刺五加不同部位的乙醇提取物成分分析

胡勇超 符群

摘? 要：目的：對(duì)刺五加不同部位的乙醇提取物進(jìn)行成分測(cè)定分析。方法：以刺五加根、莖、葉、果為研究對(duì)象，選擇75%乙醇為提取溶劑，用超聲波輔助法提取刺五加的有效成分，采用紫外可見(jiàn)分光光度法對(duì)刺五加不同部位的有效成分含量進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)比分析。結(jié)果：刺五加不同部位乙醇提取物的有效成分存在顯著差異，其多酚含量由高到低依次為：葉>果>根>莖;黃酮含量由高到低依次為：葉>根>果>莖;多糖含量由高到低依次為：果>莖>葉>根;總皂苷含量由高到低依次為：根>莖>果>葉。刺五加不同部位醇提物的抗氧化性由高到低依次為：葉>根>果>莖。結(jié)論：從實(shí)際應(yīng)用角度分析，刺五加的根、莖、葉、果均具有一定的藥用價(jià)值，可根據(jù)其含量高低和抗氧化性有針對(duì)性的進(jìn)行開(kāi)發(fā)利用。

關(guān)鍵詞：刺五加;乙醇提取物;成分分析

中圖分類號(hào)：S567.19;R285.5;TQ464 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-8023（2018）06- 0001-06

Analysis of the Components in Ethanol Extracts from Different Parts of Acanthopanax Senticosus

HU Yongchao1， FU Qun2*

（1. McCain Foods （Harbin） Co.Ltd， Harbin 150040; 2. College of Forestry， Northeast Forestry University， Harbin 150040）

Abstract： The components of ethanol extract from Acanthopanax senticosus were analyzed. Taking Acanthopanax root， stem， leaf and fruit as research objects， 75% ethanol was used as the extraction solvent， and the effective components of Acanthopanax senticosus were extracted by ultrasonic assisted method. The contents of Acanthopanax senticosus were determined by UV spectrophotometry and the data were compared and analyzed. The effective contents of ethanol extract from Acanthopanax senticosus were significantly different， and the content of polyphenols was from high to low： leaf> fruit> root> stem; flavonoid content from high to low： leaf> root> fruit; the contents of total saponins from high to low were as follows： root> stem> fruit> leaf. The antioxidant properties of the extracts from Acanthopanax senticosus were as follows： leaf> root> fruit> stem. From the application point of view， the roots， stems， leaves and fruits of Acanthopanax senticosus have certain medicinal value， and can be developed and utilized according to their contents and antioxidant.

Keywords： Acanthopanax senticosus; ethanol extract;component analysis

刺五加（Acanthopanax senticosus （ Rupr.et Maxim.）? Harms），又名五加參，為五加科（Araliaceae）五加屬多年生落葉灌木，主要分布在俄羅斯東部邊緣地區(qū)、日本的北海道、朝鮮以及我國(guó)的東北、河北、山西等地[1-2]。刺五加的藥用價(jià)值較高，屬傳統(tǒng)中藥的一種，其具有味辛、微苦、性溫和無(wú)毒等特點(diǎn)[3]。研究表明，刺五加具有多種活性成分，不僅具有活血、抗腫瘤、抗癌、抗病毒、補(bǔ)腎、安神、有助于睡眠和益氣健脾的功效[4-6]，而且還可以治療心血管疾病、糖尿病和神經(jīng)衰弱等癥[7-8]。

近幾年來(lái)，隨著刺五加資源在食品、醫(yī)藥等行業(yè)的應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大，其需求量也日益增多，現(xiàn)全國(guó)年需求量已達(dá)到幾十萬(wàn)噸以上。但對(duì)刺五加應(yīng)用和研究相對(duì)較多的部位多集中于根和果實(shí)，對(duì)于刺五加其它部位的研究相對(duì)較少。例如，目前對(duì)于刺五加根中化學(xué)成分的研究，見(jiàn)于文獻(xiàn)報(bào)道的主要有苷類化合物和黃酮類化合物[9-10]，對(duì)刺五加果實(shí)中多糖提取的相關(guān)研究也較多[11-12]，但對(duì)于刺五加不同部位多種有效成分的含量的研究卻未見(jiàn)報(bào)道。若能將刺五加不同部位多種有效成分進(jìn)行測(cè)定分析，并有針對(duì)性的開(kāi)發(fā)利用，將在一定程度上緩解市場(chǎng)上刺五加資源需求量大，供應(yīng)緊張的問(wèn)題。

