不同采收期和部位黔產(chǎn)千里光中總黃酮、綠原酸和金絲桃苷含量動(dòng)態(tài)比較*

李 燕，韓忠耀，魏學(xué)軍

（貴州省黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，都勻 558000）

千里光為菊科植物千里光（Senecio scandens Buch.-Ham.）的干燥地上部分，具有清熱解毒、明目退翳、殺蟲止癢、散瘀消腫等功效，主要含黃酮、生物堿、萜類、酚酸類、揮發(fā)油等化學(xué)成分[1-3]。收載于《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(2003年版)，在貴州苗族聚集區(qū)被廣泛應(yīng)用，全草用于風(fēng)熱感冒，目赤腫痛，泄瀉痢疾，皮膚濕疹，瘡癤[4]。目前國(guó)內(nèi)外針對(duì)千里光的研究多以化學(xué)成分、藥理作用和含量測(cè)定為主，作為影響其品質(zhì)的采收期、用藥部位和炮制加工方法等因素，雖有文獻(xiàn)記載，如采收期有夏秋采收和全年采收的記載；藥用部位有全草入藥和地上部位入藥的記載，但標(biāo)準(zhǔn)并不統(tǒng)一。總黃酮、綠原酸、金絲桃苷是千里光的重要活性物質(zhì)，具有抗菌抗病毒、抗癌等廣泛的藥理作用[5-7]?，F(xiàn)以總黃酮、綠原酸和金絲桃苷為考察指標(biāo)，比較不同采收期和部位的黔產(chǎn)千里光中3種活性成分的含量和生物產(chǎn)量，以明確黔產(chǎn)千里光的適宜采收期和部位，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為建立和完善千里光的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent1260型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫科技有限公司）；Cary 100型雙光束紫外-可見分光光度計(jì)（美國(guó)安捷倫公司）；IKA RV10型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國(guó)IKA）；SG-4050C型數(shù)顯恒溫水浴鍋；2.0R 型離心機(jī)（德國(guó)Heraeus）；AE240型電子天平（瑞士Mettler）。蘆丁對(duì)照品（批號(hào) 100080-200803）、綠原酸對(duì)照品（批號(hào)110753-201314）、金絲桃苷對(duì)照品（批號(hào)110753-201314）均購(gòu)買于中國(guó)生物制品檢定所；乙腈為色譜純；純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）；其余試劑均為分析純。

2 材料

千里光2013年3月扦插于實(shí)驗(yàn)田，土壤黃壤，質(zhì)地中等，常規(guī)管理，采集時(shí)間為2015年3月15日—2016年2月30日，每月采集2次，每次隨機(jī)采集生長(zhǎng)良好的完整植株10株，55℃下烘干，備用。千里光3—9月主要以營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)為主，花果期10月至次年3月，9月份部分葉開始枯萎，莖全年均不枯萎。采集藥材經(jīng)黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校魏學(xué)軍副教授鑒定為菊科植物千里光（Senecioscandens Buch.-Ham.）全草，樣本保存在黔南民族醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校中藥教研室標(biāo)本室。

3 方法與結(jié)果

3.1 供試品溶液的制備 精密稱取1 g干燥千里光粗粉，加入10倍70%乙醇，加熱回流提取2次，每次1.5 h，過濾合并濾液并定容至50 mL，離心，吸取上清溶液，0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液即得供試品溶液[8]。

3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取蘆丁對(duì)照品7.60 mg，置于25 mL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻后即得濃度為0.304 g/L的蘆丁對(duì)照品溶液；精密稱取綠原酸對(duì)照品10.30 mg，置于50 mL容量瓶中，加75%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻后即得濃度為0.206 g/L的綠原酸對(duì)照品溶液；精密稱取金絲桃苷對(duì)照品4.10 mg，置于50 mL容量瓶中，加75%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻后即得濃度為0.082 g/L的金絲桃苷對(duì)照品溶液[8]。

3.3 色譜條件 綠原酸測(cè)定的色譜條件:色譜柱為Diamonsil C18柱（200 nm × 4.6 nm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-0.2% 冰醋酸（15∶85），流速:1.0 mL/min，進(jìn)樣量:10 μL，柱溫 25 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為 327 nm，理論塔板數(shù)按綠原酸峰算不低于8 000[9]，綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品、供試品色譜圖見圖1；金絲桃苷的色譜條件:色譜柱為 Diamonsil C18柱（200 nm×4.6 nm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-0.2%醋酸（18∶82），流速:1.0 mL/min，進(jìn)樣量:10 μL，柱溫 25 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為 360 nm，理論塔板數(shù)按金絲桃苷峰算不低于8 000。金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品、供試品色譜圖見圖2。

