復(fù)方顛倒凝膠的設(shè)計(jì)與評(píng)價(jià)*

林姍姍，王佳露，劉 睿，年 莉，國大亮

（天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193）

痤瘡作為一種常見皮膚病不僅影響個(gè)人美觀，而且可引發(fā)心理疾病，因而得到醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注?！夺t(yī)宗金鑒》中的顛倒散治療痤瘡具有較好的療效[1-4]，其藥物來源于天然植物和礦物，符合人們對(duì)于控制抗生素耐藥性和降低藥物毒副作用的需求[5]。但散劑在皮膚表面滯留時(shí)間短導(dǎo)致藥效難以發(fā)揮，大量學(xué)者對(duì)其進(jìn)行改良均取得了較好的效果[6-9]。現(xiàn)以顛倒散為基礎(chǔ)加入黃柏、苦參、蘆薈中抗痤瘡的有效成分制成藥效持久、安全性高且使用方便的復(fù)方顛倒凝膠并進(jìn)行評(píng)價(jià)，為其治療痤瘡提供理論依據(jù)，同時(shí)為其他中藥外用處方的劑型改制開拓新的思路。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 PHS-25型酸度計(jì)（上海皓莊儀器有限公司），NDJ-79旋轉(zhuǎn)式黏度計(jì)（上海平軒科學(xué)儀器有限公司），BT125D型分析天平（德國賽得利斯公司），SPD-M20A高效液相色譜儀（日本島津公司），YB-P6智能透皮實(shí)驗(yàn)儀（天津市鑫洲科技有限公司）。

1.2 藥材與試劑 大黃總蒽醌（50%，南京朗澤生物科技有限公司），鹽酸小檗堿（98%，南京朗澤生物科技有限公司），苦參堿（98%，南京朗澤生物科技有限公司），氧化苦參堿（98%，南京朗澤生物科技有限公司），蘆薈提取物（10∶1，南京朗澤生物科技有限公司），升華硫（商丘市亮峰衛(wèi)生用品有限公司），卡波姆-940（武漢瑞孚因科技發(fā)展有限公司），1-2丙二醇（分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司），甘油、三乙醇胺、氫氧化鈉、尿素（均為分析純，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司），蒸餾水（屈臣氏）。

2 復(fù)方顛倒凝膠的制備

2.1 凝膠成分的確立 本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)中的藥物組成[9]，以顛倒散為基礎(chǔ)加入黃柏、苦參、蘆薈，明確該5味藥物中抗痤瘡的有效成分，包括大黃總蒽醌、鹽酸小檗堿、苦參堿、氧化苦參堿、蘆薈提取物、升華硫。根據(jù)中醫(yī)學(xué)中君臣佐使的方劑配伍理論確定中藥原材料的比例，通過查閱文獻(xiàn)得到所需的每種中藥提取物的含量，確立復(fù)方顛倒凝膠的組成比例為:大黃總蒽醌∶鹽酸小檗堿∶苦參堿∶氧化苦參堿∶蘆薈提取物:升華硫＝4∶2∶1∶1∶2∶100。

2.2 復(fù)方顛倒凝膠單因素考察

2.2.1 凝膠基質(zhì)的選擇 根據(jù)不同型號(hào)卡波姆的特點(diǎn)及應(yīng)用范圍，本實(shí)驗(yàn)最終選用卡波姆-940作為凝膠基質(zhì)的基本材料?？ú?940在皮膚表面粘附性強(qiáng)、涂展性好，可延長藥物在皮膚表面滯留時(shí)間，增加藥物作用，被廣泛用于皮膚疾病，并且其能吸收組織滲出液，有利于分泌物的排出，特別適宜治療脂溢性皮膚病[10]。

