奶牛大腸桿菌性乳腺炎耐藥性試驗(yàn)

郭海濤,牟瑞營(yíng),王 哲

(1.吉林大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院,吉林 長(zhǎng)春 130062;2.山東省臨朐縣畜牧局,山東 臨朐 262600)

奶牛乳腺炎在全世界均為高發(fā)疾病,患病奶牛的乳產(chǎn)量和乳品質(zhì)會(huì)嚴(yán)重下降,嚴(yán)重者可導(dǎo)致敗血癥的發(fā)生,不僅給奶牛養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失,還會(huì)危害人類的健康。引起奶牛發(fā)生乳腺炎的病因復(fù)雜,病原菌感染是導(dǎo)致該病發(fā)生的最主要原因,其中大腸桿菌是導(dǎo)致奶牛乳腺炎發(fā)生重要常見(jiàn)的病原菌之一。目前,對(duì)于奶牛乳腺炎的防治還是以抗生素為主,不合理的使用抗生素會(huì)導(dǎo)致耐藥菌株的出現(xiàn),以及藥物殘留等副作用,使該病的防治更加困難,也是近年來(lái)臨床上奶牛乳腺炎的發(fā)病率居高不下的主要原因。筆者所在山東省臨朐縣是奶牛養(yǎng)殖大縣,奶牛乳腺炎的防病率近年來(lái)均無(wú)下降趨勢(shì),本試驗(yàn)主要的目的為分離培養(yǎng)臨朐縣奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)患有臨床型乳腺炎奶牛乳內(nèi)的大腸桿菌,并且對(duì)其耐藥性進(jìn)行檢測(cè),旨在為奶牛乳腺炎防治藥物選擇上提供參考。

1 試驗(yàn)與材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 選自山東濰坊臨朐縣5個(gè)規(guī)模化奶牛場(chǎng)。

1.2 試劑 藥敏試紙、水解酪蛋白瓊脂(杭州微生物試劑有限公司);細(xì)菌微量生化鑒定管、營(yíng)養(yǎng)肉湯、血瓊脂培養(yǎng)基、伊紅—美藍(lán)培養(yǎng)基、高鹽甘露醇、麥康凱瓊脂、綿羊鮮血瓊脂、血清瓊脂(青島海博生物技術(shù)有限公司)。

1.3 臨床型乳腺炎診斷方法 檢查局部是否有紅腫熱痛特征,乳汁的顏色是否異常,是否有硬塊、凝塊、絮狀物,甚至化膿或出現(xiàn)水樣乳汁。

1.4 采樣方法 提前將滅菌的離心管準(zhǔn)備好,標(biāo)注日期、奶牛區(qū)號(hào)、奶牛耳標(biāo)號(hào)。用溫水清洗奶牛乳房后,用干凈的紙巾擦干,再用消過(guò)毒的毛巾進(jìn)行擦拭,用鑷子夾取酒精棉球按螺旋方式由乳頭開(kāi)始擦拭乳房周圍,在棄去前3次奶后,將患牛奶樣擠入備好的離心管中,封好,冷凍保存。

1.5 主要致病菌分離鑒定 將患牛奶樣放置室溫,自然融化后,振蕩混勻。用200 μL移液槍吸取奶樣滴在含有培養(yǎng)基的平皿上,用接種環(huán)均勻涂抹在各個(gè)培養(yǎng)基上,隨后將涂好的培養(yǎng)基放置到37℃恒溫箱中溫育24～48 h,觀察并記錄細(xì)菌生長(zhǎng)形態(tài)、大小等。

1.5.1 金黃色葡萄球菌的分離鑒定 在高鹽甘露醇瓊脂中呈現(xiàn)黃色或紅色小菌落,在血瓊脂平皿中形成光滑、隆起、顏色金黃色、中等大小面積的菌落,有溶血現(xiàn)象。鏡檢呈典型的葡萄球狀,可在肉湯中生長(zhǎng),并能分解甘露醇,凝固酶實(shí)驗(yàn)呈陽(yáng)性[1]。

