高效液相色譜法測(cè)定決明退障口服液中沙苑子苷、芍藥苷的含量Δ

陳玲玲，金 璇，趙 穎(南京市中醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇 南京 210001)

決明退障口服液為南京市中醫(yī)院的醫(yī)院制劑，主要由何首烏(制)、決明子(炒)、白芍(麩炒)、潼蒺藜及沙苑子等9味藥組成，功效為平肝養(yǎng)血、益腎滋陰，用于治療各種內(nèi)眼病，以明目護(hù)眼。根據(jù)《江蘇省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高工作方案》的通知，結(jié)合南京市中醫(yī)院制劑的實(shí)際情況，需對(duì)醫(yī)院制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行完善[1]。而醫(yī)院制劑普遍存在工藝簡(jiǎn)便、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)不完善的問(wèn)題，不利于全面掌握制劑的質(zhì)量。本研究參考相關(guān)文獻(xiàn)[2-6]，建立高效液相色譜法測(cè)定決明退障口服液中沙苑子苷、芍藥苷的含量。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1290 Infinity超高壓液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)；VWD紫外檢測(cè)器(安捷倫科技有限公司)；AL104電子天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]；KQ-500E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；燒杯，容量瓶(10、25和50 ml)，移液管，錐形瓶等。Aglient ZORBAX Eclipse Plus C18柱(濟(jì)南賽暢科學(xué)儀器有限公司)；Diamonsil C18(2)柱(迪馬公司，柱號(hào)：225-1125)。

1.2 藥品與試劑

決明退障口服液(批準(zhǔn)文號(hào)：蘇藥制字Z04000796；批號(hào)：150730、150827及151119)；芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)：110736—201438)、沙苑子苷對(duì)照品(批號(hào)：111803—201403)，均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇、乙醇、乙腈及磷酸等試劑均購(gòu)自南京化學(xué)試劑有限公司。沙苑子(批號(hào)：150402)、炒白芍(批號(hào)：150301)由亳州永剛中藥飲片廠提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 沙苑子藥材中沙苑子苷的含量測(cè)定

2.1.1 溶液的制備：(1)對(duì)照品溶液。取沙苑子苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含20 μg的溶液。(2)供試品溶液。取沙苑子藥材粉末(過(guò)3號(hào)篩， 50目)約0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇25 ml，稱定錐形瓶的總質(zhì)量，水浴加熱回流1 h，取出放冷，再稱定錐形瓶質(zhì)量，缺失的質(zhì)量用60%乙醇補(bǔ)足，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得[7]。

2.1.2 色譜條件：色譜柱為Aglient ZORBAX Eclipse Plus C18柱(2.1 mm×50 mm，1.8 μm)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸溶液(V∶V=21 ∶79)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為266 nm。理論板數(shù)按沙苑子苷峰計(jì)算應(yīng)≥4 000。

2.1.3 含量測(cè)定：精密吸取沙苑子的對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μl，按“2.1.2”項(xiàng)下條件進(jìn)樣測(cè)定，平行進(jìn)樣2次，以外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算樣品中的沙苑子苷的含量。結(jié)果顯示，沙苑子藥材中沙苑子苷的含量為0.070 6%，高于《中華人民共和國(guó)藥典》(2015版)沙苑子藥材項(xiàng)下“含沙苑子苷不低于0.06%”的要求，見(jiàn)表1。

表1 沙苑子藥材中沙苑子苷的含量測(cè)定結(jié)果Tab 1 Determination of complanatuside in Milkvetch herb

2.2 決明退障口服液中沙苑子苷的含量測(cè)定

2.2.1 溶液的制備：(1)對(duì)照品溶液。取沙苑子苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含20 μg的溶液。(2)供試品溶液。用移液管精密量取樣品10 ml，加稀乙醇定容至50 ml容量瓶中，超聲(頻率40 kHz，功率500 W)處理20 min，放冷，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 色譜條件：與“2.1.2”項(xiàng)下條件相同。

2.2.3 線性關(guān)系考察：精密量取對(duì)照品溶液，加甲醇制得質(zhì)量濃度分別為0.01、0.02、0.04、0.08、0.16及0.32 mg/ml的溶液。分別吸取上述溶液各10 μl，按“2.2.2”項(xiàng)下條件進(jìn)樣測(cè)定峰面積，以平均峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)。得線性回歸方程Y=21 338X-29.63，r=0.999 6(n=6)。結(jié)果表明，沙苑子苷進(jìn)樣量在1～32 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，見(jiàn)圖1。

圖1 沙苑子苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig 1 Standard curve of complanatoside

2.2.4 含量測(cè)定：分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μl注入高效液相色譜儀中，平行進(jìn)樣2次，取平均值，再以外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算樣品中沙苑子苷的含量，見(jiàn)表2。

表2 決明退障口服液中沙苑子苷的含量測(cè)定結(jié)果Tab 2 Determination of complanatuside in juemingtuizhang oral liquid

