海蛤片對(duì)乙酸誘導(dǎo)大鼠胃潰瘍模型改善作用的研究

陳紫依， 盧 軍， 聶繼紅

(新疆醫(yī)科大學(xué)1中醫(yī)學(xué)院， 2附屬中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部， 烏魯木齊 830000)

胃潰瘍是臨床的常見病癥，西醫(yī)內(nèi)科治療其目的是緩解癥狀和改善胃黏膜炎癥和潰瘍面，治療用藥有一定的局限性。胃潰瘍病屬于中醫(yī)學(xué)的“胃脘痛”“胃痞滿”范疇，中醫(yī)治療胃潰瘍可以達(dá)到治其根源的功效，比單方面的西藥治療更行之有效，避免治標(biāo)不治本[1-2]。海蛤片為現(xiàn)代中藥復(fù)方制劑，其處方來源于新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院消化科的臨床經(jīng)驗(yàn)方，由高良姜、肉桂、香櫞、木香、海螵蛸、貝母、蓽茇、山楂、海蛤殼九味藥物組成，具有溫中健胃，止酸止痛之功效，用于肝胃不和，脾胃虛寒，胃失通降所致的胃脘疼痛，返流燒心等癥狀。本研究為探討海蛤片治療胃潰瘍的作用，采用乙酸致大鼠急性胃潰瘍模型，從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步觀察海蛤片抗胃潰瘍效應(yīng)，為其臨床治療胃潰瘍提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)環(huán)境購入SD大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量180～220 g，供應(yīng)單位：新疆維吾爾自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心[許可證號(hào)：SCXK(新)2003-0002]；飼養(yǎng)溫度：(23±2)℃、相對(duì)濕度：40%～70%、通風(fēng)情況：10～20次/h、光照條件：12 h/12 h明暗交替。

1.2藥物、試劑與主要儀器海蛤片(新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院中藥藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供，批號(hào)20170112);海蛤片低、中、高劑量組分別為生藥1.2、2.4、4.8 g/kg，實(shí)驗(yàn)前配制成0.12、0.24及0.48 g/mL溶液封存待用；安胃片(葵花藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供，批號(hào)20150716)，臨床用量：1次5～7片，3～4次/d，每片體質(zhì)量0.6 g，實(shí)驗(yàn)前配制成0.12 g/mL溶液封存待用。酶標(biāo)儀(型號(hào)：MULTISKAN；編號(hào)：S-79943)；TDZ5WS低速離心機(jī)(編號(hào)：F1702066TB)；HC-3518高速離心機(jī)(編號(hào)：04150700011)；洗板機(jī)(型號(hào)：WELLWASH；編號(hào)：S-79945)；電子天平(規(guī)格型號(hào)：SI-234；編號(hào)：S-79871)；微量加樣槍(德國Eppendorf)；低溫冰箱(美國thermo公司)；LEICA DM 3000電子顯微鏡；

1.3造模與分組參照文獻(xiàn)[3]，將SD大鼠雙日灌胃精煉豬油1次，每次0.5 mL，連續(xù)喂養(yǎng)14 d，單雙日均給予標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物飼料和白菜，自由飲水。按體質(zhì)量根據(jù)隨機(jī)數(shù)分布表分為假手術(shù)組(10只)、模型組(10只)、安胃片組(10只)和海蛤片高、中、低劑量組(各10只)。用0.1 g/mL水合氯醛0.3 mL/100 g將大鼠腹腔麻醉，麻醉后觀察角膜反射是否靈敏，無反應(yīng)后將其固定于相應(yīng)手術(shù)臺(tái)上，常規(guī)消毒、備皮，于劍突下腹正中縱切切開皮膚2 cm，用無齒鑷分離皮膚下組織，小心提起皮下肌肉組織，手術(shù)刀刀口向上切開肌肉，以防損傷腹腔內(nèi)組織，暴露胃體用無齒鑷輕拉，于胃腹側(cè)漿膜層注入50 μL、1.7 mol/L乙酸，用紗布擦拭胃體表面液體，將胃體輕送回腹腔，關(guān)腹，逐層縫合肌層及皮膚層。術(shù)后禁食不禁水16 h，觀察動(dòng)物一般狀態(tài)，術(shù)后當(dāng)日注射青霉素，連續(xù)3 d，每日1次，每次20萬單位。

1.4實(shí)驗(yàn)給藥給藥劑量參照成人用量(海蛤片3次/d，1次5片，每片體質(zhì)量0.4 g)，按體表面積計(jì)算得，造模1 w后，實(shí)驗(yàn)前配制成0.48、0.24及0.12 g/mL溶液封存待用，海蛤片高、中、低劑量組分別按上述濃度灌胃，安胃片組按1.2 g/kg 灌胃給藥，每天1次；假手術(shù)組和模型組給予1 mL/100 g生理鹽水；連續(xù)給藥14 d。大鼠第15天禁食，自由飲水。