本研究通過(guò)對(duì)刺五加根、莖、葉、果中的多酚、黃酮、多糖和總皂苷的含量進(jìn)行測(cè)定分析比較，以其對(duì)北方林區(qū)刺五加資源有針對(duì)性的綜合開(kāi)發(fā)利用、保護(hù)刺五加資源以及刺五加新產(chǎn)品的研制提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

試驗(yàn)原料：同植株的刺五加果實(shí)、葉片、根、莖（樣本采集自黑龍江省蘿北縣）。

主要試劑：蘆丁、乙腈、紫丁香苷、刺五加苷E、沒(méi)食子酸、1，10-鄰二氮菲、脂溶性維生素E、水溶性維生素C、鐵氰化鉀、對(duì)氨基苯磺酸、鹽酸萘乙二胺、DPPH、鄰苯三酚和乙醇等，試劑均為分析純。

T6型號(hào)新世紀(jì)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）;FW100高速萬(wàn)能粉碎機(jī)（天津泰斯特儀器公司）;電子天平Y(jié)P200IN;DHG9240A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海索域設(shè)備有限公司）;1204型分析天平（上海卓精電子科技有限公司）;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀R-205B（上海申勝儀器公司）;TGL-16G高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）;Multi N/C 2100S總有機(jī)碳;FD-1型真空冷凍干燥機(jī)（北京博醫(yī)康試驗(yàn)儀器有限公司）;KQ-500DE臺(tái)式數(shù)控超聲波清洗器（昆侖市超聲波儀器有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品的處理

將刺五加果實(shí)、葉片、根和莖去除雜質(zhì)，洗凈，烘干至恒重，分別粉碎過(guò)60目，篩上物重新粉碎，直至全部過(guò)60目篩，分別收集全部篩下物備用。

1.2.2 對(duì)刺五加不同部位活性成分的提取

分別精密稱取刺五加果、根、莖、葉粉碎物9 g，分別以300 mL的75%乙醇浸泡，過(guò)夜，置超聲提取器中提?。═ = 30 ℃，W = 100 KHz），超聲時(shí)間20 min，在3000 r/min下離心10 min，分別取上清液和沉淀物，重復(fù)提取操作3次，合并3次的上清液，上清液進(jìn)行真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑后進(jìn)行冷凍干燥備用。

1.2.3 刺五加不同部位提取物中主要成分的含量測(cè)定

1.2.3.1 多酚含量的測(cè)定

（1）多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取對(duì)照品沒(méi)食子酸4.0 mg，用甲醇溶解于100 mL容量瓶，制成濃度為0.04 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，備用。分別取0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液置于25 mL容量瓶中。采用福林酚法測(cè)定多酚并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以對(duì)照品的質(zhì)量（m）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，由標(biāo)準(zhǔn)曲線可知，沒(méi)食子酸含量與吸光度之間的線性回歸方程為y = 8.306 3 x - 0.070 31，其相關(guān)性系數(shù)R2為0.998 37，線性關(guān)系較好。

（2）樣品多酚的測(cè)定方法

分別取刺五加根、莖、葉、果的醇提物凍干粉20 mg用甲醇定容至10 mL，即配制成2 mg/mL的刺五加提取物溶液。精密吸取刺五加根、莖、葉、果的提取物溶液0.5 mL，按照上述標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法進(jìn)行試驗(yàn)操作測(cè)定其含量，并進(jìn)行3組平行試驗(yàn)。

