TTF- 1、EGFR腫瘤浸潤(rùn)性樹(shù)突狀細(xì)胞在肺腺癌中的表達(dá)情況及其臨床意義

姜明明，邸慶國(guó)，買(mǎi)智濤，萬(wàn)善志，孫寶華

滄州市中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河北 滄州0610140

肺腺癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，多好發(fā)于女性，在發(fā)病早期即可通過(guò)血液、淋巴結(jié)等方式擴(kuò)散，腫瘤細(xì)胞的快速生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者預(yù)后不良的主要危險(xiǎn)因素[1-2]。研究顯示，每年有182萬(wàn)例新發(fā)肺癌患者，5年生存率僅為2%～30%[3]。腺癌是肺癌較為常見(jiàn)的一種類(lèi)型，其惡性程度較高，主要原因是腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移較快，對(duì)化療藥物耐藥率高，因此5年生存率非常低。據(jù)報(bào)道，免疫抑制在腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中具有重要作用[4-5]。樹(shù)突狀細(xì)胞是機(jī)體的一種抗原呈遞細(xì)胞，其功能最大，在腫瘤患者中，主要將腫瘤細(xì)胞表面分子標(biāo)志物和代謝產(chǎn)物等呈遞給細(xì)胞毒性T細(xì)胞等，進(jìn)而殺傷腫瘤細(xì)胞[6-7]，尤其是腫瘤組織中浸潤(rùn)的樹(shù)突狀細(xì)胞，臨床意義更大，這種細(xì)胞被稱為腫瘤浸潤(rùn)性樹(shù)突狀細(xì)胞（tumor infiltrating dendritic cell，TIDC）。另外，研究顯示表皮生長(zhǎng)因子受體（epithelial growth fac-tor receptor，EGFR）、甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1（thyroid transcription factor-1，TTF-1）與腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受有關(guān)。因此本研究旨在探討TIDC、EGFR、TTF-1表達(dá)情況，進(jìn)一步探討肺腺癌發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中的分子機(jī)制，為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性收集滄州市中心醫(yī)院2015年1月至2017年6月收治的肺腺癌患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均病理確診為肺腺癌；②在滄州市中心醫(yī)院接受手術(shù)切除，可獲得腫瘤組織和癌旁組織；③年齡為18～75歲；④臨床病歷資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他類(lèi)型肺癌或其他腫瘤；②復(fù)發(fā)性肺癌；③術(shù)前曾接受放化療等特殊治療；④12個(gè)月內(nèi)曾接受免疫調(diào)節(jié)劑治療；⑤系統(tǒng)性紅斑狼瘡等免疫系統(tǒng)疾??；⑥感染；⑦心肝腎等臟器功能不全。共納入肺腺癌患者100例，其中男性44例，女性56例；年齡43～75歲，平均（35.82±5.12）歲；平均體重指數(shù)（23.58±2.99）kg/m2；平均腫瘤直徑（4.38±1.08）cm；臨床TNM分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期43例，Ⅲ期41例，Ⅳ期4例；腫瘤細(xì)胞分化程度：高分化41例，中分化34例，低分化25例。

1.2 觀察指標(biāo)

主要觀察指標(biāo)包括TIDC、EGFR和TTF-1的表達(dá)水平；次要觀察指標(biāo)為臨床TNM分期、腫瘤細(xì)胞分化程度，分析TIDC、EGFR和TTF-1與肺腺癌患者TNM分期、分化程度的關(guān)系。

1.3 檢測(cè)方法

所有患者入院后行“肺腺癌切除術(shù)”，術(shù)中取腫瘤組織（腫瘤組織中心部位）和癌旁組織（距腫瘤邊緣30 mm以上的健康組織），行免疫組化法檢測(cè)腫瘤組織和癌旁組織中TIDC和TTF-1的表達(dá)情況，400倍鏡下對(duì)TIDC細(xì)胞計(jì)數(shù)，隨機(jī)抽取5個(gè)視野，取其均值作為該患者的TIDC數(shù)密度。取組織使用RPMI 1640培養(yǎng)基消化后形成細(xì)胞懸液，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC細(xì)胞的MHC-Ⅱ和CD54表型。同時(shí)根據(jù)染色陽(yáng)性細(xì)胞百分比、染色強(qiáng)度兩個(gè)方面對(duì)TTF-1情況進(jìn)行評(píng)分：染色強(qiáng)度為無(wú)色、淺黃色、黃色和棕黃色分別為0～3分，陽(yáng)性細(xì)胞百分比為＜10%、10%～49%、50%～79%和≥80%分別為1～4分，兩者得分相乘為最終評(píng)分，最終評(píng)分≥4分為陽(yáng)性。EGFR表達(dá)情況采用熒光定量PCR法檢測(cè)。相關(guān)試劑均購(gòu)自廈門(mén)艾德公司。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或配對(duì)t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腫瘤組織、癌旁組織中TIDC、TTF- 1和EGFR的表達(dá)情況

腫瘤組織中TIDC數(shù)密度、MHC-Ⅱ陽(yáng)性DC、CD54陽(yáng)性DC均明顯低于癌旁組織，TTF-1陽(yáng)性率、EGFR突變率均明顯高于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

