線粒體泛素連接酶在帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛患者腦脊液中的表達(dá)及意義

涂濤 葉玙 董蜀華

成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院麻醉科（成都 610500）

帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛（postherpetic neuralg，PHN）是帶狀皰疹最常見也是最難治療的并發(fā)癥，嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量，甚至可能導(dǎo)致臨床抑郁或性格改變［1?2］。然而目前關(guān)于 PHN 的病理機(jī)制尚未完全闡明，除了周圍神經(jīng)干炎癥以及神經(jīng)損傷后傳導(dǎo)異常外，PHN持續(xù)疼痛的主要原因在于中樞敏化［3］；另外，在神經(jīng)病理性疼痛中神經(jīng)元細(xì)胞線粒體功能異常成為疼痛發(fā)生的共識［4］，而線粒體泛素連接酶（mitochondrial ubiquitin ligase，MI?TOL）與線粒體的形態(tài)及功能的維持密切相關(guān)［5］。PHN本身就是一種神經(jīng)病理性疼痛，但MITOL在PHN發(fā)生發(fā)展過程中扮演什么樣的角色目前還不得而知。本研究通過檢測PHN患者腦脊液中MI?TOL表達(dá)，分析其與臨床特征的關(guān)系，從而探討PHN可能的發(fā)病機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年8月到2016年12月在我院診斷為帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛患者45例為PHN組，其中男25例，女20例，平均（42.8±10.2）歲。以同期年齡、性別相匹配的38例椎間盤突出癥患者為IDH組，其中男22例，女16例，平均（43.5±11.4）歲。帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛診斷入選標(biāo)準(zhǔn)：符合《臨床皮膚病學(xué)》中PHN的診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］；愿意接受臨床試驗(yàn)；能夠正確評估疼痛狀況和程度；視覺類比量（visual analogue scale，VAS）≥4分。IDH組入選標(biāo)準(zhǔn)：臨床癥狀及MRI診斷為腰椎間盤突出癥；愿意接受臨床試驗(yàn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠及哺乳期婦女；嚴(yán)重心肺肝腎功能不全；合并有惡性腫瘤；免疫功能明顯低下；合并其它神經(jīng)病理性疼痛。經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者及家屬知情并簽署同意書。

1.2 腦脊液收集及指標(biāo)檢測 腦脊液收集均由同一醫(yī)師嚴(yán)格無菌操作完成，穿刺時間選擇在上午8：00～10：00，部位選擇腰椎第3～4間隙抽取每位納入者腦脊液樣本3 mL，穿刺后使納入者去枕平臥4～6 h，并觀察有無頭痛、惡心嘔吐、腰痛等情況。腦脊液樣本離心（3 000 g/5 min）后儲存于-80℃冰箱中進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定MITOL表達(dá)，相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。最后將兩組患者腦脊液分別混勻，通過蛋白印跡法（Western blot）測定MITOL表達(dá)并使用Flurochem9900?50凝膠圖像處理系統(tǒng)分析條帶光密度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)用于連續(xù)性數(shù)據(jù)檢驗(yàn)，卡方檢驗(yàn)用于分類數(shù)據(jù)檢驗(yàn)，另采用Logistic回歸方法分析影響因素，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MITOL在兩組患者腦脊液中表達(dá)情況 通過ELISA及Western blot檢測顯示，IDH組中MI?TOL表達(dá)水平顯著低于PHN組（圖1）。

圖1 MITOL在兩組患者腦脊液中表達(dá)情況Fig.1 Expression of MITOL in the cerebrospinal fluid of two groups

2.2 PHN患者腦脊液MITOL表達(dá)與其臨床特征關(guān)系 通過ELISA法檢測顯示，PHN患者腦脊液MITOL表達(dá)中位數(shù)為4.1 pg/mL。中位數(shù)用于將PHN組分為MITOL低表達(dá)與高表達(dá)患者。通過分析顯示，PHN患者腦脊液MITOL表達(dá)與患者性別、皰疹面積及病程長短比較均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而與患者年齡及疼痛程度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

2.3 PHN患者的影響因素 將年齡、性別、皰疹面積、病程長短、疼痛程度進(jìn)行Logistic回歸分析。結(jié)果顯示年齡及疼痛程度是PHN發(fā)生的危險(xiǎn)因素（表2）。

3 討論

PHN是帶狀皰疹最為常見的并發(fā)癥之一，臨床表現(xiàn)以痛覺過敏及痛覺異常為主，嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量［7］。目前PHN治療措施有很多，但效果不佳，主要原因是其病理機(jī)制不清楚。因此，對PHN相關(guān)發(fā)病機(jī)制進(jìn)行探討，尋找PHN治療靶點(diǎn)具有重要意義。