1.2.3.2 黃酮含量的測(cè)定

（1）黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精密量取蘆丁對(duì)照品溶液0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，將其移入25 mL容量瓶中，采用硝酸鋁顯色發(fā)法，分別以濃度（mg/ml）為橫坐標(biāo)，吸光度值（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，由所得標(biāo)準(zhǔn)曲線可知，濃度與吸光度之間的線性回歸方程為y = 9.842 2 x - 0.001 46，其相關(guān)性系數(shù)R2為0.998 69，線性關(guān)系較好。

（2）樣品黃酮的測(cè)定方法

分別取刺五加根、莖、葉、果的醇提物凍干粉20 mg加入10 mL容量瓶中，以80%乙醇定容，即配制成2 mg/mL的刺五加提取物溶液。各取1 mL刺五加根、莖、葉、果的提取物溶液進(jìn)行黃酮含量的測(cè)定，按照黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作方法進(jìn)行試驗(yàn)，并進(jìn)行3組平行試驗(yàn)。

1.2.3.3 多糖含量的測(cè)定

采用苯酚-硫酸法測(cè)定。

（1）多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確稱取105 ℃干燥后的葡萄糖103.8 mg，加蒸餾水溶解，定容至100 mL。得質(zhì)量濃度為1.038 mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精確量取0、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0和11.0 mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，置于100 mL的容量瓶，加水定容至100 mL，搖勻。采用苯酚-硫酸法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度C（mg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，由所得標(biāo)準(zhǔn)曲線可知，葡萄糖濃度與吸光度之間的線性關(guān)系為y = 13.045 x - 0.023 54，其相關(guān)性系數(shù)R2為0.998 13，線性關(guān)系較好。

（2）樣品多糖的測(cè)定方法

分別取刺五加根、莖、葉、果的醇提物凍干粉10 mg用蒸餾水定容至100 mL，即配制成0.1 mg/mL的刺五加提取物溶液。精密吸取刺五加根、莖、葉、果的提取物溶液2 mL，按照上述標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法進(jìn)行試驗(yàn)操作測(cè)定其含量，并進(jìn)行3組平行試驗(yàn)。

1.2.3.4 總皂苷含量的測(cè)定

按照趙萍的方法加以改動(dòng)進(jìn)行試驗(yàn)[13]，有研究發(fā)現(xiàn)，齊墩果酸型的皂苷在刺五加中含量較多，而且皂苷類這些主要是以齊墩果酸為配基的三萜皂苷的化合物形式存在。因此，試驗(yàn)采用齊墩果酸為對(duì)照品。

（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確稱取齊墩果酸對(duì)照品10 mg，用乙醇溶解，制得1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別移取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，用乙醇定容至0.5 mL，然后再加入0.5 mL 的8%香草醛-乙醇溶液、0.5 mL 的77%硫酸溶液，搖勻，于60 ℃恒溫水浴10 min，冷卻，于538 nm處測(cè)定吸光度，同時(shí)，以乙醇溶液作為空白對(duì)照。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度（A） 為縱坐標(biāo)，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，由所得標(biāo)準(zhǔn)曲線可知，齊墩果酸濃度（μg/mL）與吸光度之間的線性回歸方程為y = 40.56 x + 0.003，其相關(guān)性系數(shù)R2為0.999 0，線性關(guān)系較好。

（2）樣品總皂苷的測(cè)定方法

用分析天平稱經(jīng)過(guò)醇提物凍干粉50 mg加入500 mL容量瓶中用80%乙醇定容至刻度，即配制成0.1 mg/mL的樣液。量取樣品溶液2 mL，按照上述標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法進(jìn)行試驗(yàn)操作測(cè)定其含量，并進(jìn)行3組平行試驗(yàn)。

