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    花生芽中6-芐基腺嘌呤的測定方法研究

    2018-06-05 01:32:05黃銳,廖建萌,曾丹丹
    食品安全導刊 2018年14期
    關鍵詞:乙酸銨腺嘌呤芐基

    建立了高效液相色譜法測定花生芽中6-芐基腺嘌呤含量的方法。6-芐基腺嘌呤的檢測波長為267nm;流動相為甲醇-20mmol/L乙酸銨溶液(50∶50,v/v);前處理的提取方式為超聲波提取法;高效液相色譜法測定花生芽中6-芐基腺嘌呤含量的在1-50mg/L范圍線性良好,相關系數(shù)為0.9998,檢出限為0.1mg/kg,精密度為1.82%,用該方法測定花生芽中6-芐基腺嘌呤含量的回收率在90%以上。

    6-芐基腺嘌呤(6-Benzylaminopurine)分子式是C12H11N5,分子量為225.25,熔點:230℃,形狀為白色晶體,難溶于水,微溶于乙醇等有機溶劑,易溶于酸和堿且性質穩(wěn)定。6-芐基腺嘌呤是一種人工合成的細胞分裂素,主要用于促進細胞分裂、細胞增大、種子發(fā)芽和果實生長等,我國曾經(jīng)允許在豆芽生產(chǎn)上的應用。6-芐基腺嘌呤作為植物生長調(diào)節(jié)劑,其安全性目前沒有結論,并且缺乏食品添加劑工藝必要性,目前我國的標準GB2760已經(jīng)禁止6-芐基腺嘌呤作為食品用加工助劑生產(chǎn)經(jīng)營和使用。

    6-芐基腺嘌呤更多的報道是關于在豆芽生產(chǎn)中的應用,俗稱的“無根粉”主要成分就是6-芐基腺嘌呤,對于花生芽不管是生產(chǎn)方面或者是檢測方面報道較少。花生芽被認為一種食療兼?zhèn)涞氖称?,營養(yǎng)豐富,并富含維生素及各種氨基酸和微量元素,花生芽的生產(chǎn)和銷售越來越普遍,對花生芽的各項指標的檢測方法有研究的意義。

    6-芐基腺嘌呤的檢測方法主要是光譜法和色譜法,光譜法靈敏度不夠,基質干擾大,色譜法具有準確、高效、快速的特點。本論文研究高效液相色譜法測定花生芽中6-芐基腺嘌呤含量的方法,為花生芽中6-芐基腺嘌呤的檢測提供技術參數(shù)。

    材料與方法

    儀器及材料 高效液相色譜儀:LC20AD(日本島津公司);色譜柱:C18柱(250mm×4.6μm,美國waters公司);電子分析天平(日本島津公司);微波爐(美的公司);離心機(sigma公司);超純水系統(tǒng)(德國Millipore公司);刀片式均質器(德國ⅠKA公司);超聲波提取器(上海比朗)。

    6-芐基腺嘌呤標準品純度均大于99%(德國Dr.Erenstorfer公司);甲醇(色譜純,美國CNW公司);乙酸銨(分析純,國藥集團化學試劑有限公司)。

    儀器條件 流動相:甲醇:20mmol/L乙酸銨溶液(50∶50,v/v),等度洗脫。流速:1.0mL/min;色譜柱溫度:40℃;檢測器:二極管陣列檢測器,波長267nm;進樣量:20μL。

    結果與討論

    檢測波長的確定 二極管陣列檢測器能從190nm到900nm的全波段檢測,要檢測6-芐基腺嘌呤首先要確定其檢測波長。配制6-芐基腺嘌呤的標準溶液,濃度為10.0mg/L,上機測定,從測定結果的光譜色譜三維圖發(fā)現(xiàn)在5.8分鐘有明顯的響應,提取該時間點的吸收光譜圖,結果見圖1。

    圖1 6-芐基腺嘌呤的吸收光譜圖

    圖1 中發(fā)現(xiàn)在210nm及267nm處均有吸收頂點,210nm處受到的干擾較大,因此選擇267nm為6-芐基腺嘌呤的檢測波長。

    流動相的選擇 選擇純甲醇、甲醇-20mmol/L乙酸銨溶液(50∶50,v/v)和甲醇-水(50∶50,v/v)三種不同體系的流動相作比較,流速均為為1.0mL/min,進樣濃度為1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤標準溶液,結果見圖2。

