血清免疫球蛋白等因素對(duì)分離膠采血管血液分離效果的影響

張靖宇， 范 洪， 路炳通， 胡海濤

（河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院實(shí)驗(yàn)診斷科，河北 滄州 061001）

分離膠采血管由于具有分離血清較快，在血細(xì)胞和血清之間形成隔離層，能有效阻止血細(xì)胞和血清之間的物質(zhì)交換，同時(shí)可提高工作效率以及能分離出較多血清的特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于臨床。有關(guān)分離膠采血管對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果影響的報(bào)道較多[1-4]，但分離膠采血管對(duì)特殊血液分離效果的報(bào)道卻較少見(jiàn)。本研究通過(guò)觀察多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）患者血液樣本在分離膠采血管中的分離效果，探討免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）等因素對(duì)分離膠采血管血液分離效果的影響及相應(yīng)的處理辦法。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取河北省滄州市3家醫(yī)院（河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院、滄州市中心醫(yī)院、滄州市人民醫(yī)院）2012年6月—2016年12月收治的MM患者、自身免疫性疾病患者以及貧血患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有MM病例的診斷均符合《中國(guó)多發(fā)性骨髓瘤診治指南（2015年修訂）》[5]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）所有MM病例均未經(jīng)過(guò)任何藥物治療；（3）自身免疫性疾病患者總蛋白（total protein，TP）＞80 g/L；（4）貧血患者排除單克隆免疫球蛋白病且血細(xì)胞比容（hematocrit，HCT）＜40%；（5）所有患者均知情同意并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）從透析管中采集的血液；（2）近期應(yīng)用過(guò)造影劑的患者。

根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)選取MM患者221例（IgG型149例、IgA型65例、IgM型7例），分別采用免疫透射比濁法、雙縮脲法和血細(xì)胞分析儀檢測(cè)Ig、TP和HCT水平（采用肝素鋰抗凝）。根據(jù)Ig水平分組，將IgG型患者分為IgG≤47 g/ L組（A組，84例）和IgG＞47 g/L組（B組，65例），將IgA型患者分為IgA≤38 g/L 組（C組，39例）和IgA＞38 g/L組（D組，26例），所有IgM型患者IgM≤63 g/L，為IgM≤63 g/L組（E組，7例）；根據(jù)TP水平將50例自身免疫性疾病患者分為TP≤90 g/L組（F組，27例）和TP＞90 g/L組（G組，23例）；根據(jù)HCT水平將55例貧血患者分為HCT≤30%組（H組，26例）和HCT＞30%組（I組，29例）。各組年齡及性別構(gòu)成比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組其他資料比較見(jiàn)表1。其中B、D和E組的Ig水平明顯高于A、C、F、G、H、I組（P＜0.05），B、D和G組TP水平明顯高于A、C、E、F、H、I組（P＜0.05），B、D和H組HCT水平明顯低于A、C、E、F、G、I組（P＜0.05）。

表1 各組間Ig、TP、HCT水平的比較 （±s）

表1 各組間Ig、TP、HCT水平的比較 （±s）

注：與A組比較，*P＜0.05；與C組比較，#P＜0.05；與E組比較，△P＜0.05；與F組比較，▲P＜0.05；與G組比較，●P＜0.05；與H組比較，◆P＜0.05；與I組比較，★P＜0.05

組別 例數(shù) Ig（g/L） TP（g/L） HCT（%）A組 84 34.4±8.2 86.6±5.8 32.7±3.8 B組 65 63.4±8.1*#▲●◆★ 106.1±7.1*#△▲◆★ 22.3±3.4*#△▲●★C組 39 31.5±5.1 83.5±4.9 31.5±4.0 D組 26 56.9±10.5*#▲●◆★ 105.9±7.6*#△▲◆★ 23.4±5.1*#△▲●★E組 7 48.5±6.8*#▲●◆★ 87.8±7.0 33.2±3.6 F組 27 33.4±7.4 83.1±4.3 35.1±3.5 G組 23 38.7±4.9 99.5±3.7*#△▲◆★ 33.7±3.2 H組 26 24.8±4.3 77.4±4.9 23.9±3.8*#△▲●★I組 29 23.9±3.2 78.2±5.5 34.9±5.7

