MRP 1蛋白表達(dá)情況與乳腺癌新輔助化療療效的關(guān)系

王文勝，馬志強(qiáng)，張冠男，張?bào)銚P(yáng)，李帥，吳海濱，師丙帥，趙愛國，何建鑫

河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院乳腺甲狀腺腫瘤外科，河南開封4750000

乳腺癌是中國女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，全世界約12.2%的新發(fā)乳腺癌和9.6%的乳腺癌死亡病例出現(xiàn)在中國[1]。流行病學(xué)研究顯示，乳腺癌的發(fā)病率可達(dá)56～105/10萬，且近年來中國大陸地區(qū)發(fā)病率呈逐漸上升的趨勢[1-2]。新輔助化療是目前乳腺癌系統(tǒng)性化療方式之一，通過靜脈應(yīng)用化療藥物，促進(jìn)腫瘤病灶組織的萎縮，為改善乳腺癌的遠(yuǎn)期生存預(yù)后提供基礎(chǔ)。但新輔助化療的治療敏感性存在明顯差異，部分化療不敏感的患者，治療后遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生率或中位生存時(shí)間等主要指標(biāo)均無明顯改善[3-4]。越來越多的研究顯示，分子生物學(xué)相關(guān)因子的改變，是影響乳腺癌新輔助化療效果的重要因素，其中之一是能夠干預(yù)耐藥相關(guān)蛋白1（multidrug resistance associated protein 1，MRP1）的表達(dá)，影響化療藥物的攝取及代謝，干預(yù)靜脈化療效果[5]。為了進(jìn)一步揭示MRP1在乳腺癌新輔助化療過程中的作用，本次研究選取實(shí)施新輔助化療的150例患者進(jìn)行回顧性分析，探討了MRP1的異常表達(dá)及其與化療效果的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月至2016年1月于河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院實(shí)施新輔助化療的150例患者的臨床資料進(jìn)行回顧性分析，根據(jù)化療效果分為有效組105例及無效組45例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①乳腺癌的診斷、治療標(biāo)準(zhǔn)參考《中國抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范（2013版）》[6]；②所有患者均經(jīng)空心針穿刺取活組織檢測確診；③新輔助化療前患者的血液學(xué)檢測正常；④具有影像學(xué)可測量的實(shí)體病灶；⑤美國東部腫瘤協(xié)作組織（ECOG）評分0～2分。排除標(biāo)準(zhǔn)：①轉(zhuǎn)移性乳腺癌；②既往伴有干燥綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等免疫性疾病；③既往具有放化療史；④伴有精神疾病或認(rèn)知功能障礙；⑤伴有明顯的甲狀腺功能亢進(jìn)。有效組，年齡34～67歲，平均（52.4±10.5）歲；病灶大?。海? cm 65例，≤2 cm 40例；組織學(xué)分級：高分化30例，中分化49例，低分化26例；TNM分期：Ⅱ期72例，Ⅲ期33例。無效組，年齡36～65歲，平均（50.9±11.3）歲；病灶大?。海? cm 32例，≤2 cm 13例；組織學(xué)分級：高分化8例，中分化12例，低分化25例；TNM分期：Ⅱ期21例，Ⅲ期24例。

1.2 標(biāo)本采集及免疫組化染色

采用石蠟切片脫蠟至水，采用離子水進(jìn)行反復(fù)洗滌，加入牛奶液體封閉抗體，封閉時(shí)間為5 min，加入MRP1蛋白抗體（鼠來源，購自abcum公司），37℃孵育2 h，采用磷酸鹽緩沖液洗滌3次，滴加熒光染色標(biāo)記的二抗抗體（購自abcum公司），37℃孵育30 min，加入磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗滌，采用顯色劑（購自南京凱基生物制劑公司）顯色，封片，鏡下觀察。

