節(jié)酸性。

質(zhì)譜分析條件的優(yōu)化 將一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液以注射式連續(xù)直接進(jìn)樣的方式進(jìn)行一級質(zhì)譜全掃描分析，得到羅丹明B的準(zhǔn)分子離子峰([M+H]+)，然后選取準(zhǔn)分子離子峰進(jìn)行轟擊，通過優(yōu)化碰撞能量、質(zhì)譜分辨率等參數(shù)，最大化地提高檢測的靈敏度。通過分析二級質(zhì)譜信息得出，羅丹明B的二級質(zhì)譜碎片主要包括m/z399.2，m/z355.2。根據(jù)歐盟的標(biāo)準(zhǔn)，選取443.3/399.2，443.3/355.2作為監(jiān)測離子。

流動相條件的優(yōu)化 本研究考察了甲醇+0.1%甲酸水溶液，乙腈+0.1%甲酸水溶液，甲醇+水溶液，乙腈+水溶液四種混合溶液體系。結(jié)果表明，含有0.1%甲酸的水溶液體系響應(yīng)值更好，原因是羅丹明B采用正離子模式測定，增加酸的濃度有利于產(chǎn)物的離子化。甲醇是一種親核試劑，我們發(fā)現(xiàn)它與三苯甲烷結(jié)構(gòu)化合物能夠發(fā)生親核反應(yīng)，因此不采用甲醇作為流動相。反應(yīng)式如圖所示。

線性范圍、檢出限、回收率與精密度 測定其標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明，在線性范圍5～100μg/L，線性關(guān)系良好，其相關(guān)系數(shù)r大于0.9995。檢出限一般以方法檢出限作為其檢出限，按照10倍信噪比作為其方法檢出限，計算其檢出限為1ug/L。選用經(jīng)過測定不含有羅丹明B的辣椒油樣品，分成三組。三組樣品分別添加10ug/L、20ug/L、50ug/L低、中、高三個濃度，按照本方法進(jìn)行添加回收率和精密度（n=3）實驗，計算得到回收率為81%～107%，RSD為2.5～3.7%。

對比國標(biāo)SN/T 2430-2010采用GPC凈化的方式，本方法處理簡單，快捷，適合于大量樣品的處理，為日常生活食品安全的監(jiān)測與預(yù)警提供技術(shù)支持。