血清葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶測定在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎活動性判斷中的應(yīng)用價值

肖 莉

(新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院檢驗科,河南 新鄉(xiāng) 453000)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis ,RA)是一種以主要累及外周關(guān)節(jié)及慢性對稱性、侵蝕性滑膜炎為特點(diǎn)的系統(tǒng)性炎性疾病，表現(xiàn)為關(guān)節(jié)受累、腫脹、免疫功能紊亂，常呈反復(fù)、持續(xù)性發(fā)作特征[1]。RA的早期診斷多依據(jù)患者臨床癥狀及類風(fēng)濕因子(rheumatoid factor，RF)水平的變化，但張新剛等[2]研究發(fā)現(xiàn)，RA、其他類風(fēng)濕病變及部分健康老年人群血清中均可檢出RF，因此，認(rèn)為其特異性較低。另外，有報道指出，RA患者體內(nèi)存在的多種自身抗原、抗體均與RA發(fā)病及進(jìn)展有緊密聯(lián)系[3-4]。葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶(glucose-6-phosphate isomerase，GPI)是與自身免疫性疾病發(fā)病有關(guān)的糖酵解酶，封昱辰等[5]研究發(fā)現(xiàn)，在T細(xì)胞受體轉(zhuǎn)基因小鼠模型中，GPI可誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎癥發(fā)生。也有研究報道，RA患者的血清、關(guān)節(jié)液內(nèi)均可檢出GPI抗原高表達(dá)[6]?；诖耍狙芯繉A、其他風(fēng)濕病患者及正常健康人血清GPI水平進(jìn)行檢測，探討血清GPI在RA活動性評估中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1一般資料選擇2015年1月至2017年1月新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院收治的80例RA患者(RA組)，均符合美國風(fēng)濕病學(xué)會制定的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；其中男33例，女47例；年齡21～79(52.6±10.5)歲；處于活動期48例，非活動期32例。選擇同期收治的20例系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)、10例強(qiáng)直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)患者作為風(fēng)濕病對照組，其中男11例，女19例；年齡22～76(49.9±11.6)歲；均符合美國風(fēng)濕病學(xué)會修訂的SLE、AS分類標(biāo)準(zhǔn)[8]。選擇同期體檢健康者30例作為正常對照組，均無慢性關(guān)節(jié)炎病史，心、肝、腎、肺功能正常；其中男12例，女18例；年齡21～78(50.1±10.9)歲。3組受試者的性別、年齡比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2RA活動度評價標(biāo)準(zhǔn)(1)關(guān)節(jié)腫脹數(shù)目超過6個；(2)關(guān)節(jié)壓痛數(shù)目超過6個；(3)紅細(xì)胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)≥30 mm·h-1；(4)晨僵時間超過45 min；(5)C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)超過正常上限的1.5倍。RA活動期判斷標(biāo)準(zhǔn)：存在(1)+(2)，同時伴(3)、(4)、(5)中的任意2項；活動度低或不活動(非活動期)判斷標(biāo)準(zhǔn)：不同時滿足(1)+(2)或僅伴(3)、(4)、(5)中任1項。

1.3主要試劑及儀器GPI酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司，GPI抗原標(biāo)準(zhǔn)品購自上海加北試劑公司；Multiskan FC型酶標(biāo)儀購自賽默飛巨爾上海儀器有限公司，水平離心機(jī)購自上海醫(yī)療儀器三廠。

1.4血清GPI水平檢測入院次日采集所有對象空腹肘靜脈血4 mL，室溫靜置2 h，3 000 r·min-1離心15 min，分離血清，-70 ℃低溫保存待測，采用ELISA法檢測GPI水平，嚴(yán)格參照試劑盒使用說明進(jìn)行操作。CPI測定：孔板設(shè)GPI標(biāo)準(zhǔn)品5孔，其余加血清樣本100 μL，37 ℃室溫靜置1 h，洗滌液洗滌5次，干燥，加標(biāo)記抗體100 μL，37 ℃靜置，持續(xù) 1 h，洗滌液洗滌5次，干燥，加顯色液100 μL，室溫避光孵育 15 min，加終止液50 μL，采用酶標(biāo)儀測各孔吸光度值。

2 結(jié)果

2.1各組受試者血清GPI水平比較結(jié)果見表1。RA組患者血清GPI水平高于風(fēng)濕病對照組與正常對照組，風(fēng)濕病對照組患者血清GPI高于正常對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。RA組活動期患者GPI水平高于RA組非活動期患者、正常對照組與風(fēng)濕病對照組(包括SLE和AS患者)(P<0.05);RA組非活動期患者GPI高于正常對照組和風(fēng)濕病對照組(包括SLE和AS患者)(P<0.05)。

表1各組受試者血清GPI水平比較

組別nGPI/(mg·L-1)正常對照組300.41±0.13ab風(fēng)濕病對照組300.56±0.17ab SLE200.63±0.15ab AS100.45±0.19abRA組802.08±0.41 活動期483.11±0.36 非活動期320.91±0.25b