圖1 綠原酸對(duì)照品（A）和供試品溶液（B）HPLC圖譜

圖2 金絲桃苷對(duì)照品（A）和供試品溶液（B）HPLC圖譜

3.4 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取濃度為 0.304 mg/mL的蘆丁對(duì)照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL 分別加入到 25 mL 的容量瓶中，再向各容量中加入1 mL 5%亞硝酸鈉，搖勻，靜置6 min后，再分別加入1 mL 10%硝酸鋁，搖勻，靜置6 min后，再加入10 mL 5%氫氧化鈉，用70%的乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置15 min后，在400～700 nm波長(zhǎng)進(jìn)行掃描，確定最大吸收波長(zhǎng)為508 nm，以吸光度對(duì)溶液濃度進(jìn)行回歸分析，繪制濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3，求得回歸方程為Y＝0.010 7X-0.041 3（r2＝0.999 9），結(jié)果表明蘆丁濃度在0.012 0～0.060 8 mg/mL 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；吸取一定量的綠原酸對(duì)照品溶液分別制成6個(gè)不同濃度，分別進(jìn)樣 10 μL，按“3.3”項(xiàng)下條件測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖4，回歸方程為Y＝6546.9X+468.47（r2＝0.999 9），結(jié)果表明綠原酸進(jìn)樣量在 0.020 6～2.060 0 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；吸取一定量的金絲桃苷對(duì)照品溶液分別制成6 個(gè)不同濃度,分別進(jìn)樣 10 μL，按“3.3”項(xiàng)下條件測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖5，回歸方程為Y＝4044.7X+0.8333（r2＝0.9999），結(jié)果表明金絲桃苷進(jìn)樣量在 0.082～0.820 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系[9-10]。

3.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取6份0.5 mL同一蘆丁對(duì)照品溶液，按“3.4”項(xiàng)下條件在508 nm處測(cè)定各吸光度，結(jié)果RSD＝0.36%，表明紫外分光光度計(jì)儀器精密度良好；精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，按“3.3”項(xiàng)下條件測(cè)定峰面積，RSD＝0.45%，表明高效液相色譜儀儀器精密度良好；精密吸取金絲桃苷對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，按“3.3”項(xiàng)下條件測(cè)定峰面積，RSD＝0.48%，表明高效液相色譜儀儀器精密度良好。

圖3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖4 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖5 金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取0.5 mL供試品溶液，按“3.4”項(xiàng)，分別在 0.0，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，12 h 時(shí)于508 nm處測(cè)定吸光度，RSD＝1.52%，表明蘆丁在12 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性；取供試品溶液，按“3.3”項(xiàng)下條件分別在 0，6，12，18，24，36 h 時(shí)分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定綠原酸峰面積，RSD＝1.70%，表明綠原酸在36 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性；取供試品溶液，按“3.3”項(xiàng)下條件別在 0，6，12，18，24，36 h 時(shí)分別進(jìn)樣 10 μL，測(cè)定金絲桃苷峰面積，RSD＝1.67%，表明金絲桃苷在36 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

3.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密吸取6份0.5 mL同一供試品溶液，按“3.4”項(xiàng)下條件分別測(cè)定吸光度，結(jié)果RSD＝1.66%，表明重復(fù)性良好；取同一供試品6份，按“3.3”項(xiàng)下條件測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD＝1.87%，表明重復(fù)性良好；取同一供試品6份，按“3.3”項(xiàng)下條件測(cè)定峰面積，結(jié)果 RSD＝1.83%，表明重復(fù)性良好。

3.8 含量測(cè)定 取各供試品溶液0.5 mL，按“3.4”項(xiàng)下條件測(cè)定總黃酮含量，結(jié)果見表1；精密吸取各供試品溶液，按“3.3”項(xiàng)下條件測(cè)定綠原酸的含量，結(jié)果見表 2；精密吸取各供試品溶液，按“3.3”項(xiàng)下條件測(cè)定金絲桃苷的含量，結(jié)果見表3。