2.2.2 凝膠處方膠凝溫度的考察 以膠凝處方的膠凝溫度和凝膠處方的黏度為指標(biāo)篩選凝膠基質(zhì)占處方總量20%、25%和30%的不同凝膠處方（n＝3）。參考文獻(xiàn)采取[11-12]以下方法進(jìn)行膠凝溫度的測(cè)定:分別取凝膠2 mL至玻璃試管中，將試管置于10℃恒溫水浴中，其試管內(nèi)液面低于水面2 cm，平衡10 min。水浴溫度采用精度1℃的精密溫度計(jì)測(cè)定，緩慢升溫，升溫速率為每分鐘升高1℃。每升高1℃，取出試管，使試管迅速傾斜45℃，觀察內(nèi)容物流動(dòng)情況。當(dāng)試管內(nèi)液體不流動(dòng)時(shí)的溫度即為膠凝溫度，見表1。

表1 凝膠處方的膠凝溫度 ℃

2.2.3 凝膠處方黏度的考察 由于該凝膠呈現(xiàn)高黏度狀態(tài)，故選擇黏度計(jì)的第Ⅱ單元測(cè)定器、100#轉(zhuǎn)筒，在相同溫度條件下（實(shí)測(cè)室溫:33℃）分別對(duì)凝膠基質(zhì)占處方總量20%、25%、30%時(shí)的凝膠處方進(jìn)行凝膠黏度的測(cè)定（n＝3）。取凝膠約15 mL于測(cè)試容器中，直至凝膠達(dá)到該容器錐形面下部邊緣，安裝完成后，起動(dòng)電機(jī)，待指針穩(wěn)定后讀取數(shù)據(jù)。根據(jù)所選的測(cè)定器和轉(zhuǎn)筒，計(jì)算結(jié)果見表2。凝膠黏度值＝刻度盤讀取的數(shù)值×100（因子數(shù)）mPa/s

表2 凝膠處方的黏度參數(shù)

2.2.4 凝膠單因素考察結(jié)果 根據(jù)凝膠處方的膠凝溫度和黏度的考察結(jié)果，確定最優(yōu)處方為凝膠基質(zhì)占處方總量的25%，該凝膠處方的膠凝溫度為33℃，黏度為 7 800 mPa/s。

2.3 復(fù)方顛倒凝膠制備方法 將文獻(xiàn)[13]中的制備方法進(jìn)行改進(jìn)，取卡波姆-940 10.0 g，加水至250 g，溶脹24 h，水浴加熱并攪拌均勻，用三乙醇胺適量調(diào)節(jié)酸堿度至中性，即為空白凝膠基質(zhì)；分別精密稱取大黃總蒽醌 4.0 g、鹽酸小檗堿 2.0 g、苦參堿1.0 g，氧化苦參堿 1.0 g，蘆薈提取物 2.0 g 和升華硫100.0 g，混合均勻，加甘油 100.0 g，研磨至均勻細(xì)膩，加丙二醇200.0 g，攪拌均勻，即得到藥物混懸液；取空白凝膠基質(zhì)，將藥物混懸液加至空白凝膠基質(zhì)，快速攪拌，加尿素 150.0 g，加水至 1 000 g，攪拌均勻，即得到復(fù)方顛倒凝膠1 000 g。

3 復(fù)方顛倒凝膠的藥物評(píng)價(jià)

3.1 外觀 表現(xiàn)為金黃色乳膠狀半固體，質(zhì)地均勻細(xì)膩，黏稠度適宜，生物相容性及涂展性良好，無油膩感，見圖1。

圖1 復(fù)方顛倒凝膠的外觀

3.2 酸堿度 多次精密測(cè)量復(fù)方顛倒凝膠的pH值，測(cè)量方法為:取本品10 g，加入20 mL蒸餾水中進(jìn)行稀釋，將兩只電極放入稀釋的溶液中，待顯示值穩(wěn)定后即可利用酸度計(jì)讀取pH值（n＝3），結(jié)果見表3。

表3 復(fù)方顛倒凝膠的pH值

3.3 凝膠黏度的測(cè)定 方法同2.2.3，利用黏度計(jì)在相同溫度條件下（實(shí)測(cè)室溫:33℃）對(duì)復(fù)方顛倒凝膠的黏度進(jìn)行測(cè)定（n＝3），結(jié)果見表 4。

