IL-1β表達與食管鱗狀細胞癌患者臨床病理參數(shù)關(guān)系的分析

周 劍， 馮 晨， 鄭樹濤， 劉 清， 劉 濤， 譚豆豆， 馬 蓉， 陳玉梅， 盧曉梅

(新疆醫(yī)科大學(xué)1附屬腫瘤醫(yī)院， 2臨床醫(yī)學(xué)研究院， 烏魯木齊 830011; 2烏魯木齊市友誼醫(yī)院病理科， 烏魯木齊 830000)

腫瘤微環(huán)境中釋放的炎性細胞因子與食管癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，炎性細胞因子的數(shù)量增加，促進腫瘤細胞浸潤及腫瘤血管形成，從而促進腫瘤進展[1-2]。白細胞介素1-β(IL-1β)是一種重要的炎性細胞因子，IL-1β在促炎細胞因子的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中起著至關(guān)重要的作用[3-4]。此外，多種腫瘤中均發(fā)現(xiàn)IL-1β表達增加，IL-1β表達的增加與腫瘤細胞的進展與轉(zhuǎn)移有關(guān)[5-6]。盡管IL-1β在多種惡性腫瘤中扮演著重要作用，但IL-1β與食管鱗狀細胞癌的預(yù)后及臨床病理參數(shù)的相關(guān)性仍不清楚，本研究通過免疫組織化學(xué)染色探討IL-1β與食管鱗狀細胞癌(ESCC)患者預(yù)后的相關(guān)性及與ESCC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期等重要臨床病理指標的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1臨床病理標本ESCC組織標本30例，癌旁組織(距病灶3 cm以外)30例作為陰性對照，組織標本均來自新疆醫(yī)科大學(xué)一附醫(yī)院2000～2008年間手術(shù)切除并通過病理檢查證實的ESCC及癌旁組織。30例ESCC組織標本中，男性20例，女性10例，年齡41～79歲，中位年齡58歲。病理分級Ⅰ級4例，Ⅱ級13例，Ⅲ級13例，根據(jù)美國癌癥聯(lián)合會(AJCC)2009年第7版TNM分期標準，T分期包括T1+T2期12例，T3+T4期18例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例20例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例10例。

1.2主要抗體和試劑兔抗IL-1β多克隆抗體(濃縮型1∶200)、PV-9000試劑盒、DAB顯色試劑盒均為北京中杉金橋生物技術(shù)公司產(chǎn)品。

1.3免疫組織化學(xué)染色和結(jié)果判定食管癌組織芯片常規(guī)脫蠟，采用0.01 mol/L的枸櫞酸鈉緩沖液微波加熱修復(fù)抗原。免疫組化二步法操作步驟參照試劑盒說明書進行。以磷酸鹽緩沖液取代一抗作為空白對照，用已知的陽性組織切片作為陽性對照。IL-1β表達于胞質(zhì)和胞膜，呈現(xiàn)黃褐色或棕褐色顆粒為染色陽性。在低倍鏡 (×100) 下觀察整張切片，隨機選擇4個高倍視野 (×400) 計數(shù)陽性細胞，所有切片在1個月后重復(fù)計數(shù)，取2次計數(shù)的平均值作為該樣本表達的最終結(jié)果。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 19.0 軟件對數(shù)據(jù)進行分析，食管癌組織和癌旁組織IL-1β陽性表達細胞密度的比較及IL-1β與ESCC患者臨床病理參數(shù)的比較采用χ2檢驗；單因素生存率分析用Kaplan-Meier檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1食管癌組織與癌旁組織中IL-1β浸潤密度比較食管癌組織IL-1β陽性表達細胞的中位數(shù)為32.6個/高倍視野，癌旁組織為5.3個/高倍視野，食管癌組織IL-1β陽性表達細胞密度明顯高于癌旁組織 (圖1)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

a： IL-1β在食管癌組織中的表達 b： IL-1β在癌旁組織中的表達

圖1IL-1β在ESCC及癌旁組織中的表達

2.2IL-1β陽性細胞浸潤密度與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性IHC結(jié)果表明，ESCC組織中IL-1β表達與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.018) 及T分期(P=0.011)明顯相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。ESCC組織中IL-1β表達與患者的性別(P=1.000)、年齡(P=0.470)、病理分級(P=0.117) 的相關(guān)性無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05) (表1)。

表1 30例食管鱗狀細胞癌IL-1β表達與臨床病理參數(shù)的分析/例(%)

2.3生存分析30例ESCC患者，手術(shù)時間為2007年～2010年，生存時間6～66個月，平均生存時間為26個月。從2007年～2010年，30例ESCC患者存活14例，死亡16例，5 a生存率為47%。生存分析顯示，食管癌組織中IL-1β表達低的患者5 a生存率明顯高于表達高的患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01, 圖2)。