1.5.2 大腸桿菌的分離鑒定 可在普通平皿、伊紅—美藍(lán)平皿、鮮血平皿上生長(zhǎng),形成較大的菌落。肉湯培養(yǎng)中,下層會(huì)出現(xiàn)明顯的沉淀,上層出現(xiàn)菌環(huán),肉湯變渾濁。為革蘭陰性菌,鏡檢細(xì)菌形態(tài)呈現(xiàn)短桿狀[2]。

1.5.3 鏈球菌的分離鑒定 鮮血平皿生長(zhǎng)出半透明、圓形隆起、露滴狀菌落,呈α、β或γ溶血,鏡檢為短鏈、長(zhǎng)鏈狀排列。肉湯培養(yǎng)中,形成渾濁的菌液[3]。

1.5.4 棒狀桿菌的分離培養(yǎng)與鑒定 伊紅—美藍(lán)培養(yǎng)基上形成體積較小的菌落,普通瓊脂上生長(zhǎng)不良,染色為革蘭氏陽(yáng)性菌,鏡檢細(xì)菌形態(tài)呈現(xiàn)棍棒狀態(tài)[4]。

1.5.5 沙門菌的分離培養(yǎng)與鑒定 麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上呈現(xiàn)邊緣整齊、半透明狀、扁平的菌落。染色鏡檢為革蘭陰性菌。

1.6 藥敏試驗(yàn) 利用K-B紙片瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行檢測(cè)。最后用游標(biāo)卡尺測(cè)量,記錄抑菌圈直徑,具體判定標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。

表1 藥敏試驗(yàn)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

2 結(jié)果

2.1 主要致病菌分離鑒定結(jié)果 經(jīng)過(guò)對(duì)患牛乳樣進(jìn)行分離鑒定,本縣牛場(chǎng)大腸桿菌是奶牛乳腺炎的主要病原菌,占所有感染菌的52.6%,其次是鏈球菌,占23.1%。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 病原菌檢出率

2.2 藥敏試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果 對(duì)本縣牛場(chǎng)乳腺炎的主要致病菌大腸桿菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)表3,頭孢噻呋對(duì)大腸桿菌高度敏感,其余多數(shù)藥物均有抑菌作用。

表3 藥敏試驗(yàn)判定結(jié)果

3 討論

3.1 乳腺炎是母畜乳腺的炎癥,多發(fā)生在乳用家畜,特別是奶牛乳腺炎更為常見(jiàn),其特點(diǎn)是乳中體細(xì)胞特別是白細(xì)胞增多,以及乳腺組織發(fā)生病理變化。本病不僅影響產(chǎn)奶量,造成重大的經(jīng)濟(jì)損失,而且影響鮮乳的品質(zhì),危害人類的健康。導(dǎo)致乳腺炎的病因有很多種,包括乳房受到摩擦、擠壓、碰撞等機(jī)械因素;體內(nèi)某些臟器疾病產(chǎn)生的內(nèi)毒素,飼料、飲水或藥物中的毒素也可能導(dǎo)致乳腺炎的發(fā)生;此外也與遺傳因素有關(guān),但是引起奶牛乳腺炎發(fā)生的最常見(jiàn)的因素為病原微生物感染。病原微生物種類繁多,有細(xì)菌、真菌、霉形體等,其中大腸桿菌是一種導(dǎo)致該病發(fā)生的常見(jiàn)病原菌。

3.2 本試驗(yàn)中在臨朐縣5個(gè)不同的牛場(chǎng)采集了60份臨床型乳腺炎的樣本,對(duì)其致病菌進(jìn)行分離培養(yǎng)鑒定,結(jié)果導(dǎo)致奶牛乳腺炎的主要致病菌為大腸桿菌和鏈球菌,通過(guò)藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,分離培養(yǎng)的大腸桿菌對(duì)多種抗生素均具有不同程度的耐藥性,對(duì)頭孢噻呋敏感,提示該地區(qū)奶牛乳腺炎可以考慮應(yīng)用頭孢噻呋治療。

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