FOXP 1在彌漫性大 B細(xì)胞淋巴瘤患者體內(nèi)表達(dá)及其臨床意義分析

安冬穎，于軒，李文華，王一凡

朝陽(yáng)市第二醫(yī)院1血液內(nèi)科，2檢驗(yàn)科，遼寧朝陽(yáng)1220000

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma，DLBCL）是非霍奇金淋巴瘤的常見類型，臨床主要表現(xiàn)為侵襲性和中高度惡性，病情發(fā)展迅速，嚴(yán)重威脅患者健康[1]。DLBCL主要發(fā)生于淋巴結(jié)內(nèi)，部分病灶發(fā)生于淋巴結(jié)外，結(jié)外病灶常見于胃腸道、骨和中樞神經(jīng)系統(tǒng)[2]。DLBCL初期患者常出現(xiàn)快速生長(zhǎng)的淋巴結(jié)，同時(shí)伴有發(fā)熱、盜汗和消瘦等癥狀。目前，臨床主要采用基因和蛋白質(zhì)檢測(cè)的方法進(jìn)行DLBCL的診斷和預(yù)后，其中腫瘤標(biāo)志物對(duì)DLBCL診斷有重要的意義[3]。FOXP1是FOXP亞家族轉(zhuǎn)錄因子成員，F(xiàn)OXP1蛋白是一種轉(zhuǎn)錄因子，與胚胎正常發(fā)育、心肌細(xì)胞發(fā)育、人類及禽類語(yǔ)言形成等有密切的關(guān)系，同時(shí)與乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌和結(jié)腸癌等相關(guān)[4]。目前，F(xiàn)OXP1與DLBCL關(guān)系的研究報(bào)道較少，本研究將DLBCL患者與健康人體內(nèi)的FOXP1水平進(jìn)行分析，探討DLBCL患者血清FOXP1的表達(dá)情況及其對(duì)DLBCL患者預(yù)后的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2014年6月至2017年6月于朝陽(yáng)市第二醫(yī)院接受治療的80例DLBCL患者（觀察組）和80例同期體檢的健康成年人（對(duì)照組）。觀察組患者的納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18歲；②經(jīng)骨穿刺等檢查確診為DLBCL；③無(wú)其他血液系統(tǒng)疾?。虎軐?duì)本研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①病歷資料不全；②不愿參與本研究；③合并其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病。對(duì)照組受試者需滿足：年齡≥18歲，對(duì)本研究知情同意，無(wú)免疫和血液系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病。觀察組80例患者中，男48例，女32例；年齡32～78歲，平均（50.36±5.27）歲；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期30例，Ⅲ～Ⅳ期50例。對(duì)照組80例受試者中，男40例，女40例；年齡35～78歲，平均（50.32±6.03）歲。兩組受試者的年齡和性別等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)朝陽(yáng)市第二醫(yī)院倫理委員會(huì)評(píng)審?fù)ㄟ^(guò)。

1.2 檢測(cè)指標(biāo)與方法

兩組受試者血清FOXP1均采用免疫組化法進(jìn)行檢測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）細(xì)胞因子水平。

1.2.1 免疫組化法 將組織標(biāo)本固定，石蠟包埋、切片，常規(guī)脫蠟10 min、2次，在95%、75%、50%的乙醇溶液中各水化5 min。3%過(guò)氧化氫溶液阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，三乙醇胺緩沖鹽水溶液（tris buffered saline，TBS）緩沖液沖洗，枸櫞酸緩沖液抗原熱修復(fù)3 min，一抗4℃過(guò)夜。取出后置于37℃恒溫箱中復(fù)溫45 min，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗5 min、3次，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）染色，蘇木精復(fù)染。FOXP1抗體（武漢博士德生物工程有限公司）按照1∶75稀釋，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.2.2 ELISA法 取受試者空腹靜脈血2 ml，乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）抗凝，離心提取血漿，-20℃冷藏箱保存，按照CRPELISA試劑盒（上海藍(lán)基生物科技有限公司）操作步驟進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；采用Logistic回歸分析法分析影響DLBCL患者FOXP1表達(dá)的因素，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組FOXP 1陽(yáng)性表達(dá)率比較

觀察組患者FOXP1陽(yáng)性表達(dá)率為72.5%（58/80），明顯高于對(duì)照組受試者的20.0%（16/80），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=46.582，P＜0.01）。

2.2 觀察組FOXP 1表達(dá)與臨床特征的關(guān)系

觀察組臨床特征中年齡≥65歲、Ⅲ+Ⅳ期、CRP≥10 U/L、淋巴瘤國(guó)際預(yù)后指數(shù)（international prognostic index，IPI）高危、有癥狀的患者FOXP1表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于年齡＜65歲、Ⅰ～Ⅱ期、CRP＜10 U/L、IPI中低危、無(wú)癥狀的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），而不同性別患者的FOXP1表達(dá)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表1）

表1 觀察組80例患者FOXP 1表達(dá)與臨床特征的關(guān)系

2.3 觀察組FOXP 1表達(dá)的影響因素分析

將單因素分析有意義的年齡、臨床分期、CRP、IPI是否高危、有無(wú)癥狀作為自變量，將DLBCL患者FOXP1陽(yáng)性表達(dá)作為因變量，進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示臨床分期Ⅲ+Ⅳ期和IPI高危為FOXP1表達(dá)的影響因素（OR=4.416、4.879，P＜0.01）。（表 2）

