SBP1在鼻咽癌患者病理組織標本的表達分析及臨床意義

秦開烈 張自雄 許昱

硒被認為是有效的抗癌劑，硒結(jié)合蛋白1（SBP1）是其在細胞代謝中產(chǎn)物之一，是發(fā)揮硒抗癌作用的重要中介，且在惡性腫瘤中呈現(xiàn)低表達趨勢，并可能與患者預后密切相關而成為研究的熱點[1]。SBP1可以存在于細胞漿和細胞核，也有報道提出在不同的細胞類型、分化程度和環(huán)境信號下SBP1定位可能有所差異[2]，這種差異甚至可能和腫瘤的惡性程度相關系。SBP1在人體各種器官組織中均有表達，包括心臟、肺、腎和腸道等等，但是引起人們關注的是一些在腫瘤細胞中的低表達趨勢。我們以恩施地區(qū)的鼻咽癌患者作為研究對象，對其病理組織標本進行了檢測分析，對其治療后的預后進行了追蹤隨訪，分析結(jié)果如下。

資料與方法

1 臨床資料

選取2007～2012年在我院取材確診為低分化鱗狀細胞癌并進行常規(guī)放化療的99例患者作為研究對象，其中男67例，女32例，年齡15～73歲，中位數(shù)為56歲。按照TNM標準進行分級分期，如表1。

表1 99例鼻咽癌患者分級分期情況（例，%）

入組標準為：①在我院病理科取材病理檢查確診為（鼻咽部）低分化鱗狀細胞癌的患者； ②在我院腫瘤科進行了常規(guī)的放射治療（達到直線加速器根治性劑量標準）和化療（標準方案順鉑+5-氟兩個療程及以上）；③除患鼻咽癌以外其他身體機能狀態(tài)良好；④確認最后死因為鼻咽癌所致或鼻咽癌晚期并發(fā)癥；⑤較好的隨訪依從性。

2 病理組織標本檢測

查找這些鼻咽癌患者蠟封病理組織標本，常規(guī)切片再次確認鼻咽癌的組織標本后進行免疫組化檢測SBP1在標本組織中的表達，其結(jié)果由兩位病理科副主任醫(yī)師進行評判，并進行定性評級，分為“0～+++”四個等級，其中“0”代表病理組織標本基本沒有SBP1表達，即每高倍視野下未見標記蛋白；“+”代表病理標本組織有零星或少量SBP1表達，即每高倍視野下可見標記蛋白細胞少于25%；“++”代表病理標本組織有較多的SBP1表達，即每高倍視野下可見標記蛋白細胞大于25%，但少于50%；“+++”代表病理標本組織有大量的SBP1表達，即每高倍視野下可見標記蛋白的細胞大于50%。最后將“0，+”定義為SBP1在組織標本中低表達，將“++，+++”定義為SBP1在組織標本中高表達。SBP1在鼻咽癌及鼻咽正常黏膜組織表達的典型表現(xiàn)，見圖1。

圖1 SBP1在病理組織標本中表達水平分級比較。圖1-A代表“0”；圖1-B代表“+”；圖1-C代表“++”；圖1-D代表“+++”。

3 鼻咽癌患者治療后的追蹤隨訪

通過整理腫瘤科鼻咽癌患者的跟蹤隨訪記錄，入組病例均達到了以下隨訪要求：①入組患者每半年有一次電話隨訪記錄，直至死亡或本項研究開始之際；②入組患者每一年有一次入院全身體檢記錄，體檢內(nèi)容包括鼻咽部電子喉鏡檢查、鼻咽部水平位CT、頸部及全身主要臟器彩超檢查，并將復診結(jié)果記錄在案；③隨訪到鼻咽癌死亡患者能夠精確時間到月，同時明確死亡原因為鼻咽癌或其并發(fā)癥；④本研究的隨訪截止日期為2016年10月。