2.3 沙苑子苷轉(zhuǎn)移率的測(cè)定

沙苑子苷的轉(zhuǎn)移率=決明退障口服液中沙苑子苷的含量/沙苑子藥材中沙苑子苷的含量×100%。由上述結(jié)果和公式計(jì)算得出，決明退障口服液中沙苑子苷的轉(zhuǎn)移率為80.31%。

2.4 炒白芍藥材中芍藥苷的含量測(cè)定

2.4.1 溶液的制備：(1)對(duì)照品溶液。精密稱定芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 ml含60 μg的溶液。(2)炒白芍藥材溶液。取炒白芍藥材中粉約0.1 g，精密稱定，置于50 ml容量瓶中，加50%乙醇35 ml，超聲處理(頻率45 kHz,功率250 W)30 min，放冷，加稀乙醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得炒白芍藥材溶液[8]。

2.4.2 色譜條件：色譜柱為Diamonsil C18(2)柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸溶液(V∶V=14 ∶86)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)≥2 000。

2.4.3 含量測(cè)定：精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液10 μl，分別注入高效液相色譜儀，平行進(jìn)樣2次，以外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算樣品中的芍藥苷的含量。結(jié)果顯示，炒白芍藥材中芍藥苷的含量為3.2%，高于《中華人民共和國(guó)藥典》(2015版)炒白芍藥材項(xiàng)下“含芍藥苷不低于1.2%”的要求，見(jiàn)表3。

表3 炒白芍藥材中芍藥苷的含量測(cè)定Tab 3 Determination of paeoniflorin in parched white peony root herbs

2.5 決明退障口服液中芍藥苷的含量測(cè)定

2.5.1 溶液的制備：(1)對(duì)照品溶液。精密稱定芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 ml含60 μg的溶液。(2)供試品溶液。用移液管精密量取樣品10 ml，加50%乙醇定容至50 ml容量瓶中，超聲(頻率40 kHz,功率500 W)20 min后取出，待冷卻后濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

2.5.2 色譜條件。與“2.4.2”項(xiàng)下條件相同。

2.5.3 線性關(guān)系考察：精密量取對(duì)照品溶液，加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為0.01、0.03、0.06、0.12、0.24及0.48 mg/ml的溶液。分別吸取上述溶液各10 μl，按“2.5.2”項(xiàng)下條件進(jìn)樣測(cè)定峰面積。以平均峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)，得到線性回歸方程為Y=12 467X-41.99，r=0.999 9(n=6)。表明芍藥苷進(jìn)樣量在1～48 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，見(jiàn)圖2。

圖2 芍藥苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig 2 Standard curve of paeoniflorin

2.5.4 含量測(cè)定：精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μl注入液相色譜儀，平行進(jìn)樣2次，用外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算樣品中的芍藥苷的含量，見(jiàn)表4。

表4 決明退障口服液中芍藥苷的含量測(cè)定結(jié)果Tab 4 Determination of paeoniflorin in juemingtuizhang oral liquid

2.6 芍藥苷的轉(zhuǎn)移率的測(cè)定

芍藥苷的轉(zhuǎn)移率=決明退障口服液中芍藥苷的含量/炒白芍藥材中芍藥苷的含量×100%[9]。由上述結(jié)果和公式計(jì)算得出，決明退障口服液中芍藥苷的轉(zhuǎn)移率為64.69%。

3 討論

參照《中華人民共和國(guó)藥典》(2015版)，本研究選擇黃酮類成分中含量較高的沙苑子苷作為沙苑子含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果顯示，沙苑子中沙苑子苷含量的RSD為2.28%，而決明退障口服液中沙苑子苷含量的RSD為0.75%，重復(fù)性良好。但配制溶液過(guò)程中，3份供試品與3份對(duì)照品溶液仍然存在一定的誤差，所以在各環(huán)節(jié)中，需增強(qiáng)操作熟練程度，減少誤差。決明退障口服液中芍藥苷的轉(zhuǎn)移率為64.69%，低于沙苑子苷的80.31%。查閱相關(guān)文獻(xiàn)[10-14]發(fā)現(xiàn)，加熱、蒸餾或超聲時(shí)間過(guò)長(zhǎng)均可破壞芍藥苷成分。芍藥苷本身結(jié)構(gòu)中含有苯甲酸酯鍵，所以在含水溶液中會(huì)因受熱而變得極不穩(wěn)定、易分解并且受其他成分的干擾，而醫(yī)院制劑大多為水提制備，故芍藥苷的含量及轉(zhuǎn)移率均有不同程度的降低。

綜上所述，決明退障口服液中芍藥苷的轉(zhuǎn)移率為64.69%，沙苑子苷的轉(zhuǎn)移率為80.31%，均>50%。本研究可為決明退障口服液的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考數(shù)據(jù)。

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