1.2.4 刺五加不同部位提取物對(duì)DPPH自由基清除能力的測(cè)定

首先用無(wú)水乙醇將DPPH配制成0.3 mmol/L的溶液。用分析天平稱經(jīng)過(guò)醇提物凍干粉50 mg加入500 mL容量瓶中用80%乙醇定容至刻度，即配制成0.1 mg/mL的樣液。用移液管從提取物溶液中分別移取體積為0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mL于10 mL容量瓶?jī)?nèi)，用80%乙醇配制成濃度分別為 0.005、0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64 mg/mL的刺五加提取物溶液，待用。將配制好的的刺五加葉總提液按ABC加入反應(yīng)溶液（取3組做平行試驗(yàn)），在整個(gè)操作過(guò)程需避光，加入反應(yīng)液后搖勻，需密封避光反應(yīng)30 min，釆用無(wú)水乙醇作為空白對(duì)照，利用紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)515 nm處測(cè)定吸光度值。以VC為參照。

DPPH清除率% =[A -（B-C）]/A×100%。

式中：A為3 mL無(wú)水乙醇+3 mLDPPH溶液;B為3 mL樣品溶液+3 mLDPPH溶液;C為3 mL樣品溶液+3 mL無(wú)水乙醇。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用Origin 7.5軟件;Microsoft Excel 2003處理數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 刺五加不同部位主要活性物質(zhì)含量的測(cè)定結(jié)果分析

2.1.1 刺五加不同部位的多酚含量分析

按照1.2.3.1的方法，分別測(cè)定刺五加根、莖、葉、果中的多酚含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

植物多酚是一類廣泛存在于植物皮、木、根、葉及果實(shí)中的多羥基酚類化合物，大量研究表明，植物多酚具有抗菌、抗氧化、抗癌和抗心血管疾病等療效，目前在食品、藥品和化妝品等行業(yè)普遍應(yīng)用[14-15]。由表1可以看出，在相同的提取條件下，刺五加不同部位中多酚含量存在顯著差異，其中刺五加葉中多酚含量最高，可達(dá)到160.2 mg，刺五加莖中多酚含量最低，僅為15.3 mg。刺五加果中多酚含量雖然僅次于刺五加葉，但是其含量?jī)H為刺五加葉的三分之一。因此，今后在對(duì)刺五加中多酚物質(zhì)進(jìn)行提取應(yīng)用時(shí)可有針對(duì)性的選用刺五加葉作為提取原料，這在一定程度上可以起到保護(hù)刺五加資源、提高提取率的作用。

2.1.2 刺五加不同部位的黃酮含量分析

按照1.2.3.2的方法，分別測(cè)定刺五加根、莖、葉、果中的黃酮含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可以看出，黃酮類物質(zhì)在刺五加的根、莖、葉、果中均有存在，但在不同部位其含量和分布存在不同，這與Hu HB的研究結(jié)果相一致[16]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在相同的提取條件下，刺五加不同部位中黃酮含量存在顯著差異。其含量由高到低依次為：葉>根>果>莖;黃酮得率由高到低依次為：葉>根>果>莖。這與劉江亭[17]、屈躍剛[18]等人的研究結(jié)果相一致，刺五加黃酮類活性物質(zhì)主要存在于刺五加葉和根系統(tǒng)中，其中刺五加葉中黃酮含量最高。由于黃酮類活性物質(zhì)具有抗氧化、抗自由基等藥理作用以及預(yù)防和治療人類的心血管疾病的功效，因此，在生產(chǎn)制造黃酮類藥物時(shí)可有針對(duì)性的選取刺五加葉和根作為提取原料。

2.1.3 刺五加不同部位的多糖含量分析

按照1.2.3.3的方法，分別測(cè)定刺五加根、莖、葉、果中的多糖含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

由表3可以看出，刺五加中多糖是刺五加眾多活性成分中含量較多、分布較廣的物質(zhì)之一，其廣泛的存在于刺五加的不同部位中。試驗(yàn)結(jié)果表明，在相同的提取條件下，刺五加不同部位中多糖含量存在顯著差異。其含量由高到低依次為：果>莖>葉>根;多糖得率由高到低依次為：果>莖>葉>根。這與Li Z F等人的研究結(jié)果一致[19]，刺五加多糖類物質(zhì)與黃酮類物質(zhì)的分布類似，在整株植株中都有分布，且在刺五加果實(shí)中含量最高，可達(dá)到刺五加莖中多糖的2倍，刺五加根中多糖的4倍之多。因此，在制備刺五加多糖類藥物制劑時(shí)，可優(yōu)先挑選刺五加果實(shí)作為多糖提取原料。