1.5實(shí)驗(yàn)方法及樣本采集于末次給藥1 h后麻醉，結(jié)扎幽門，8 h后，用0.1 g/mL水合氯醛0.3 mL/100 g再次麻醉后，打開腹腔，小心分離腹主動(dòng)脈，用5 mL真空采血管取血，3 000 r/min離心15 min后，將血清移至2 mLEP管分裝、-80℃冷凍保存，備用。采用ELSA試驗(yàn)法測定大鼠血清胃泌素(GAS)、胃動(dòng)素(MTL)、前列腺素E2(PGE2)、過氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素-1(ET-1)。分離食管結(jié)扎，將胃體取出，胃體內(nèi)物質(zhì)收集于塑料離心管內(nèi)，記錄胃液體積，以3 500 r/min離心15 min，取上清液測pH值。重新結(jié)扎賁門，先用生理鹽水沖洗胃體上面的血，隨后用注射器注入適量的10%福爾馬林固定液，并將其浸泡于其中固定10 min之后沿著胃大彎剪開，將胃壁打開，蒸餾水洗去內(nèi)容物，用肉眼和放大鏡在日光燈下觀察胃黏膜。潰瘍等級(jí)的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：完整胃黏膜為0級(jí)；點(diǎn)狀出血直徑≥1 mm，1～5點(diǎn)為1級(jí)；6～10點(diǎn)為2級(jí)；10點(diǎn)以上為3級(jí)；條狀出血1～5條為4級(jí)；6～10條為5級(jí)；10條以上為6級(jí)。解剖并觀察胃粘膜潰瘍情況并做組織病理學(xué)檢查。

2 結(jié)果

2.1海蛤片對(duì)乙酸致大鼠胃潰瘍模型的影響與模型組比較，各給藥組均能降低胃潰瘍大鼠胃液的分泌量、升高胃液的pH值；與模型組比較，海蛤片能明顯使胃潰瘍模型大鼠血清中PGE2、SOD的水平升高(P<0.05)，使MDA、NO、ET-1的水平降低(P<0.01或P<0.05)，見表1。

2.2各組大鼠胃黏膜病理檢查結(jié)果病理結(jié)果顯示：假手術(shù)組的胃黏膜層組織細(xì)胞排列層次清楚，黏膜肌層、下層及漿膜層完整；模型組的胃黏膜有部分腺體破壞，黏膜下層血管有瘀滯，黏膜下層及漿膜層有炎性細(xì)胞浸潤；各給藥組的胃黏膜上皮缺損程度及炎性浸潤程度較模型對(duì)照組減輕，部分腺體紊亂(圖1)。

表1 海蛤片對(duì)乙酸致大鼠胃潰瘍模型的影響

注：與模型組比較：aP<0.05，bP<0.01； 與海蛤片高劑量組比較，cP<0.05。

假手術(shù)組模型組

安胃片組

海蛤片低劑量組

海蛤片中劑量組

海蛤片中劑量

海蛤片高劑量組

圖1各組大鼠胃黏膜病理檢查結(jié)果(HE,×100)

3 討論

胃潰瘍是常見的消化道疾病，具有上腹脹滿或疼痛，食欲減退、暖氣、泛酸、燒心等癥狀?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)本病的病因及發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明，一般認(rèn)為潰瘍發(fā)生是黏膜侵襲因素和防御因素失衡的結(jié)果。胃黏膜損傷因子包括胃酸和胃蛋白酶、幽門螺旋桿菌等；胃黏膜的自身防御機(jī)制由胃黏液、胃黏膜血流量、PGE2，等因素構(gòu)成。其在中醫(yī)上屬于 “胃痛”“痞滿”“嘈雜”“泛酸”等疾病范疇，其發(fā)病多與外感邪氣、內(nèi)傷飲食情志、先天享賦不足有關(guān)。而且本病易反復(fù)，需長期服藥，西藥長期服用副作用較大，患者往往不能堅(jiān)持。因此胃潰瘍的治療有寄于中醫(yī)藥或者中西醫(yī)結(jié)合方法。中醫(yī)在調(diào)整機(jī)體的功能(如神經(jīng)系統(tǒng)功能、消化道運(yùn)動(dòng)和分泌功能、免疫功能等)、增強(qiáng)胃黏膜防御能力等方面有著巨大的優(yōu)勢，且毒副作用小。臨床多以疏肝和胃、溫中健脾、養(yǎng)血益胃、活血化瘀、調(diào)理寒熱等治則為主，古今許多中醫(yī)學(xué)者擬定出許多相對(duì)固定的方劑、成藥，獲得了良好的效果。