PHN是一種以外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變?yōu)橹鞯纳窠?jīng)病理性疼痛［8］。前期實(shí)驗(yàn)中筆者發(fā)現(xiàn)PHN大鼠脊髓背角組織MITOL表達(dá)升高［9］。然而MI?TOL在臨床PHN患者中的表達(dá)是不清楚的，加之對臨床PHN患者而言外周和中樞神經(jīng)病理組織及細(xì)胞收集存在很大的困難且不易被患者及家屬接受。因此我們選擇與外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)非常接近的病理樣本（腦脊液）進(jìn)行研究，結(jié)果顯示MI?TOL在臨床PHN患者腦脊液中表達(dá)也升高。因此，筆者認(rèn)為MITOL上調(diào)表達(dá)可能參與了PHN發(fā)生及發(fā)展過程。

研究顯示，神經(jīng)元細(xì)胞中線粒體功能在神經(jīng)病理性疼痛中發(fā)揮了重要作用，其功能異?？赡艹蔀樯窠?jīng)病理性疼痛的發(fā)病機(jī)制［10］。對大多數(shù)細(xì)胞而言，線粒體的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、數(shù)量都處于一種動態(tài)的變化之中，其中分裂和融合是線粒體形態(tài)變化的兩個主要方面，通過這種均衡來維持線粒體的形態(tài)和功能［11］。線粒體的融合是由定位于線粒體內(nèi)膜的視神經(jīng)萎縮因子1（optic atrophy 1，OPA1）和定位于外膜的線粒體融合蛋白1，2（mi?to?fusin 1 and 2，Mfn1和Mfn2）共同介導(dǎo)完成，而哺乳動物細(xì)胞中動力相關(guān)蛋白1（dynamic related protein?1，Drp?1）和線粒體外膜分裂蛋白1（fission protein 1，F(xiàn)is?1）是線粒體分裂的重要因子。相關(guān)研究表明MITOL是通過調(diào)節(jié)Mfn2和Drp?1的活性來控制線粒體的形態(tài)［12?13］。WANG 等［14］認(rèn)為 MI?TOL可阻止Drp?1在線粒體里過度集聚及減弱線粒體的分裂。本研究中MITOL在PHN表達(dá)升高，會不會因?yàn)镸ITOL的過表達(dá)來維持神經(jīng)元細(xì)胞線粒體分裂和融合動態(tài)平衡，進(jìn)而保護(hù)了神經(jīng)元細(xì)胞線粒體的形態(tài)和功能，阻止了PHN的繼續(xù)發(fā)展，有待進(jìn)一步的研究。

表1 PHN患者腦脊液MITOL表達(dá)與其臨床特征關(guān)系Tab.1 The relationship between MITOL and its clinical features 例

表2 PHN患者的影響因素Tab.2 Influencing factors of PHN patients

既往PHN相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素分析顯示年齡及疼痛程度是風(fēng)險(xiǎn)因素，年齡越大其疼痛程度越嚴(yán)重，PHN發(fā)生率越高［15］。原因可能是年紀(jì)越大，免疫力越差，一旦發(fā)生皰疹，病毒對神經(jīng)造成的傷害也越難自我修復(fù)，發(fā)生后遺神經(jīng)痛的概率也就越大，疼痛程度也就越重，持續(xù)時間也就越久。筆者根據(jù)MITOL表達(dá)情況將PHN患者分為低表達(dá)和高表達(dá)兩類，通過分析顯示，MITOL表達(dá)與患者性別、皰疹面積及病程長短無關(guān)（P＞0.05），而與患者年齡及疼痛程度有關(guān)，即年齡越大、臨床疼痛程度越嚴(yán)重，其腦脊液MITOL表達(dá)就越高。另外，Logistic回歸分析結(jié)果顯示年齡和疼痛程度是PHN發(fā)生的危險(xiǎn)因素，因此對帶狀皰疹早期就疼痛劇烈的老年患者應(yīng)給予足夠鎮(zhèn)痛治療，降低其向PHN發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，MITOL在臨床帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛患者腦脊液中表達(dá)升高，其可能與患者年齡及疼痛程度有關(guān)。

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