表4復(fù)方顛倒凝膠的黏度

4 鹽酸小檗堿體外釋放度考察

4.1色譜條件色譜柱Diamonsil C18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫:35 ℃；流速:1.0 mL/min；檢測(cè)波長:350 nm；進(jìn)樣量:10 μL；流動(dòng)相:乙腈:0.1%的磷酸溶液（20∶80）。

4.2 磷酸鹽緩沖液（PBS）的配置 稱取磷酸二氫鉀（KH2PO4）0.24 g，磷酸氫二鈉（Na2HPO4）1.44 g，氯化鈉（NaCl）8.0 g，氯化鉀（KCl）0.2 g，并加入 1 L 蒸餾水，攪拌使充分溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH，作為等滲溶液。

4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品2.01 mg置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度線，得濃度為201 μg/mL的鹽酸小檗堿對(duì)照品儲(chǔ)備液，置4℃的冰箱中保存?zhèn)溆?。將鹽酸小檗堿對(duì)照品儲(chǔ)備液以甲醇逐級(jí)稀釋，得濃度分別為100.50、50.25、25.12、12.56、6.28、3.14、1.57 μg/mL，系列對(duì)照品溶液。按照4.1中的色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得直線回歸方程 Y＝954.57X-1 000.5（r＝0.999 3），如圖 2 所示。表明濃度在 1.57～100.50 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，符合定量分析要求。

圖2 鹽酸小檗堿在甲醇中的標(biāo)準(zhǔn)曲線

4.4 體外釋放實(shí)驗(yàn)

4.4.1 體外釋放的考察方法 本實(shí)驗(yàn)選擇的釋放介質(zhì)為 PBS（pH7.8），采用膜透析法[14]考察復(fù)方顛倒凝膠的體外釋藥特性。具體實(shí)驗(yàn)步驟為:分別精密稱取2.01 mg復(fù)方顛倒凝膠置于透析袋中，兩端用透析袋夾夾緊，置于含60 mL釋放介質(zhì)PBS的燒杯中，設(shè)置磁力攪拌器轉(zhuǎn)速為200 r/min，溫度為（35±1）℃。分別于 0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、14 h 取樣1 mL，同時(shí)補(bǔ)加等溫同體積的釋放介質(zhì)PBS。用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定藥物釋放量，每個(gè)樣品進(jìn)行3次平行實(shí)驗(yàn)。

累積釋放量（Qn）和累積釋放百分率（F%）分別由公式（1）和公式（2）求得:

公式中Qn為各時(shí)間點(diǎn)的累積釋放量；F%為各時(shí)間點(diǎn)的累積釋放百分率；t（min）為取樣時(shí)間點(diǎn)；Cn為第n個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)的實(shí)測(cè)藥物濃度；V0為溶出介質(zhì)總體積；Vi為每次取樣體積；Ci為第i個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)實(shí)測(cè)藥物濃度；C0為總藥物濃度。

4.4.2 體外釋放的計(jì)算方法 體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過計(jì)算測(cè)定濃度與初始制劑濃度之比得到藥物累積釋放百分率。以藥物累積釋放百分率（%）對(duì)取樣時(shí)間（T）進(jìn)行擬合，得到鹽酸小檗堿和復(fù)方顛倒凝膠的體外累積釋放率曲線。如圖3所示，凝膠的累積釋放率在1 h達(dá)到25.03%，表明藥物前期釋放突釋，12 h達(dá)到90.38%，后期釋藥完全，說明凝膠中的有效成分能夠持續(xù)釋放，保證藥物達(dá)到有效的治療作用。將釋放數(shù)據(jù)進(jìn)行零級(jí)、一級(jí)、Higuchi，Hixcon-Crowell，Ritger-Peppas和 Weibull方程擬合并進(jìn)行回歸分析，比較各回歸方程的相關(guān)系數(shù)。所得的擬合方程中以Ritger-Peppas方程的R值最高，R值為0.956 2，說明藥物具有良好的緩釋作用，如表5所示。