海蛤片方中高良姜、肉桂大辛大熱，溫中散寒。香櫞性溫，理氣寬中，消脹降痰[4-5]；木香味辛苦性溫，行氣止痛，芳香化濕，調(diào)中導(dǎo)滯；海螵蛸咸澀，有制酸止痛、生肌斂瘡之功[6]；貝母善開郁積，止疼痛，消脹滿，清肝火，制酸，協(xié)同海螵蛸、海蛤殼增強(qiáng)本方制酸、止痛之效；蓽茇溫胃散寒，和中止痛；山楂健胃消食，調(diào)理脾胃。諸藥配伍，一方面具有溫中散寒治的功效，另一方面則可以制酸止痛、行氣和胃，溫中有通，標(biāo)本兼治，共奏溫中健胃，行氣和中，止酸之功效[7]。對(duì)于乙酸型胃潰瘍模型大鼠具有良好的溫中健胃，止酸止痛、消癰生肌的功效。

前列腺PGE2是胃黏膜的重要防御因子之一，也是一種重要的細(xì)胞生長和調(diào)節(jié)因子，它有抑制胃酸分泌、增加胃黏膜血流量、促進(jìn)胃黏膜上皮再生以及增強(qiáng)胃黏膜防御攻擊因子的作用[8-10]。本研究結(jié)果表明，乙酸致大鼠胃潰瘍模型中PGE2水平與假手術(shù)組比較血清中含量明顯降低，海蛤片各給藥組中PGE2血清含量較模型對(duì)照組升高，說明海蛤片可通過促進(jìn)胃黏膜細(xì)胞再生、胃黏膜修復(fù)，保護(hù)胃黏膜的完整性，從而增強(qiáng)胃黏膜的防御功能。

體內(nèi)氧自由基增多可引起組織細(xì)胞的損害。胃潰瘍形成過程中，胃黏膜在各種攻擊因子刺激，局部黏膜缺血下，可產(chǎn)生大量的氧自由基。氧自由基和膜內(nèi)的多種不飽和脂肪酸結(jié)合形成MDA等脂質(zhì)質(zhì)過氧化物。超氧化物歧化酶(SOD)是體內(nèi)一種重要的抗氧化酶，它存在于身體的各個(gè)部位，是生物體內(nèi)氧自由基清除系統(tǒng)的首要防線，具有抗氧化及保護(hù)胃黏膜細(xì)胞氧化、減輕對(duì)黏膜的損害的作用，還具有保護(hù)細(xì)胞DNA、蛋白質(zhì)與細(xì)胞膜的功能[11-17]。本研究通過檢測外周血SOD及MDA的水平變化，觀察海蛤片在提高機(jī)體抗脂質(zhì)過氧化物歧化酶方面的能力。

胃黏膜血流量GMBF減少是胃潰瘍形成的易感因子，而ET-1是GMBF重要的影響因子，它具有強(qiáng)烈的血管收縮功能；隨著血清ET-1的不斷升高，胃黏膜血流量減少，引起機(jī)體局部缺氧和酸中毒，導(dǎo)致機(jī)體氧自由基水平升高，從而對(duì)胃黏膜造成一定的損傷。NO是內(nèi)源性舒張血管因子，它可通過抑制血清ET-1的生成而促進(jìn)胃黏膜擴(kuò)張，調(diào)節(jié)胃黏膜局部血供及胃酸分泌，從而起到保護(hù)胃黏膜的作用。胃泌素是由胃竇G cell合成分泌的，它參加胃黏膜產(chǎn)生與愈合的全過程。本研究結(jié)果表明胃潰瘍患者血清中胃泌素含量明顯高于健康者，胃泌素在受某些刺激攻擊時(shí)，可刺激胃壁細(xì)胞釋放胃酸，從而使胃酸分泌失衡、產(chǎn)生或加重胃潰瘍的形成[18-22]。本研究結(jié)果表明模型組和給藥組GAS的水平明顯高于假手術(shù)組，各給藥組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示海蛤片不能通過影響GAS水平來促進(jìn)胃黏膜的恢復(fù)與愈合。

綜上所述，本研究證實(shí)了海蛤片對(duì)乙酸誘導(dǎo)大鼠胃潰瘍模型具有確切的保護(hù)作用，海蛤片抗?jié)兊淖饔每赡苁峭ㄟ^升高PGE2含量以增強(qiáng)胃黏膜的防御功能，升高SOD、降低MDA水平以提高機(jī)體抗脂質(zhì)過氧化物歧化酶的能力，降低ET-1、NO的水平以調(diào)節(jié)胃黏膜局部血供及胃酸分泌，從而起到保護(hù)胃黏膜的作用。

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