1.2 試劑和儀器

2種不同廠家的分離膠采血管（規(guī)格5 mL，100 mm×13 mm，上海碧迪醫(yī)療器械有限公司和河北滄州永康醫(yī)藥用品有限公司），肝素鋰抗凝管（規(guī)格5 mL，100 mm×13 mm，河北滄州永康醫(yī)藥用品有限公司），樣本前處理系統(tǒng)（日本Hitachi公司），7600-210全自動(dòng)生化分析儀（日本Hitachi公司），XE-5000全自動(dòng)血液分析儀及原裝配套試劑（日本Sysmex公司），Ig、TP試劑盒（北京森美?？爽斏锟萍加邢薰荆?。

1.3 樣本采集及處理

采集研究對(duì)象空腹靜脈血分別注入2種分離膠采血管以及肝素鋰抗凝管（3 mL/管）中，180度上下顛倒混勻5～6次，待分離膠采血管完全凝固后置樣本前處理系統(tǒng)中，經(jīng)1 185×g離心10 min，觀察2種分離膠采血管血液分層、膠體分布以及血清含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)用x±s表示，不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)進(jìn)行轉(zhuǎn)換后再進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，組間比較采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)方差分。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2種分離膠采血管離心后的血液分離效果

2種分離膠采血管的血液分離效果未見(jiàn)明顯差異，均出現(xiàn)異常和正常2種不同的血液分離效果。異常血液分離效果為離心后分4層，自上而下依次為：血清、紅細(xì)胞（red blood cell，RBC）、膠體、RBC，上層血清含量極少，其下的RBC明顯增多，底層有少量RBC，見(jiàn)圖1。正常血液分離效果為離心后分3層，自上而下依次為：血清、膠體、RBC，血清含量較多，見(jiàn)圖2。

圖1 異常血液分離效果

圖2 正常血液分離效果

2.2 各組血液分離效果的比較

B和D組血液分離效果為異常，A、C、E、F、G、H、I組血液分離效果正常。

3 討論

血清分離膠是一種黏性流體，其結(jié)構(gòu)中有大量氫鍵，通過(guò)締合作用形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，這種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)在離心力的作用下可被破壞，變成黏度低的流體，但當(dāng)離心力消失后又會(huì)重新形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，這種性質(zhì)稱為觸變性。分離膠的密度界于血清和RBC之間，在離心力的作用下，由于密度的原因，分離膠位置由底部升至血清與RBC層之間，形成隔離層，這種現(xiàn)象稱為分離膠翻轉(zhuǎn)。有報(bào)道稱應(yīng)用造影劑以及從透析管中采集的血液會(huì)造成分離膠翻轉(zhuǎn)異常[6-7]。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于分離膠采血管翻轉(zhuǎn)異?，F(xiàn)象的報(bào)道多數(shù)集中在BD分離膠采血管出現(xiàn)膠體漂浮現(xiàn)象上[8-9]，而本實(shí)驗(yàn)室在日常工作中發(fā)現(xiàn)用分離膠采血管采集TP、Ig水平明顯升高，HCT、RBC明顯降低的MM患者的血液，經(jīng)最大離心力為1 185×g離心后出現(xiàn)分離膠不能有效翻轉(zhuǎn)、血液分層明顯異常、血清量極少、RBC明顯增多的現(xiàn)象，血清量無(wú)法滿足檢驗(yàn)需求。