3 討論

食管癌是我國常見的消化道惡性腫瘤之一，食管癌早期癥狀不明顯，患者就診時多已是中晚期，導(dǎo)致食管癌患者5 a生存率不足20%[7]。因此，臨床上需要有效的分子標志物，對食管癌患者預(yù)后及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等重要臨床病理指標作出更為及時和準確的評估。炎性細胞因子在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用[8-9]。IL-1β是一種重要的炎性細胞因子，由成熟的巨噬細胞及血液中的單核細胞所分泌，腫瘤微環(huán)境中IL-1β浸潤數(shù)量增加可增強腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力[10-12]。此外，在胃癌和結(jié)腸癌的研究中發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織中IL-1β表達高，患者預(yù)后差，表明IL-1β可作為胃和結(jié)腸腫瘤患者預(yù)后不良的標志物[13-15]。

本研究運用IHC技術(shù)檢測了IL-1β浸潤與ESCC患者預(yù)后的相關(guān)性及與ESCC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理指標的相關(guān)性。30例食管癌組織中IL-1β陽性細胞最多56個/高倍視野，最少15個/高倍視野，IL-1β在食管癌組織中陽性細胞中位數(shù)為32.6個/高倍視野；而30例癌旁組織中IL-1β陽性細胞數(shù)最多17個/高倍視野，最少2個/高倍視野，IL-1β在癌旁組織中陽性細胞中位數(shù)為5.3個/高倍視野，IHC結(jié)果表明，IL-1β在ESCC組織中的陽性細胞數(shù)明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。生存分析結(jié)果顯示，IL-1β表達高的患者其生存期明顯低于表達低的患者，差異也有統(tǒng)計學(xué)意義。本研究進一步探討了IL-1β表達與ESCC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T分期等臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，結(jié)果表明，ESCC組織中IL-1β表達與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及T分期明顯相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而ESCC組織中IL-1β表達與患者性別、年齡、臨床分級的相關(guān)性無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

綜上所述，IL-1β浸潤與食管癌患者預(yù)后、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及T分期相關(guān)，表明IL-1β不但在ESCC患者的預(yù)后，而且在ESCC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期中扮演著重要角色，IL-1β可作為判斷食管癌患者預(yù)后及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的潛在分子標志物。但本研究只限于免疫組化水平的檢測，IL-1β參與食管癌浸潤轉(zhuǎn)移的分子和細胞方面的機制性研究還有待于進一步證實。

參考文獻：

[1] FRANCESCONE R, HOU V, GRIVENNIKOV S I. Microbiome, inflammation, and cancer[J]. Cancer J, 2014, 20(3):181-189.

[2] LIU J, LIN P C, ZHOU B P. Inflammation fuels tumor progress and metastasis[J]. Curr Pharm Des, 2015, 21(21):3032-3040.

[3] NETEA M G, VAN DE VEERDONK F L, VAN DER MEER J W, et al. Inflammasome-independent regulation of IL-1-family cytokines[J]. Annu Rev Immunol, 2015(33):49-77.

[4] DINARELLO C A. An expanding role for interleukin-1 blockade from gout to cancer[J]. Mol Med, 2014, 20(Suppl 1):S43-58.

[5] TARASSISHIN L, LIM J, WEATHERLY D B, et al. Interleukin-1-induced changes in the glioblastoma secretome suggest its role in tumor progression[J]. J Proteomics, 2014,(99):152-168.

[6] 周劍, 賀家勇, 劉濤, 等. 食管鱗狀細胞癌組織中M2型巨噬細胞浸潤與患者預(yù)后及臨床病理參數(shù)的相關(guān)性[J]. 新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2017, 40(11):1380-1387.

[7] KATO H, NAKAJIMA M. Treatments for esophageal cancer:a review[J]. Gen Thorac Cardiovasc Surg, 2013, 61(6):330-335.

[8] ATSUMI T, SINGH R, SABHARWAL L, et al. Inflammation amplifier, a new paradigm in cancer biology[J]. Cancer Res, 2014, 74(1):8-14.

[9] CANDIDO J, HAGEMANN T. Cancer-related inflammation[J]. J Clin Immunol, 2013, 33 (Suppl 1):S79-84.

[10] QUAIL D F, JOYCE J A. Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis[J]. Nat Med, 2013, 19(11):1423-1437.

[11] LANDSKRON G, DE LA FUENTE M, THUWAJIT P, et al. Chronic inflammation and cytokines in the tumor microenvironment[J]. J Immunol Res, 2014(2014):149185.

[12] FATHIMA-HURMATH K, RAMASWAMY P, NANDAKUMAR D N. IL-1beta microenvironment promotes proliferation, migration, and invasion of human glioma cells[J]. Cell Biol Int, 2014, 38(12):1415-1422.

[13] LI S, WANG W, ZHANG N, et al. IL-1beta mediates MCP-1 induction by Wnt5a in gastric cancer cells[J]. BMC Cancer, 2014(14):480-485.

[14] VORONOV E, APTE R N. IL-1 in Colon inflammation, colon carcinogenesis and invasiveness of colon cancer[J]. Cancer Microenviron, 2015, 8(3):187-200.

[15] LI Y, WANG L, PAPPAN L, et al. IL-1beta promotes stemness and invasiveness of colon cancer cells through Zeb1 activation[J]. Mol Cancer, 2012(11):87-92.