表2 觀察組患者FOXP 1表達(dá)的影響因素分析

3 討論

DLBCL是一類在臨床表現(xiàn)、組織形態(tài)和預(yù)后方面具有異質(zhì)性的淋巴瘤，在中老年人群中比較常見[5-6]。DLBCL發(fā)病部位可分為淋巴結(jié)內(nèi)和淋巴結(jié)外的器官組織，淋巴結(jié)內(nèi)DLBCL患者的臨床癥狀表現(xiàn)為淋巴結(jié)進(jìn)行性腫大，隨著病情加重DLBCL發(fā)生擴(kuò)散，具有侵襲性；淋巴結(jié)外DLBCL涉及的器官和組織較多，因此生物學(xué)行為和臨床癥狀比較復(fù)雜，但主要表現(xiàn)為組織器官存在迅速增大的腫塊，并伴有一定的癥狀出現(xiàn)。

目前，Ⅰ～Ⅱ期DLBCL患者采用放化療及其他綜合治療，Ⅲ～Ⅳ期主要采用化療。常用的化療藥物包括環(huán)磷酰胺、氮芥和甲基芐肼等烷化劑，綜合治療的原理和優(yōu)勢(shì)在于全身化療可以有效地控制遠(yuǎn)處器官亞臨床轉(zhuǎn)移，而放療可以有效地控制局部復(fù)發(fā)，治療后約50%的DLBCL患者可治愈[7-10]；但仍有部分患者治療效果差或治愈后易復(fù)發(fā)，因此選擇靈敏準(zhǔn)確的分子標(biāo)志物，識(shí)別預(yù)后不良的高?；颊?，對(duì)DLBCL患者的治療和預(yù)后有重要的意義。然而，目前尚無(wú)明確的預(yù)后分子標(biāo)志物[11-16]。國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道顯示，F(xiàn)OXP1在多種腫瘤組織中高表達(dá)，可以作為腫瘤預(yù)后的不良指標(biāo)[17]。FOXP1是FOXP亞家族的成員之一，其在B淋巴細(xì)胞的不同時(shí)期均有表達(dá)，但在漿細(xì)胞中不表達(dá)[18-21]。有研究表明，在細(xì)胞、組織和器官發(fā)育的不同時(shí)期FOXP1表達(dá)或沉默，可以維持或影響機(jī)體的不同生理狀態(tài)，若這個(gè)機(jī)制被破壞，機(jī)體的正常功能發(fā)生紊亂，F(xiàn)OXP1表達(dá)異常時(shí)，B淋巴細(xì)胞分化和成熟受到影響，容易產(chǎn)生B細(xì)胞淋巴瘤[22]。但是，目前有關(guān)FOXP1與DLBCL相關(guān)性以及DLBCL預(yù)后中FOXP1作用的研究報(bào)道較少。

本研究將DLBCL患者與健康受試者的血清FOXP1表達(dá)水平進(jìn)行對(duì)比分析，DLBCL患者的FOXP1陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于健康受試者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這個(gè)結(jié)果說(shuō)明FOXP1可能參與了DLBCL病情發(fā)展。已有研究表明，F(xiàn)OXP1陽(yáng)性表達(dá)率越高，腫瘤患者年齡越大、分期越晚、CRP水平越高、IPI高危概率越大[22]。本研究通過(guò)對(duì)不同臨床特征DLBCL患者的血清FOXP1表達(dá)水平比較顯示，年齡≥65歲、Ⅲ+Ⅳ期、CRP≥10 U/L、IPI高危、有癥狀的DLBCL患者FOXP1表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于年齡＜65歲、Ⅰ+Ⅱ期、CRP＜10 U/L、IPI中低危、無(wú)癥狀者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這個(gè)結(jié)果說(shuō)明可以通過(guò)檢測(cè)DLBCL患者的FOXP1表達(dá)水平制定臨床治療方案，同時(shí)FOXP1表達(dá)水平也可以作為評(píng)估患者的病情和治療效果的重要指標(biāo)。本研究分析了DLBCL患者血清FOXP1表達(dá)水平的影響因素，臨床分期Ⅲ+Ⅳ期和IPI高危的OR值分別為4.416、4.879，P＜0.01，說(shuō)明兩者均與FOXP1陽(yáng)性表達(dá)密切相關(guān)。

本研究的創(chuàng)新之處是將FOXP1作為DLBCL的分子標(biāo)志物，研究FOXP1在DLBCL患者體內(nèi)表達(dá)及臨床意義，彌補(bǔ)了以往臨床研究對(duì)DLBCL患者分子標(biāo)志物的空缺。但本研究選取人數(shù)較少且范圍較窄，會(huì)對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生一定的影響，需要在后續(xù)研究中擴(kuò)大研究對(duì)象的數(shù)量和范圍進(jìn)一步驗(yàn)證。

綜上所述，DLBCL患者血清FOXP1表達(dá)水平較高，且與臨床分期情況、IPI是否高危有關(guān)。

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