豬口蹄疫O型滅活疫苗對豬不同免疫次數(shù)的效果比較

王孝德，李志賢，黃 覺，黃詩惠，禹婷婷

(1.賀州市動物疫病預防控制中心，廣西賀州 542800；2.賀州市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣西賀州 542800)

豬O型口蹄疫是嚴重危害我國養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的疫病,是世界動物衛(wèi)生組織(OIE)規(guī)定必須報告的傳染病之一，我國規(guī)定為一類動物疫病[1-2]。目前，國內(nèi)外預防和控制該病的主要措施是給易感動物接種疫苗，在我國屬于強制免疫病種[3-4]。由于O型口蹄疫流行毒株在不斷的變化中，從2010年開始，O型口蹄疫的流行以O(shè)/MYA98/BY/2010毒株為主，在韓國、越南、日本等地先后報道出現(xiàn)過疫情[5-6]。目前我國豬口蹄疫的強制免疫選用的疫苗毒株以豬口蹄疫O型滅活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)為主，但在生產(chǎn)實踐中由于受多種因素的影響，一些接種過疫苗的易感動物不能達到預期的免疫效果，免疫失敗也時有發(fā)生，甚至可能發(fā)生疫情[7-9]。因此，通過對免疫后的豬進行抗體水平檢測，分析評估免疫效果，切實掌握本地生豬O型口蹄疫免疫情況，為更好制定合理的免疫程序提供科學依據(jù)，確保不發(fā)生區(qū)域性豬O型口蹄疫疫情有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗與試驗用豬 豬口蹄疫O型滅活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)，中農(nóng)威特生物科技股份有限公司生產(chǎn)，政府采購苗，批號為H160307J，由賀州市動物疫病預防控制中心供應。選擇品種一致，在35日齡～38日齡、體重相近，臨床觀察1周后確認健康，經(jīng)檢測O型口蹄疫母源抗體在5log2以下(表1)，未經(jīng)免疫口蹄疫O型滅活疫苗的健康仔豬150頭。

1.1.2 免疫劑量與診斷液 按照說明書要求每頭每次肌肉注射2 mL。本次試驗務(wù)必要求操作規(guī)范，無失誤。操作時由助手保定豬，然后注射者抓住豬耳，根據(jù)豬的大小在豬耳根后2 cm～5 cm處垂直入針注射?？谔阋逴型液相阻斷ELISA試劑盒，中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號 20160830101-8。

1.1.3 主要儀器 酶標儀由帝肯上海貿(mào)易有限公司生產(chǎn)；單道移液器、多道移液器均由德國Tranferspette公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 免疫分組和方法 在某一規(guī)模豬場(存欄母豬在100頭以上)選擇90頭35日齡～38日齡的試驗豬隨機分成A、D、G 3組，每組30頭；另一規(guī)模豬場(存欄母豬50頭)選擇30頭35日齡～38日齡的試驗豬隨機分成B、E、H 3組，每組10頭；某村選擇5戶散養(yǎng)戶，選擇35日齡～38日齡的豬各6頭，共30頭試驗豬分成C、F、I 3組(3組中每戶2頭)，每組10頭。標記飼養(yǎng)。

A、B、C 3組為1次免疫組，即在35日齡～38日齡注射2 mL豬口蹄疫O型滅活疫苗進行第1次免疫接種。D、E、H 3組為2次免疫組，即在第1次免疫后間隔28 d，進行2次免疫，免疫劑量和方法同第1次免疫。C、F、I 3組為3次免疫組，即在第2次免疫后間隔28 d，進行第3次免疫，免疫劑量和方法同第1次免疫。

1.2.2 采血日齡 A、B、C 3組分別于第1次免疫后的28、56、84 d前腔靜脈采血，收集血清，存于-20℃?zhèn)錂z。D、E、H 3組在第1次免疫后28 d前腔靜脈采血采血，收集血清，存于-20℃?zhèn)錂z。當天進行第2次免疫,在距第1次免疫后的56 d、84 d分別前腔靜脈采血，收集血清，存于-20℃?zhèn)錂z。C、F、I 3組在第1次免疫后28 d前腔靜脈采血，收集血清，存于-20℃?zhèn)錂z；當天進行第2次免疫，距第1次免疫后56 d前腔靜脈采血，當天進行第3次免疫，距第1次免疫后84 d前腔靜脈采血。收集血清，存于-20℃?zhèn)錂z。

1.2.3 檢測方法與結(jié)果判定 采用液相阻斷ELISA方法檢測，每塊板檢測按10頭份設(shè)計，具體操作參照試劑盒說明書。判定標準為：當抗體效價≥6log2，被檢血清的免疫抗體為合格；抗體效價<6log2，被檢血清的免疫抗體為不合格。

2 結(jié)果

試驗豬均未觀察到有食欲減退、跛行等不良反應。第1次免疫后免疫抗體產(chǎn)生情況(表2)和不同免疫次數(shù)仔豬產(chǎn)生的口蹄疫抗體效價及合格率(表3)表明，第1次免疫后28 d檢測，免疫抗體效價較低，免疫抗體總合格率僅為12.7%，規(guī)模養(yǎng)豬場為13.3%，略高于農(nóng)村散養(yǎng)戶的10%；距離第1次免疫后56 d和84 d檢測，免疫抗體效價較低，免疫抗體總合格率為26%，規(guī)模養(yǎng)豬場為30%，略高于農(nóng)村散養(yǎng)戶的10%。