免疫組化結(jié)果判定：MRP1蛋白的陽性著色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)。①根據(jù)著色強(qiáng)度：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為褐色、黑色；②根據(jù)陽性細(xì)胞比例：陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。兩種積分相乘總分＜3分為“－”表達(dá)，3～5分為“+”表達(dá)，6～9分為“++”表達(dá)，＞9分為“+++”表達(dá)；總分＜3分為陰性，≥3分為陽性。

1.3 新輔助化療方案

多西紫杉醇+表柔比星（TA）方案：第1天給予75 mg/m2多西紫杉醇及75 mg/m2表柔比星靜脈滴注。多西紫杉醇+順鉑（TP）方案：第1天75 mg/m2多西紫杉醇及75 mg/m2順鉑靜脈滴注，21 d為一個(gè)療程。多西紫杉醇+環(huán)磷酰胺+曲妥珠單抗（TCH）方案：第1天多西紫杉醇75 mg/m2靜脈滴注，第1天環(huán)磷酰胺500 mg/m2靜脈滴注，21 d后重復(fù)，共6個(gè)療程；第1天曲妥珠單抗2 mg/kg靜脈滴注，21 d后重復(fù)，共6～8次。連續(xù)化療21 d為一個(gè)周期，化療的過程中同時(shí)給予對癥治療，化療療程結(jié)束21 d后行手術(shù)治療[6]。

新輔助化療方案同時(shí)包括紫杉醇類或蒽環(huán)類藥物，HER陽性的患者同時(shí)聯(lián)合抗HER治療，但避免與蒽環(huán)類藥物同時(shí)應(yīng)用，必要時(shí)可以采用序貫方案化療：多柔比星或表柔比星+環(huán)磷酰胺4個(gè)療程后轉(zhuǎn)紫杉醇或多西他賽4個(gè)療程[6]。

1.4 療效判斷

采用日本Panasonic公司生產(chǎn)的IU-22系列超聲診斷儀器進(jìn)行檢查，檢查時(shí)超聲頻率設(shè)置為5.0～6.5 MHz，選擇腫瘤最大直徑平面，檢測腫瘤病灶組織的直徑。依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[3]，將新輔助化療后的患者根據(jù)病灶變化分為：完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩(wěn)定（SD）、疾病進(jìn)展（PD）。CR：可見病灶完全消失，維持1個(gè)月以上；PR：腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積縮小達(dá)到50%及以上；SD：腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積縮?。?0%，增大＜25%；PD：患者出現(xiàn)1個(gè)或多個(gè)病灶的腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積≥25%。其中CR+PR定義為有效，SD+PD定義為無效。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；多因素分析采用非條件Logistic回歸分析法；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MRP 1蛋白表達(dá)程度

無效組患者的MRP1蛋白表達(dá)強(qiáng)度大于有效組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.504，P＜0.001）。（表1）

表1 兩組患者M(jìn)RP 1蛋白表達(dá)情況[ n（%）]

2.2 臨床特征比較

有效組與無效組患者的年齡、月經(jīng)狀態(tài)、病灶直徑、化療方案及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；有效組Ⅱ期患者及高+中分化患者比例高于無效組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表 2）

2.3 療效影響因素的多因素分析

以患者臨床療效作為自變量，TNM分期、組織學(xué)分級、MRP1蛋白表達(dá)作為因變量進(jìn)行非條件Logistic回歸分析，結(jié)果顯示TNM分期增高、組織學(xué)分級低分化、MRP1蛋白陽性表達(dá)是乳腺癌患者化療效果不佳的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。（表3）

表2 兩組患者臨床特征的比較

表3 多因素分析結(jié)果

3 討論

新輔助化療治療乳腺癌的臨床效果，主要體現(xiàn)為下列兩個(gè)方面：①新輔助化療能夠減輕乳腺癌病灶組織對乳腺周邊正常組織的浸潤程度，為手術(shù)提供根治性切除的條件；②新輔助化療能夠降低癌細(xì)胞的增殖速度，促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡，在降低癌細(xì)胞的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮積極的臨床意義，改善患者的高腫瘤負(fù)荷癥狀，降低患者的病死率。