2.2 TIDC、TTF- 1和EGFR與腫瘤細(xì)胞分化程度的關(guān)系

腫瘤細(xì)胞為中低分化的患者TIDC數(shù)密度、MHC-Ⅱ陽(yáng)性DC、CD54陽(yáng)性DC均低于高分化患者，TTF-1陽(yáng)性率、EGFR突變率均高于高分化患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

2.3 TIDC、TTF- 1和EGFR與腫瘤TNM分期的關(guān)系

TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期的患者TIDC數(shù)密度、MHC-Ⅱ陽(yáng)性DC、CD54陽(yáng)性DC均低于Ⅰ～Ⅱ期患者，TTF-1陽(yáng)性率、EGFR突變率均高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表3）

表1 腫瘤組織和癌旁組織中TIDC、TTF- 1和EGFR表達(dá)水平的比較

表2 肺腺癌腫瘤組織中TIDC、TTF- 1和EGFR表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞分化程度的關(guān)系

表3 肺腺癌腫瘤組織中TIDC、TTF- 1和EGFR表達(dá)水平與臨床TNM分期的關(guān)系

3 討論

肺腺癌是肺癌常見(jiàn)的一種組織類(lèi)型，其惡性較高，多起源于黏膜上皮，多見(jiàn)于不吸煙者和女性，雖發(fā)病率較鱗癌低，但其惡性程度高于鱗癌，早期即可通過(guò)血液轉(zhuǎn)移。導(dǎo)致肺腺癌惡性程度高的原因尚不清楚，目前研究顯示可能與TIDC[8]、EGFR[9]和TTF-1[10]的表達(dá)有關(guān)。但相關(guān)研究缺乏，為進(jìn)一步證實(shí)，本研究進(jìn)行了相關(guān)探討，結(jié)果顯示肺腺癌組織中TIDC、MHC-Ⅱ陽(yáng)性DC和CD54陽(yáng)性DC明顯降低，而TTF-1陽(yáng)性率、EGFR突變率則明顯增高（P＜0.01），且這種現(xiàn)象與腫瘤細(xì)胞分化程度、臨床TNM分期有關(guān)。

DC細(xì)胞在特定環(huán)境下可以表現(xiàn)為免疫抑制作用，稱為不成熟DC細(xì)胞，其MHC-Ⅱ和CD54陽(yáng)性率低[11-13]。結(jié)合本研究表明TIDC在腫瘤組織中表達(dá)水平較低，且多為不成熟的調(diào)節(jié)性DC細(xì)胞。作為機(jī)體中功能最強(qiáng)大的抗原呈遞細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞中DC水平下降不利于腫瘤特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞的增殖和活化，因此機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用可明顯降低[14-15]。且MHC-Ⅱ和CD54陽(yáng)性率低下的DC細(xì)胞（即不成熟DC細(xì)胞）能夠通過(guò)分泌抑炎因子促進(jìn)Th1/Th2免疫向Th2免疫漂移，從而增加腫瘤細(xì)胞對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的耐受力[16-17]。因此肺腺癌患者組織中TIDC低表達(dá)，且不成熟比例增高可以通過(guò)介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞對(duì)機(jī)體的免疫耐受而導(dǎo)致肺腺癌患者惡性程度增強(qiáng)。Wojas-Krawczyk等[18]的一項(xiàng)個(gè)案報(bào)道顯示，使用DC細(xì)胞治療肺腺癌，具有較好療效。近些年在肺腺癌患者中關(guān)于TIDC的研究極為缺乏，但是在其他癌癥中的研究證實(shí)了TIDC在腫瘤組織中低表達(dá)，不成熟比例增高，可導(dǎo)致患者臨床預(yù)后惡化[19-20]。

TTF-1相對(duì)分子質(zhì)量為40 kD，是一種核蛋白，其水平在癌癥患者中的高表達(dá)與EGFR突變有關(guān)，TTF-1表達(dá)水平、EGFR突變目前被證實(shí)與肺腺癌組織學(xué)亞型有關(guān)，還可能與腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受有關(guān)。姚娟等[21]證實(shí)了隨著肺腺癌組織中TTF-1表達(dá)的增高，EGFR突變率提高，因此建議對(duì)于肺腺癌患者應(yīng)常規(guī)檢測(cè)TTF-1和EGFR以指導(dǎo)治療。萬(wàn)善志等[22]研究則表明TTF-1在組織中高表達(dá)和EGFR突變率增高是肺腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素。目前研究已證實(shí)靶向突變的表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑治療EGFR突變的肺癌患者具有明顯療效[23]。上述研究支持本研究，均表明TTF-1在組織中高表達(dá)和EGFR突變率增高是肺癌患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素。

綜上所述，TIDC在腫瘤組織中低表達(dá)，且多為不成熟的調(diào)節(jié)性DC細(xì)胞，TTF-1在肺腺癌中高表達(dá)，EGFR突變率增高。EGFR、TTF-1、TIDC均與臨床分期和腫瘤細(xì)胞分化程度有關(guān)。

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