表1 免疫前試驗仔豬母源抗體檢測情況

表2 1次免疫免疫抗體檢測情況

第2次免疫后免疫抗體產(chǎn)生情況(表4)和不同免疫次數(shù)仔豬產(chǎn)生的口蹄疫抗體效價及合格率(表3)表明，經(jīng)過第2次免疫接種豬口蹄疫O型滅活疫苗后，距離第1次免疫后56 d檢測，免疫抗體總合格率達45%，規(guī)模養(yǎng)豬場為47.5%，略高于農(nóng)村散養(yǎng)戶的35%；距離第1次免疫后84 d檢測，免疫抗體總合格率達56%，規(guī)模養(yǎng)豬場為57.5%，略高于農(nóng)村散養(yǎng)戶的50%。

第3次免疫后免疫抗體產(chǎn)生情況(表5)和不同免疫次數(shù)仔豬產(chǎn)生的口蹄疫抗體效價及合格率(表3)表明，經(jīng)過3次免疫接種豬口蹄疫O型滅活疫苗后，距離第1次免疫后84 d檢測，免疫抗體合格率達98%，規(guī)模場和散養(yǎng)戶免疫抗體總合格率都達90%以上。

3 討論

3.1 母源抗體效價的高低對仔豬免疫后免疫抗體的產(chǎn)生有影響

未免疫豬口蹄疫O型滅活疫苗的斷奶仔豬體內(nèi)O型口蹄疫抗體效價與母豬的免疫情況有關(guān)，在母豬配種前，加強免疫豬口蹄疫O型滅活疫苗的斷奶仔豬免疫抗體合格率高、持速時間長，到49日齡時，免疫抗體合格率依然可達80%[10-11]。因此，本試驗通過母源抗體效價檢測，選用母源抗體效價都在5log2以下的試驗仔豬。根據(jù)當?shù)貙嶋H情況，母豬的免疫一般都是間隔4個多月補針，多數(shù)未在母豬懷孕前加強免疫。因此，本試驗結(jié)果在指導生產(chǎn)實踐中更具有指導作用，更接近當?shù)氐膶嶋H情況。

表3 不同免疫次數(shù)仔豬的口蹄疫抗體水平及合格率

表4 2次免疫免疫抗體檢測情況

表5 3次免疫免疫抗體檢測情況

3.2 同樣的免疫程序，豬口蹄疫O型滅活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)與豬口蹄疫O型滅活疫苗(OZK/93株)不同

按薛新梅等[12]報道的口蹄疫母源抗體對仔豬疫苗免疫的影響看：二次免疫豬口蹄疫O型滅活疫苗(OZK/93株)后一個月，檢測到的免疫抗體合格率達85%，平均抗體效價在7.65log2，與我們在2010年至2011年上半年期間(使用OZK / 93 株)的滅活疫苗)檢測到的免疫抗體合格率84.17%基本相合；2011年下半年開始使用豬口蹄疫O型滅活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)后，在2011年下半年至2012年日常監(jiān)測到的二次免疫豬口蹄疫O型滅活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)的斷奶仔豬免疫抗體合格率43.67%，抗體滴度不高，離散度較大。本次試驗在2次免疫后28 d時，檢測結(jié)果顯示免疫抗體合格率在45%，2次免疫后56 d時，檢測結(jié)果顯示免疫抗體合格率達56%，仍達不到農(nóng)業(yè)部要求的免疫抗體合格率達70%以上的要求。說明豬口蹄疫O型(O/MYA98/BY/2010株)毒株比以前口蹄疫O型毒株(如OZK/93株)更能降低豬對這種毒株的應答能力，對豬的危害性就更大。

3.3 3次免疫后免疫抗體合格率較高

3次免疫后28 d時，檢測結(jié)果顯示免疫抗體合格率達98%，且免疫抗體滴度保持較高狀態(tài)，抗體效價達到9 log2，超過農(nóng)業(yè)部要求的免疫抗體合格率達70%以上的要求。且3次免疫后抗體滴度標準差為1.05 log2，變異系數(shù)為13.125%，表明群體抗體均衡度高、離散度低，則疫苗的免疫效果就好。

本次試驗包括大型養(yǎng)豬場、中小養(yǎng)殖場和散養(yǎng)戶，試驗結(jié)果表明，大型養(yǎng)豬場由于科學養(yǎng)殖水平高，比中小養(yǎng)豬場的免疫情況要好，但差距不是非常明顯，農(nóng)村散養(yǎng)戶的免疫抗體合格率與大型養(yǎng)豬場和中小養(yǎng)豬場的100%免疫抗體合格率相比差距較小，3次免疫后免疫抗體合格率達90%，說明3次免疫后，規(guī)范操作，不論是大型養(yǎng)豬場、中小養(yǎng)殖場還是散養(yǎng)戶，豬口蹄疫O型(O/MYA98/BY/2010株)滅活苗的免疫抗體合格率都能達到農(nóng)業(yè)部要求的70%以上。

豬口蹄疫O型(O/MYA98/BY/2010株)毒株毒力強，1次、2次免疫后，豬產(chǎn)生的免疫抗體滴度不高、免疫抗體合格率未能達到農(nóng)業(yè)部要求的70%以上，3次免疫后，免疫抗體合格率可達到80%以上，免疫抗體滴度整齊、離散度低，達到國家要求，若能進行3次免疫，免疫效果將更好，在規(guī)模養(yǎng)殖場應大力提倡。由于當前養(yǎng)豬業(yè)，要免疫豬瘟、高致病性豬藍耳病、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒等疫苗，本試驗是在不影響其他病種免疫的情況下進行。因此，對豬口蹄疫O型(O/MYA98/BY/2010株)滅活苗的免疫效果或有影響，但更接近生豬生產(chǎn)的實際情況，對一些不具備檢測口蹄疫O型免疫抗體的養(yǎng)殖戶制定豬O型口蹄疫(O/MYA98/BY/2010株)的免疫程序具有重要的指導作用。

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