3.9 生物產(chǎn)量 樣品55℃下烘干后稱取根、莖、葉、全草4部位的干重，結(jié)果見表4。

4 結(jié)果與討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同采收期和部位黔產(chǎn)千里光中3種活性成分的含量和生物產(chǎn)量存在明顯差異。從采收期考慮，千里光6—8月份總黃酮的含量相對(duì)較高，以6月份含量最高，6—9月千里光中綠原酸和金絲桃苷的含量都相對(duì)較高，其中8月份綠原酸和金絲桃苷含量均最高，8月千里光的生物產(chǎn)量最大，和7、9月份差異不明顯，提示7—9月份為千里光的最佳采收期。

從藥用部位考慮葉中三者含量均最高，根、莖中也含有少量的黃酮類、綠原酸，根中除了4、5月檢出微量金絲桃苷外，其余月份均未檢出，莖、葉的生物產(chǎn)量占的比重較大，根的產(chǎn)量最低，提示千里光以地上部位入藥為佳，綜合考慮3種活性成分的含量和生物產(chǎn)量，建議千里光藥材7-9月份采收地上部位為宜。

千里光為多年生植物，在生長(zhǎng)初期，植物以營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)為主，光合作用形成的初生代謝產(chǎn)物主要滿足植物的生長(zhǎng)需求，此時(shí)全草的總黃酮、綠原酸和金絲桃苷的含量相對(duì)較低，5月份后，初生代謝產(chǎn)物開始轉(zhuǎn)化為次生代謝產(chǎn)物，次生代謝產(chǎn)物含量開始富集，6月份總黃酮出現(xiàn)含量富集的高峰期，到6月份綠原酸、金絲桃苷含量開始較高，到8月份綠原酸和金絲桃苷富集達(dá)到峰值，9月份金絲桃苷的含量開始下降，在生長(zhǎng)的初期柔軟和葉子一起參與光合作用和初生代謝，莖逐漸木質(zhì)化后，較少參與植物的代謝，根基本上不參與植物的光合作用。

故葉中的總黃酮、綠原酸和金絲桃苷等次生代謝產(chǎn)物的含量明顯高于根、莖，根中幾乎不含金絲桃苷。至于黃酮類化合物和綠原酸、金絲桃苷富集的高峰期不一致，需進(jìn)一步研究。8月份生物產(chǎn)量也達(dá)到峰值，9月份的生物產(chǎn)量開始緩慢下降，因?yàn)椴糠秩~開始枯萎、脫落，由于花和果實(shí)較小，對(duì)生物產(chǎn)量影響較小，故未予考察。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為指導(dǎo)千里光合理的采收期和資源合理利用提供了科學(xué)依據(jù)，結(jié)果提示用藥時(shí)應(yīng)注

采收期、藥用部位對(duì)藥材質(zhì)量的影響。

表1 不同采收期和部位千里光中總黃酮的含量（±s）mg/g

表1 不同采收期和部位千里光中總黃酮的含量（±s）mg/g

根 莖 葉 全草采收日期 n 2015/03/15 3 59.461±0.034 40.049±0.026 142.920±0.035 58.692±0.007 2015/03/30 3 73.289±0.016 26.763±0.009 114.230±0.015 46.672±0.023 2015/04/15 3 69.168±0.042 30.283±0.039 123.327±0.023 56.193±0.026 2015/04/30 3 72.213±0.019 42.876±0.023 156.510±0.062 78.052±0.047 2015/05/15 3 68.772±0.061 42.086±0.016 192.581±0.044 76.893±0.052 2015/05/30 3 63.428±0.038 49.896±0.011 189.943±0.032 72.786±0.014 2015/06/15 3 52.784±0.019 54.829±0.013 249.180±0.018 188.097±0.031 2015/06/30 3 31.402±0.073 53.450±0.016 243.671±0.021 173.402±0.027 2015/07/15 3 42.508±0.032 49.379±0.022 235.572±0.018 155.149±0.016 2015/07/30 3 45.185±0.015 53.568±0.041 236.074±0.022 98.452±0.013 2015/08/15 3 43.876±0.041 40.241±0.015 186.892±0.018 74.368±0.016 2015/08/30 3 30.772±0.013 39.434±0.027 174.522±0.021 72.384±0.017 2015/09/15 3 46.716±0.029 48.371±0.014 157.583±0.032 75.624±0.019 2015/09/30 3 38.186±0.048 39.643±0.026 163.508±0.024 50.464±0.182 2015/10/15 3 57.206±0.017 66.422±0.023 141.971±0.021 56.648±0.031 2015/10/30 3 68.430±0.009 43.842±0.006 157.657±0.015 56.754±0.012 2015/11/15 3 56.893±0.036 46.794±0.018 146.010±0.031 54.704±0.018 2015/11/30 3 40.485±0.013 52.170±0.019 120.171±0.028 49.047±0.021 2015/12/15 3 25.518±0.037 41.183±0.025 133.687±0.015 47.323±0.171 2015/12/30 3 24.204±0.007 51.568±0.011 118.076±0.026 58.286±0.027 2016/01/15 3 25.842±0.023 39.528±0.101 80.309±0.017 45.082±0.031 2016/01/30 3 24.318±0.016 43.403±0.013 28.002±0.025 26.907±0.048 2016/02/15 3 25.786±0.025 35.683±0.021 67.464±0.018 39.262±0.033 2016/02/30 3 37.602±0.031 32.571±0.034 75.873±0.026 36.182±0.029