注：與RA組比較aP<0.05；與RA活動期比較bP<0.05；與RA非活動期比較dP<0.05。

2.2GPI診斷RA最佳臨界值及ROC曲線分析GPI診斷RA ROC曲線下面積為0.735，最佳臨界值為0.73 mg·L-1，當(dāng)GPI為0.73 mg·L-1時，GPI診斷RA的敏感度為79.0%，特異度為64.5%，見圖1。

圖1GPI診斷RAROC曲線

Fig.1ROCcurveofGPIinthediagnosisofRA

2.3GPI與RA活動性相關(guān)性分析GPI與RA活動性呈正相關(guān)(r=0.723，P<0.05)。

3 討論

RA是由免疫功能紊亂誘導(dǎo)的自身免疫性疾病，其致殘率與病死率高。有報道顯示，未進(jìn)行干預(yù)的RA患者2 a內(nèi)即可出現(xiàn)不可逆骨關(guān)節(jié)破壞，嚴(yán)重影響其生活質(zhì)量[9]。目前尚未完全明確其發(fā)病機(jī)制，既往研究認(rèn)為，自身抗原引起的促炎性輔助性T細(xì)胞1(helper T cell,Th1)活化是引起RA發(fā)病的主要原因[10]。沈?qū)殠r等[11]研究發(fā)現(xiàn)，RF多種自身抗原及抗體均在RA發(fā)病中起重要作用?？乖M(jìn)入人體后被巨噬細(xì)胞吞噬，經(jīng)消化后與細(xì)胞膜結(jié)合形成復(fù)合物，被T細(xì)胞受體識別、活化后，分泌大量生長因子、細(xì)胞因子，活化B淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致免疫球蛋白水平上調(diào)，引起RF及其他部分抗體濃度上升，誘導(dǎo)關(guān)節(jié)產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，造成關(guān)節(jié)功能破壞。

但是，目前尚未明確引起RA發(fā)病的初始抗原，對RA活動度的診斷多依靠血清學(xué)指標(biāo)、影像學(xué)指標(biāo)及臨床癥狀等，但對RA嚴(yán)重程度及預(yù)后評估均存在一定的缺陷[12]。GPI屬磷酸葡萄糖異構(gòu)酶，是關(guān)節(jié)腔內(nèi)催化6-磷酸葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸果糖的關(guān)鍵酶，可誘導(dǎo)髓樣細(xì)胞分化為單核細(xì)胞，促進(jìn)B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞[13]。近年來發(fā)現(xiàn)其與自身免疫性疾病的發(fā)病存在一定的聯(lián)系[14]。首先，可溶性GPI可與GPI抗體結(jié)合，沉積于血管內(nèi)皮細(xì)胞壁，經(jīng)由Fc受體介導(dǎo)，激活補(bǔ)體誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎癥；其次，GPI與抗GPI抗體結(jié)合，直接附著于內(nèi)皮細(xì)胞表層，促使炎癥細(xì)胞遷移至關(guān)節(jié)局部，同時，二者形成的免疫復(fù)合物可誘導(dǎo)大量炎癥因子分泌，加重關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)。姜國平等[15]發(fā)現(xiàn)，GPI可調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)，導(dǎo)致血管樣滑膜增殖，引起軟骨降解，導(dǎo)致骨破壞。有研究者發(fā)現(xiàn)，在T細(xì)胞受體轉(zhuǎn)基因小鼠中，被動轉(zhuǎn)移抗GPI自身抗體可引起關(guān)節(jié)炎，同時GPI與抗GPI自身抗體結(jié)合可形成免疫復(fù)合物，加重關(guān)節(jié)炎癥[16]。也有臨床研究顯示，RA高活動性患者血清GPI水平高于低活動性患者，認(rèn)為GPI水平與RA活動性呈正相關(guān)[17]。但對其他風(fēng)濕病與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎GPI水平的差異及GPI與RA病情進(jìn)展的關(guān)系尚少見報道。本研究選取其他風(fēng)濕病、正常健康人作為對照，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，RA患者血清GPI水平明顯高于其他風(fēng)濕病患者及正常健康人；同時，RA活動期患者GPI水平高于非活動期RA患者。同時進(jìn)行ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，當(dāng)GPI為0.73 mg·L-1時，GPI診斷RA的敏感度為79.0%，特異度為64.5%，明顯高于王夢濤等[18]報道的常規(guī)血清學(xué)指標(biāo)診斷結(jié)果，提示GPI對RA診斷有較高的價值。此外，相關(guān)性分析結(jié)果顯示，CPI水平與RA活動度呈正相關(guān)，動態(tài)監(jiān)測GPI有助于RA病情評估。另外，GPI診斷RA有較高的敏感度及特異性，表明GPI抗原檢測可能成為RA診斷的新標(biāo)志物。

綜上所述，RA患者血清GPI水平高，且其水平變化與疾病活動度呈正相關(guān)，可作為疾病嚴(yán)重程度的預(yù)測依據(jù)。

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