4 統(tǒng)計學分析

運用卡方檢驗分析鼻咽癌病理組織標本中SBP1的表達趨勢。運用kaplan meier方法分析評估鼻咽癌患者病理組織標本SBP1表達與患者無轉(zhuǎn)移生存時間、無復發(fā)生存時間以及總體生存時間的相關性。運用二元邏輯回歸分析評估SBP1表達和鼻咽癌患者分級分期的相關性。所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 21.0(IBM Corporation,Armonk,NY)軟件進行統(tǒng)計分析。P值＜0.05被認為差異具有統(tǒng)計學意義。

結(jié)果

1 SBP1在鼻咽癌患者鼻咽病灶組織標本中呈現(xiàn)出低表達趨勢

利用免疫組化分析將所有鼻咽癌患者病理組織標本99例的SBP1表達進行病理醫(yī)師評判，表達評定為 SBP1低表達 73例，其中“0”級 58例，“+”級15例；評定為SBP1高表達26例，其中 “++”級25例，“+++”級 1 例。通過分析 χ2=71.303a，P 值為 0，具有顯著的統(tǒng)計學意義。

2 在鼻咽癌患者的病理組織標本中的癌巢SBP1表達與周邊正常組織和覆蓋其上的正常黏膜對比表達顯著降低。利用免疫組化對比分析鼻咽癌的癌巢細胞與覆蓋的正常黏膜組織和正常淋巴結(jié)組織可以顯示癌細胞呈現(xiàn)SBP1的顯著低表達，典型對比見圖2。

圖2 SBP1在病理組織標本中表達對比圖。圖2-ABD代表SBP1在周邊正常組織細胞和癌巢細胞中表達對比；圖2-C代表SBP1在覆蓋的正常黏膜細胞和其下的癌巢細胞中表達對比。

3 SBP1在鼻咽癌患者鼻咽病灶組織標本中的表達與腫瘤的分級分期無明顯相關性。將鼻咽癌患者病理組織標本中的SBP1表達的高低與患者的TNM及臨床的分期進行相關性分析研究，沒有發(fā)現(xiàn)明顯的相關性，見表2，同時也說明SBP1在組織中的表達并沒有隨著腫瘤的進展而進一步發(fā)生表達的下

表2 SBP1在病理組織標本中的表達與鼻咽癌患者TNM和臨床分期的相關性

4 SBP1在鼻咽癌患者鼻咽病灶組織標本中的表達與患者的預后具有顯著相關性。通過對入組鼻咽癌患者的跟蹤隨訪，記錄患者的無復發(fā)生存期、無轉(zhuǎn)移生存期和總生存期，并與其病理標本中SBP1的表達進行對比分析，其無復發(fā)生存期、無轉(zhuǎn)移生存期和總生存期存在相關性，見圖3，差異具有統(tǒng)計學意義。

圖3 SBP1在病理組織標本中的表達與患者生存狀況相關性分析圖。圖3-A，代表SBP1在病理組織標本中的表達與患者總體生存期相關性分析圖；圖3-B，代表SBP1在病理組織標本中的表達與患者無復發(fā)生存期相關性分析圖；圖3-C，代表SBP1在病理組織標本中的表達與患者無轉(zhuǎn)移生存期相關性分析圖。