表2 不同采收期和部位千里光中綠原酸的含量(±s)mg/g

表2 不同采收期和部位千里光中綠原酸的含量(±s)mg/g

采收日期 n 根 莖 葉 全草2015/03/15 3 1.328±0.016 0.652±0.013 8.520±0.021 3.658±0.018 2015/03/30 3 0.181±0.035 0.503±0.027 6.037±0.012 3.217±0.027 2015/04/15 3 2.136±0.041 0.534±0.021 8.358±0.019 3.471±0.023 2015/04/30 3 1.322±0.016 0.617±0.028 7.908±0.015 3.534±0.024 2015/05/15 3 1.290±0.032 0.472±0.021 8.829±0.016 3.740±0.014 2015/05/30 3 2.647±0.006 2.378±0.032 12.453±0.017 3.672±0.024 2015/06/15 3 0.691±0.019 1.564±0.014 16.172±0.021 4.240±0.031 2015/06/30 3 1.571±0.029 2.250±0.033 14.942±0.041 4.153±0.018 2015/07/15 3 0.473±0.007 1.976±0.019 16.682±0.023 4.493±0.018 2015/07/30 3 1.271±0.016 4.329±0.023 17.462±0.021 4.839±0.011 2015/08/15 3 1.494±0.027 2.658±0.014 26.752±0.018 6.486±0.029 2015/08/30 3 1.650±0.016 2.586±0.017 20.273±0.024 6.219±0.032 2015/09/15 3 1.329±0.031 1.062±0.028 16.361±0.019 4.860±0.033 2015/09/30 3 1.811±0.023 1.230±0.042 14.568±0.051 4.759±0.019 2015/10/15 3 0.806±0.029 1.853±0.037 13.604±0.016 4.560±0.021 2015/10/30 3 1.293±0.015 0.344±0.020 16.939±0.031 3.886±0.230 2015/11/15 3 1.761±0.028 3.932±0.019 14.320±0.029 3.113±0.025 2015/11/30 3 0.941±0.014 2.191±0.048 14.626±0.014 3.651±0.033 2015/12/15 3 1.032±0.011 1.733±0.026 13.875±0.019 3.460±0.029 2015/12/30 3 0.821±0.021 0.818±0.018 14.187±0.027 3.287±0.030 2016/01/15 3 1.636±0.036 1.810±0.022 11.354±0.025 3.319±0.021 2016/01/30 3 0.974±0.021 1.432±0.058 12.201±0.037 2.912±0.041 2016/02/15 3 0.624±0.032 0.932±0.063 9.373±0.041 1.594±0.060 2016/02/30 3 0.262±0.009 0.120±0.041 11.721±0.052 1.743±0.033