王子娥等[10]研究了2種不同膠體成分的BD采血管，發(fā)現(xiàn)膠體成分為丙烯酸PS510的分離膠采血管在血清IgG＞50 g/L時(shí)，經(jīng)2 000×g離心10 min出現(xiàn)分離膠漂浮現(xiàn)象，出現(xiàn)了分離膠、血清、血細(xì)胞層的分布特點(diǎn)，而成分為聚酯凝膠P5A的分離膠采血管沒(méi)有出現(xiàn)分離膠漂浮現(xiàn)象，推測(cè)這種現(xiàn)象可能由分離膠成分的不同造成分離膠密度細(xì)微差別引起。FATáS等[11]在發(fā)現(xiàn)分離膠漂浮現(xiàn)象后，為了找到分離膠漂浮的原因，他們用不同密度、黏度的葡聚糖生理鹽水溶液模擬不同狀態(tài)的血液，證實(shí)血清（血漿）的密度是影響分離膠漂浮的主要原因，而非血清（血漿）黏度。FAUGHT等[12]選擇不同廠家分離膠采血管進(jìn)行葡聚糖模擬實(shí)驗(yàn)，隨著模擬物密度的增加，各廠家的分離膠采血管均出現(xiàn)分離膠漂浮現(xiàn)象，進(jìn)一步證實(shí)了任何導(dǎo)致血清（血漿）密度增加并且超過(guò)分離膠密度的因素都能引起分離膠翻轉(zhuǎn)異常。本研究選取的2種分離膠采血管的主要成分為聚酯凝膠P5A（上海碧迪醫(yī)療器療器械有限公司）和烯烴低聚物（河北滄州永康醫(yī)藥用品有限公司），是目前國(guó)內(nèi)分離膠采血管生產(chǎn)廠家應(yīng)用較多的膠體成分，雖未發(fā)現(xiàn)膠體漂浮現(xiàn)象，但本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)TP、Ig水平明顯升高，HCT、RBC明顯降低的MM患者2種分離膠采血管均出現(xiàn)膠體位置異常、肉眼紅細(xì)胞層明顯增多，但血液常規(guī)結(jié)果顯示HCT明顯降低的現(xiàn)象，說(shuō)明膠體成分不是造成這一現(xiàn)象的主要原因，同時(shí)也說(shuō)明肉眼所見(jiàn)的RBC層含有大量的血清成分，形成RBC、血清混合層。如將該混合層看成一個(gè)整體，由于血清成分較多，該層的密度有可能低于膠體密度，因此膠體不能在RBC和血清之間形成隔離層，而底層的少量RBC層由于含有血清成分少，密度比膠體大，所以出現(xiàn)在底部。本研究結(jié)果顯示，Ig、TP水平相對(duì)較低而HCT水平相對(duì)較高的A、C、F、I組和單一Ig水平明顯升高的E組以及單一TP水平明顯升高的G組和單一HCT明顯減少的H組血液分離現(xiàn)象均正常，只有Ig、TP水平明顯升高，HCT明顯降低的B組和D組出現(xiàn)異常分離現(xiàn)象，說(shuō)明Ig、TP、HCT單一因素的明顯異常不會(huì)導(dǎo)致血液分離異常，只有Ig、TP、HCT等同時(shí)出現(xiàn)異常才會(huì)造成血液異常分離，這些異常因素共同導(dǎo)致血凝塊形成受影響以及血塊回縮不良。

隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)了全自動(dòng)流水線，流水線的應(yīng)用極大地降低了檢驗(yàn)人員的工作強(qiáng)度。在方便的同時(shí)，以前可以通過(guò)肉眼觀察到的異?，F(xiàn)象卻容易被忽視，但流水線在進(jìn)行血清自動(dòng)提取的過(guò)程中也經(jīng)常出現(xiàn)提取失敗的情況，除血樣過(guò)少外，真性紅細(xì)胞增多癥、肺心病、MM等也會(huì)出現(xiàn)血清量過(guò)少的現(xiàn)象，在觀察血清量的同時(shí)也要對(duì)血液分層、膠體分布情況進(jìn)行觀察，無(wú)論是膠體翻轉(zhuǎn)異常還是分層出現(xiàn)問(wèn)題，均要考慮該樣本可能存在Ig、TP、HCT異常的情況，同樣也要考慮MM存在的可能性。

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