    圖2 不同甲醇比例作為流動相的峰面積變化圖

    從圖2中,1號為純甲醇流動相的色譜圖,峰形不對稱,出峰時間過早有可能與其他雜質重合或者分離不好;3號為甲醇-水(50∶50,v/v)流動相的色譜圖,峰形對稱但是峰展寬較大;2號為甲醇-20mmol/L乙酸銨溶液(50∶50,v/v)流動相的色譜圖,峰形對稱并且峰展寬小,乙酸銨在流動相中有改善峰形的作用,因此選擇甲醇-20mmol/L乙酸銨溶液(50∶50,v/v)作為測定6-芐基腺嘌呤的流動相。

    樣品前處理 用甲醇提取花生芽中的6-芐基腺嘌呤,比較幾種不同的提取方式,花生芽直接稱樣20.0g置于100mL的離心管中,加入50mL甲醇,用刀片式均質器均質2分鐘。超聲波提?。河贸暡ㄌ崛∑魈崛?0min;浸泡提?。涸谑覝叵路胖?0小時;微波提?。何⒉ㄌ崛?分鐘;各方法提取結束后冷卻,5000r/min離心10分鐘,取上層溶液過0.45μm濾膜,上機測定,結果見表1。表中微波提取法雖然用時少,但是結果偏低,可能的原因是提取時間不足或者是6-芐基腺嘌呤分解了,超聲波提取效率高,因此選擇超聲波提取法提取花生芽中的6-芐基腺嘌呤。

    表1 花生芽加標提取6-芐基腺嘌呤結果

    方法學驗證 線性關系及檢出限 配制6-芐基腺嘌呤的系列標準溶液,上機測定,高效液相色譜法6-芐基腺嘌呤在1-50mg/L的范圍內(nèi)呈良好的線性關系,相關系數(shù)為0.9998,以基線噪聲的三倍作為測定的檢出限,6-芐基腺嘌呤的檢出限為0.1mg/kg。

    表2 6-芐基腺嘌呤線性及檢出限

    精密度及回收率 進樣10.0mg/L的6-芐基腺嘌呤標準溶液,連續(xù)進樣11次計算精密度,結果見表4,高效液相色譜法測定6-芐基腺嘌呤的精密度為1.82%,精密度符合測定的要求。

    表3 6-芐基腺嘌呤精密度

    取花生芽樣品,稱樣20.0g,添加6-芐基腺嘌呤標準溶液作為回收率的測試,按照3.3的前處理方法處理花生芽樣品,回收率實驗結果見表4。高效液相色譜法測定6-芐基腺嘌呤的回收率在90%以上,滿足分析要求。

    表4 6-芐基腺嘌呤的回收率

    建立了高效液相色譜法測定花生芽中6-芐基腺嘌呤含量的方法。通過提純光譜,確定選擇267nm為6-芐基腺嘌呤的檢測波長;通過比較,選擇甲醇-20mmol/L乙酸銨溶液(50∶50,v/v)作為檢測6-芐基腺嘌呤的流動相,流動加入乙酸銨能夠很好地改善峰形;研究了前處理的提取方式,選擇超聲波提取法提取花生芽中的6-芐基腺嘌呤;對方法進行驗證,高效液相色譜法測定花生芽中6-芐基腺嘌呤含量的在1-50mg/L范圍線性良好,相關系數(shù)為0.9998,檢出限為0.1mg/kg,精密度為1.82%,用該方法測定花生芽中6-芐基腺嘌呤含量的回收率在90%以上。高效液相色譜法測定花生芽中6-芐基腺嘌呤含量的方法準確,高效,可滿足檢測技術要求。

    [1] 沙紅,高燕,楊洪澤, 等.6-芐基腺嘌呤對甜菜種子萌發(fā)的影響[J].中國糖料,2015,(4)∶28-29,32.

    [2] 李小平,陳曉紅,姚潯平, 等.HPLC法測定豆芽中6-芐基腺嘌呤殘留研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志 ,2005,(2)∶149-150,159.

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