表3 不同采收期和部位的千里光中金絲桃苷的含量(±s)mg/g

表3 不同采收期和部位的千里光中金絲桃苷的含量(±s)mg/g

采收日期 n 根 莖 葉 全草2015/03/15 3 0.000 0.102±0.007 2.646±0.015 0.548±0.012 2015/03/30 3 0.000 0.084±0.011 1.954±0.021 1.663±0.013 2015/04/15 3 0.085±0.009 0.216±0.010 0.883±0.018 0.796±0.014 2015/04/30 3 0.073±0.014 0.183±0.022 1.850±0.027 0.890±0.018 2015/05/15 3 0.077±0.008 0.144±0.028 2.083±0.031 0.468±0.010 2015/05/30 3 0.000 0.185±0.006 2.313±0.025 1.833±0.019 2015/06/15 3 0.000 0.200±0.007 3.567±0.033 1.967±0.026 2015/06/30 3 0.000 0.847±0.018 4.831±0.027 2.063±0.012 2015/07/15 3 0.000 0.263±0.007 4.104±0.031 2.100±0.018 2015/07/30 3 0.000 0.287±0.009 4.203±0.039 2.143±0.024 2015/08/15 3 0.000 1.010±0.012 5.421±0.043 2.216±0.013 2015/08/30 3 0.000 0.942±0.008 5.309±0.101 2.181±0.024 2015/09/15 3 0.000 0.244±0.006 3.472±0.031 1.903±0.015 2015/09/30 3 0.000 0.290±0.007 2.153±0.022 0.806±0.007 2015/10/15 3 0.000 0.178±0.008 2.206±0.027 0.362±0.006 2015/10/30 3 0.000 0.217±0.013 1.948±0.009 0.953±0.018 2015/11/15 3 0.000 0.728±0.011 2.040±0.013 0.929±0.014 2015/11/30 3 0.000 0.732±0.018 3.469±0.029 0.932±0.021 2015/12/15 3 0.000 0.181±0.006 1.371±0.022 0.174±0.008 2015/12/30 3 0.000 0.642±0.022 3.522±0.008 0.781±0.019 2016/01/15 3 0.000 0.658±0.016 1.766±0.019 0.204±0.017 2016/01/30 3 0.000 0.421±0.009 2.622±0.021 0.610±0.013 2016/02/15 3 0.000 0.289±0.015 2.471±0.025 0.597±0.028 2016/02/30 3 0.081±0.015 0.306±0.013 1.310±0.020 0.263±0.015

表4 不同采收期和部位的千里光的生物產(chǎn)量(±s)g

表4 不同采收期和部位的千里光的生物產(chǎn)量(±s)g

采收日期 n 根 莖 葉 全草2015/03/15 3 3.011±0.015 15.314±0.023 16.241±0.067 34.365±0.051 2015/03/30 3 3.087±0.007 15.827±0.029 17.368±0.048 36.010±0.034 2015/04/15 3 3.173±0.014 16.173±0.029 19.329±0.037 38.524±0.031 2015/04/30 3 3.294±0.017 16.650±0.014 22.044±0.039 41.782±0.029 2015/05/15 3 3.478±0.022 17.726±0.022 24.060±0.026 45.024±0.042 2015/05/30 3 3.723±0.020 18.731±0.031 28.361±0.025 50.585±0.051 2015/06/15 3 4.009±0.026 20.093±0.020 35.190±0.022 59.204±0.045 2015/06/30 3 4.424±0.015 21.591±0.034 39.554±0.037 65.326±0.030 2015/07/15 3 4.917±0.016 24.829±0.015 45.176±0.032 74.714±0.021 2015/07/30 3 5.526±0.009 26.870±0.026 49.532±0.039 81.729±0.019 2015/08/15 3 5.921±0.012 28.348±0.018 55.129±0.054 89.163±0.014 2015/08/30 3 6.243±0.014 29.810±0.027 57.856±0.047 93.707±0.033 2015/09/15 3 6.428±0.021 30.436±0.039 56.130±0.023 92.786±0.015 2015/09/30 3 6.510±0.016 30.583±0.024 54.889±0.009 91.780±0.011 2015/10/15 3 6.687±0.013 30.884±0.017 53.913±0.023 91.268±0.009 2015/10/30 3 6.773±0.019 32.094±0.021 51.823±0.017 90.464±0.021 2015/11/15 3 6.862±0.020 32.324±0.027 50.046±0.016 89.462±0.017 2015/11/30 3 6.926±0.018 32.673±0.018 49.134±0.028 88.457±0.026 2015/12/15 3 6.962±0.022 32.820±0.011 47.547±0.016 87.133±0.023 2015/12/30 3 6.978±0.029 32.979±0.029 45.812±0.024 85.560±0.013 2016/01/15 3 6.990±0.023 33.029±0.020 44.453±0.012 84.263±0.015 2016/01/30 3 7.013±0.037 33.058±0.032 42.928±0.020 82.810±0.029 2016/02/15 3 7.021±0.020 33.093±0.041 38.290±0.037 78.134±0.034 2016/02/30 3 7.075±0.025 33.320±0.037 39.144±0.026 79.322±0.018

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