討論

SBP1基因差異表達在人類前列腺癌細胞中首先被發(fā)現(xiàn)，11株前列腺癌細胞中僅有4株可以檢測到SBP1 mRNA的微弱表達[3]。接下來類似的現(xiàn)象在其他惡性腫瘤細胞中也得以證實，例如在胃腺癌與周邊正常組織黏膜蛋白印跡對比中發(fā)現(xiàn)SBP1水平明顯減少[4]，而且利用組織芯片檢測觀察到正常胃黏膜組織、癌前病變組織和癌組織SBP1表達水平隨著疾病的進展而逐步減少的現(xiàn)象[4]，同樣的結(jié)果也在食管腺癌中發(fā)現(xiàn)[5]。通過蛋白印跡、組織芯片等分析比較SBP1在腫瘤和正常組織出現(xiàn)顯著下降的還包括肺腺癌、直腸癌、食管腺癌、肝細胞癌、脂肪肉瘤和卵巢癌等[6]。致使SBP1在人類癌癥表達下降的原因仍有待于確定，一個可能的解釋是在腫瘤進展過程中失去了SBP1基因部分。近來有學者發(fā)現(xiàn)表觀遺傳機制可能參與SBP1基因表達的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，但目前仍無法得到明確的結(jié)果[7]。然而更吸引研究者興趣的是SBP1在惡性腫瘤中的表達情況與患者預后的相關性，由此可以通過SBP1的表達水平來推斷腫瘤的惡性程度和評估總體生存時間。在診斷為胸膜間皮瘤的患者檢測到27個基因的表達與患者的生存率存在相關性，SBP1就是其中之一[8]。通過一些回顧性研究，使用蛋白印跡或組織芯片檢測腫瘤組織中SBP1的表達，與臨床隨訪的結(jié)果利用kaplan-meier進行生存率分析，發(fā)現(xiàn)SBP1表達越低就意味著越差的總體生存時間，這些已經(jīng)在直腸癌、肺腺癌、胃癌、肝細胞癌、乳腺癌和結(jié)腸癌患者中得到了驗證[9]，因此，SBP1表達水平下降被證明是惡性腫瘤患者預后不良的指標之一。

在我們的研究中，99例鼻咽癌患者按照入組要求作為研究對象，并進行了長期嚴格的隨訪，同時對入組患者的病理組織標本進行了免疫組化分析，得出了以下結(jié)論：鼻咽癌患者組織標本中的SBP1的表達呈現(xiàn)出下降的趨勢，主要體現(xiàn)在兩個方面，一是在入組患者病理標本中SBP1低表達者占據(jù)絕對優(yōu)勢（73/99）；二是入組患者病理標本中在癌巢細胞中SBP1的表達比周邊正常組織中的黏膜和淋巴結(jié)的表達要明顯減低。這與其他學者在肺腺癌、直腸癌、食管腺癌、肝細胞癌、脂肪肉瘤和卵巢癌等[6]研究中發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象保持了一致性，但是SBP1在腫瘤細胞中表達下降的具體機制仍不清楚，是腫瘤發(fā)生后的伴隨表現(xiàn)還是SBP1在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中扮演了關鍵角色仍需進一步的研究。同時SBP1的調(diào)控機制以及在硒代謝中扮演的角色研究甚少，需要進一步的研究探索。本研究中第二個發(fā)現(xiàn)就是鼻咽癌的無復發(fā)、無轉(zhuǎn)移和總體生存期與病理組織標本中的SBP1的表達呈現(xiàn)顯著的相關性，這一特點可能成為預測鼻咽癌患者預后的標志物之一。為進一步研究SBP1的表達與預后的相關性，一些研究者對腫瘤細胞進行了深入研究，SBP1表達促進了腫瘤細胞擴散和遷移,加快細胞分化與血管入侵。相比之下，增強SBP1表達式可能會導致腫瘤細胞凋亡,抑制細胞增殖、遷移和腫瘤生長[10，11]，這些結(jié)果在動物身上也被驗證。我們進一步分析SBP1表達與鼻咽癌患者TNM分級和臨床分期之間無明顯相關性，由此也可以推測SBP1在腫瘤的發(fā)展過程中并無進一步下調(diào)的趨勢，這一結(jié)論與其他作者在胸膜間皮瘤[8]研究并不一致，因此還需要我們利用更多的數(shù)據(jù)進一步的研究證實。

總之,我們的研究表明鼻咽癌患者病理組織標本中SBP1的表達與正常組織相比有顯著差異，并與鼻咽癌患者的預后密切相關,這樣的結(jié)論有助于我們對鼻咽癌患者預后進行評估。但SBP1的表達下降的調(diào)控機制仍不明確且在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用和機制也有待于進一步闡明。

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