生物學(xué)因子的改變，能夠影響癌細(xì)胞DNA的轉(zhuǎn)錄調(diào)控和癌細(xì)胞的多種生物學(xué)特征，干預(yù)乳腺癌的病情進(jìn)展[7-8]。MRP1在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要的作用，能夠調(diào)控ATP依賴性跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的激活，加劇紫杉醇類或鉑類化療藥物的排泄，并能夠通過形成囊泡機(jī)制，加劇化療藥物的代謝[9-10]。同時(shí)MRP1能誘導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞微環(huán)境的形成，增強(qiáng)其對于腫瘤細(xì)胞膜的保護(hù)作用，抑制腫瘤細(xì)胞的破壞和降解[11-12]。MRP1已經(jīng)被證實(shí)在甲狀腺癌、卵巢癌、肝癌等惡性腫瘤的耐藥過程中發(fā)揮了一定的作用，其能夠降低靜脈化療的敏感性，提高腫瘤細(xì)胞對于靜脈化療藥物的耐藥程度。但迄今為止缺乏對于MRP1表達(dá)的研究及其對乳腺癌新輔助化療結(jié)局關(guān)系的研究。

本次研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌新輔助化療有效的患者中，MRP1蛋白陰性或弱陽性表達(dá)率較高，而陽性或強(qiáng)陽性表達(dá)率較低，提示MRP1蛋白的表達(dá)與乳腺癌的化療結(jié)局具有密切的關(guān)系，從機(jī)制上考慮MRP1蛋白的表達(dá)與乳腺癌新輔助化療臨床結(jié)局的關(guān)系，可能與下列兩個(gè)方面的因素有關(guān)：①M(fèi)RP1蛋白的陽性表達(dá)，能夠刺激乳腺癌細(xì)胞上游DNA調(diào)控因子或者轉(zhuǎn)錄因子的激活，增強(qiáng)癌細(xì)胞的增殖風(fēng)險(xiǎn)；②MRP1蛋白通過配體結(jié)合的信號(hào)通路機(jī)制，促進(jìn)囊泡的釋放，并增強(qiáng)囊泡包裹癌細(xì)胞內(nèi)化療藥物的能力，促進(jìn)化療藥物的排出。張馨等[13]和姚宇鋒等[14]研究者在探討不同化療效果的乳腺癌血清學(xué)分子生物學(xué)因子譜后發(fā)現(xiàn)，MRP1蛋白的陽性表達(dá)率每下降10%，乳腺癌新輔助化療的臨床效果可上升5%左右，同時(shí)乳腺癌患者的5年生存率越高，病死率越低，MRP1蛋白的陽性表達(dá)率越低。在探討不同的臨床特征對乳腺癌化療結(jié)局的影響過程中發(fā)現(xiàn)，TNM分期、組織學(xué)分級是影響化療結(jié)局的危險(xiǎn)因素，原因可能是化療難以完全殺滅這類患者的亞臨床腫瘤細(xì)胞，最終出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致化療藥物作用的失敗。最后，本次研究發(fā)現(xiàn)MRP1蛋白陽性表達(dá)也是乳腺癌患者化療效果不佳的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，進(jìn)一步提示了MRP1蛋白對于乳腺癌化療結(jié)局的影響。

綜上所述，本研究探討了乳腺癌患者臨床特征，尤其是MRP1蛋白表達(dá)與乳腺癌新輔助化療效果之間的關(guān)系。研究表明MRP1蛋白陽性表達(dá)是乳腺癌患者新輔助化療無效的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，二者是否存在直接或間接關(guān)聯(lián)，尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。但臨床上對于MRP1蛋白陽性表達(dá)的乳腺癌患者，系統(tǒng)性治療除化療外，還應(yīng)考慮更多綜合性的治療措施，以期改善乳腺癌患者的預(yù)后。

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