圖3 復(fù)方顛倒凝膠的體外累積釋放率

表5 體外釋放的擬合方程結(jié)果

5 討論

現(xiàn)代研究表明，大黃中的大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚等大黃蒽醌類物質(zhì)對(duì)痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌均有較強(qiáng)的抑制作用[15]，且具有明顯的抗炎作用[16-18]；硫磺中的硫易與皮膚作用生成硫化氫和五硫磺酸使表皮軟化，具有脫脂、殺菌、止癢及角質(zhì)促溶作用[19]；黃柏中的鹽酸小檗堿具有抗病原微生物等作用[20]；苦參中的苦參堿和氧化苦參堿對(duì)金黃色葡萄桿菌有較強(qiáng)的抑制作用[21-22]；蘆薈具有抗菌作用，對(duì)葡萄球菌最為敏感[23]，此外還有調(diào)節(jié)免疫功能、促進(jìn)傷口愈合、抗炎以及抗氧化等作用[24]，而且它是一種優(yōu)良的天然保濕劑和皮膚營養(yǎng)劑，具有護(hù)膚美容功能。

本課題以中醫(yī)治療痤瘡的傳統(tǒng)有效方劑顛倒散為基礎(chǔ)方，加黃柏、苦參、蘆薈3味藥物中抗痤瘡的有效成分組成復(fù)方顛倒散。由于傳統(tǒng)外用散劑表面積大，容易吸濕、結(jié)塊和分散，導(dǎo)致散劑在皮膚表面的滯留時(shí)間短，不利于藥效的發(fā)揮[25]；且散劑調(diào)制麻煩、劑量難以確定、藥物浪費(fèi)大、不便于患者使用等諸多弱點(diǎn)日益突出[26]，這些都不適應(yīng)現(xiàn)代用藥的需求，因此散劑的應(yīng)用有著一定的局限性。凝膠具有良好的緩釋作用，使藥效持久，可以提高藥物的安全性和有效性；凝膠可吸水膨潤的特點(diǎn)保證其更好地吸收組織滲出液，促進(jìn)藥物透皮吸收；且使用劑量小，幾乎無毒副作用，不妨礙皮膚的正常生理功能[27-28]。故本實(shí)驗(yàn)將傳統(tǒng)外用散劑改制為凝膠劑。

選取卡波姆-940制成凝膠基質(zhì)，是考慮到其良好的黏滯性和親水凝膠性能夠使凝膠劑在體外釋放中有較好的緩釋作用[29]，可以產(chǎn)生持久并容易控制的血藥濃度，避免峰谷現(xiàn)象的出現(xiàn)，減少用藥次數(shù)，提高藥物的安全性和有效性[30]，因此凝膠劑在很大程度上克服了散劑的不足。另外，凝膠在不同溫度條件下的黏度對(duì)保證其在被使用過程中的患者順應(yīng)性和治療效果起決定作用，是重要的流變學(xué)參數(shù)，因此對(duì)凝膠溫度和用量的考察可以保證復(fù)方顛倒凝膠常溫下呈半固體的狀態(tài)。

6 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)制得復(fù)方顛倒凝膠的凝膠基質(zhì)占處方總量的25%，膠凝溫度為33℃；其外觀為金黃色帶乳膠狀半固體，pH值為7，凝膠黏度為7 533 mPa/s；體外釋放實(shí)驗(yàn)中，復(fù)方顛倒凝膠在12 h釋放率達(dá)到90.38%，符合Ritger-Peppas方程，表明凝膠具有良好的緩釋作用。由此可見，復(fù)方顛倒凝膠制備工藝穩(wěn)定，其外觀、酸堿度、流變學(xué)和體外釋放性能均良好，為復(fù)方顛倒凝膠臨床上用于治療痤瘡提供理論依據(jù)，同時(shí)為中醫(yī)領(lǐng)域其他中藥外用處方的劑型改制開拓新的思路。

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