2.1.4 刺五加不同部位的總皂苷含量分析

按照1.2.3.4的方法，分別測(cè)定刺五加根、莖、葉、果中的總皂苷含量，結(jié)果見(jiàn)表4。

由表4可以看出，雖然刺五加中總皂苷類物質(zhì)是刺五加最重要的活性物質(zhì)之一，具有抗氧化、抗衰老、提高記憶力、治療高血壓、預(yù)防心腦血管疾病的功效，但刺五加中總皂苷含量與多糖類物質(zhì)和黃酮類物質(zhì)相比，相對(duì)較少，在總皂苷含量最高的刺五加根中其含量?jī)H為21.306 mg。這與郭冷秋等人的研究結(jié)果相一致[20]。試驗(yàn)結(jié)果表明，在相同的提取條件下，刺五加不同部位中總皂苷含量存在顯著差異。其含量由高到低依次為：根>莖>果>葉;多糖得率由高到低依次為：根>莖>果>葉。這與王一涵等人的研究結(jié)果相一致[21]，刺五加總皂苷含量在刺五加根和刺五加莖中相對(duì)較高，分別占干藥材重量的0.6% ～ 0.9%和0.6% ～ 1.5%。因此，在刺五加總皂苷提取以及制備相關(guān)藥物時(shí)，可優(yōu)先選擇刺五加根和莖作為原料，這在一定程度上可提高刺五加總皂苷的產(chǎn)出率。

2.1.5 刺五加不同部位的提取物抗氧化活性研究

按照1.2.4的方法，分別測(cè)定刺五加根、莖、葉、果乙醇提取物的DPPH清除率，結(jié)果如圖1 所示。

由圖1可以看出，刺五加不同部位的乙醇提取物對(duì)DPPH自由基都有一定的清除能力，而且清除能力均先隨著樣液濃度的增加而逐漸增強(qiáng)，達(dá)到一定濃度后，隨著樣液濃度的增加而趨于平緩。但不同部位提取物之間的清除能力存在顯著差異。這表明刺五加不同部位的醇提物都具有一定的抗氧化性，但抗氧化能力大小存在差異。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果可知，刺五加不同部位的醇提物抗氧化性由高到低依次為：葉>根>果>莖。這可能是因?yàn)榇涛寮尤~和根的醇提物中黃酮含量相對(duì)較高，而黃酮類物質(zhì)具有較高的抗氧化性[22]，所以表現(xiàn)為對(duì)DPPH清除效果較好，這與前文中的研究結(jié)果相一致。

3 結(jié)論

本研究采用超聲輔助乙醇提取法對(duì)刺五加不同部位的有效成分進(jìn)行提取制備，采用紫外可見(jiàn)分光光度法對(duì)刺五加不同部位有效成分中的多酚、黃酮、多糖和總皂苷含量進(jìn)行測(cè)定分析，并比較了刺五加不同部位的提取物抗氧化活性。試驗(yàn)結(jié)果表明，刺五加中多糖含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它3種物質(zhì)，而多酚和黃酮含量相近，總皂苷含量最低。刺五加不同部位乙醇提取物的有效成分間存在顯著差異，具體表現(xiàn)為：刺五加不同部位中多酚含量由高到低依次為：葉>果>根>莖;黃酮含量由高到低依次為：葉>根>果>莖;多糖含量由高到低依次為：果>莖>葉>根;總皂苷含量由高到低依次為：根>莖>果>葉。刺五加不同部位醇提物的抗氧化性由高到低依次為：葉>根>果>莖。從實(shí)際應(yīng)用角度分析，在刺五加類藥品和保健食品制備過(guò)程中，可根據(jù)不同部位不同物質(zhì)含量的高低及抗氧化性大小有針對(duì)性的選擇利用，這對(duì)提高刺五加資源的利用率具有重要的意義。

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