組蛋白去甲基化酶KDM3A在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達及臨床意義

姚 娟， 鄭樹濤， 馬 華， 李欣欣， 劉文亞

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院1影像中心， 2臨床醫(yī)學(xué)研究院， 烏魯木齊 830054)

美國腫瘤協(xié)會于2017年1月發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，乳腺癌是女性惡性腫瘤中發(fā)病率最高的疾病[1]。KDM3A會阻斷雌激素受體信號通路，對乳腺癌細胞的增殖很重要[2]。本實驗從組織水平檢測組蛋白去甲基化酶KDM3A在乳腺癌中的表達及其與臨床資料的相關(guān)性，并且和評價乳腺癌預(yù)后轉(zhuǎn)移的指標(biāo)雌激素受體ER、孕激素受體PR、人類表皮生長因子HER2做相關(guān)性分析，以期為乳腺癌的生物學(xué)評價重新尋找一種新的指標(biāo)。

1 對象與方法

1.1研究對像上海芯超公司組織芯片，為150例經(jīng)手術(shù)切除并經(jīng)病理證實的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌。全部為女性患者，平均年齡49歲，中位年齡56歲，隨訪時間9～12.5 a。

1.2免疫組化結(jié)果判讀乳腺癌細胞的胞漿中出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒則提示KDM3A蛋白表達為陽性。KDM3A免疫組化結(jié)果采用半定量雙評分法評價。每片隨機選取10個高視野。每個字段被計數(shù)為200細胞。陽性細胞記錄為< 10%為0分；10%～50%為1分；51%～75%為2分；>75%為3分；細胞著色強度記為：不著色為0分；淺黃色為1分；黃色為2分；棕褐色為3分．每個腫瘤樣本的染色強度與百分比得分相乘后得出最終得分，腫瘤最后確定為(-)0分；(+)≤4分；(++)5～8分；(+++)≥9分。陰性弱陽性和中等陽性為低表達組，強陽性為高表達組。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件對所有數(shù)據(jù)進行分析，運用χ2檢驗KDM3A與浸潤性乳腺癌患者臨床病理參數(shù)，Spearman等級相關(guān)分析檢測KDM3A與雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、人類表皮生長因子(HER2)的相關(guān)性，Kaplan-meier法繪制生存曲線，對生存率采用Log-rank進行單因素分析、Cox回歸模型多因素分析。

2 結(jié)果

2.1KDM3A蛋白與ER、PR及HER2的相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)對KDM3A和ER、PR、HER2進行分析，結(jié)果顯示KDM3A和ER、PR、HER2差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.2Log-rank生存分析本組150例患者中，截止至隨訪時間結(jié)束，5年總體存活率為84%(126/150)。各指標(biāo)生存率見表1。Log-rank分析結(jié)果顯示：浸潤性乳腺癌患者預(yù)后與患者的年齡、病理分級、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及KDM3A無關(guān)，而與臨床分期、ER蛋白、PR蛋白表達有關(guān)(P<0.05)。

2.3Cox回歸多因素生存分析將年齡、腫瘤直徑、組織分級、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、臨床分期、KDM3A表達、ER、PR以及HER2引入Cox模型進行多因素分析,結(jié)果顯示臨床分期、PR、KDM3A是乳腺癌患者預(yù)后因素(P<0.05),見表2。

表1 浸潤性乳腺癌患者生存狀態(tài)單因素分析結(jié)果

表2 浸潤性乳腺癌患者COX回歸多因素生存分析

3 討論

乳腺癌是女性發(fā)病率及致死率最高的惡性腫瘤，但是至今乳腺癌的發(fā)病機制仍沒有達到一個共識，以往對乳腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸的研究主要集中在基因突變、基因缺失、重組及重排等遺傳學(xué)機制上面，但很多學(xué)者在研究表觀遺傳學(xué)的過程中，發(fā)現(xiàn)人類部分基因與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸與浸潤有著十分重要的聯(lián)系。

Yamane等[3]報道KDM3A參與H3K9的甲基化和轉(zhuǎn)錄，激活雄激素。KDM3A在精子發(fā)生發(fā)展過程中及缺氧狀態(tài)下的起到重要作用[4-6]。KDM3A參與了肺癌發(fā)生，是腫瘤異種移植生長所必需的并且可以誘導(dǎo)神經(jīng)母細胞瘤[7-10]、肝癌及乳腺癌遷移和侵襲[11-12]。本研究的目的是為了評估KDM3A在乳腺癌中的表達及與相關(guān)臨床資料的相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示KDM3A表達與臨床分期、腫瘤大小、HER2、ER、PR表達這些指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。Yamada等[11]研究認為KDM3A與肝細胞癌的表達及臨床病理特征等多因素Cox回歸分析無相關(guān)性，同時發(fā)現(xiàn)KDM3A是肝癌復(fù)發(fā)的獨立預(yù)測指標(biāo)。然而，在胃癌中KDM3A表達升高已被發(fā)現(xiàn)與預(yù)后相關(guān)，同時有研究證明KDM3A與腎細胞癌的進展相關(guān)[12]。Zhao等[13]在研究中也發(fā)現(xiàn)在前列腺癌組織中KDM3AmRNA的表達較良性前列腺增生明顯增加，上述這些研究表明KDM3A在不同的腫瘤中的表達可能不同。

Wang等[14]研究表明，KDM3A的表達與預(yù)后較差的乳腺癌患者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，本次研究結(jié)果中單因素分析KDM3A與乳腺癌的預(yù)后差異無統(tǒng)計學(xué)意義。目前KDM3A的研究基本偏重于基礎(chǔ)研究，臨床研究相對較少，本研究為臨床研究，但是缺乏對比。雖然在單因素分析中，KDM3A在乳腺癌預(yù)后與PR、EP相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但在本次研究多因素回歸分析結(jié)果顯示，臨床分期、PR、KDM3A差異有統(tǒng)計學(xué)意義，說明這3種指標(biāo)可以作為乳腺癌患者綜合預(yù)后因素。后續(xù)需要對此研究結(jié)果進行細胞水平研究。

本實驗中得出在150例浸潤性乳腺癌患者中，KDM3A和ER、PR、HER2相關(guān)系數(shù)檢驗均>0.05，說明KDM3A和我們在臨床中常用的指標(biāo)關(guān)系不大。但是在多因素回歸分析中，美國癌癥聯(lián)合會第6版臨床分期、PR、KDM3A的P值均<0.05，說明這幾個指標(biāo)可以作為生存分析綜合指標(biāo)。由此推測在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中，KDM3A可以作為乳腺癌的預(yù)后指標(biāo)，但是相互之間的分子機制還不清楚。

分析本研究與文獻[2,15]不一致的原因可能為：(1)組織芯片有一定局限性，本實驗選擇組織芯片，其芯片本身也可能導(dǎo)致最終結(jié)果的偏差；(2)制備組織芯片的組織的保存時間和免疫組化評分標(biāo)準(zhǔn)的選擇也是不可忽略的因素；(3)沒有研究KDM3A體外細胞功能，無法評估其對乳腺癌細胞生物學(xué)作用介導(dǎo)的細胞增殖、侵襲和遷移的能力。

總之，目前乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展機制仍然不清，推測KDM3A有可能作為乳腺癌的監(jiān)測基因，其表達水平可以提示乳腺癌的預(yù)后程度，有助于臨床治療及判斷患者預(yù)后情況。

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