半乳糖凝集素-1在膀胱癌中的表達及臨床意義

吳銀霞，周廣臣，牛 荃，石 群，許士高，俞俊杰

(江蘇省蘇北人民醫(yī)院：1.腫瘤科；2.泌尿外科，江蘇揚州 225001)

半乳糖凝集素(Galectins)即β-半乳糖苷結(jié)合蛋白，參與多種生理和病理過程，包括細胞生長和凋亡、細胞粘附及新生血管形成和腫瘤浸潤與轉(zhuǎn)移等[1]。Galectin-1是Galectins家族的重要成員之一，廣泛表達于乳腺癌、膀胱癌、肝癌等多種腫瘤組織中。我們選取90例膀胱癌組織及20例癌旁組織標本進行研究，采用免疫組化檢測膀胱癌組織及癌旁組織中Galectin-1的表達水平，并對Galectin-1的表達水平與膀胱癌臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系進行探討，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1臨床資料收集2005年12月至2015年12月在江蘇省蘇北人民醫(yī)院泌尿外科就診的90例膀胱癌患者及20例癌旁病理標本。所有患者經(jīng)過膀胱電切或膀胱根治性切除手術(shù)，且手術(shù)前未行放、化療等輔助治療?；颊叩呐R床資料包括患者性別、年齡、生存時間和腫瘤的大小、分級、分期情況等，隨診時間36～60個月，前2 年每3 個月隨訪1 次，之后每6 個月1 次。 總生存期(overall survival，OS)為從手術(shù)之日至死亡或最后一次隨訪時間。

1.2檢測方法

1.2.1免疫組化染色 采用免疫組織化學(xué)檢測膀胱癌及癌旁膀胱樣本中Galectin-1蛋白表達，兔抗人Galectin-1單克隆抗體購自美國CST公司；SP免疫組織化學(xué)試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(diamino benzidine,DAB)顯色試劑盒均購自碧云天公司。具體操作步驟如下：常規(guī)4 μm 連續(xù)石蠟切片常規(guī)經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化；置于3%過氧化氫甲醇中處理5 min，抑制內(nèi)源性過氧化酶；經(jīng)磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffer saline,PBS)洗后，滴加1∶200 Galectin-1抗體作為一抗，4 ℃冰箱濕盒孵育過夜；經(jīng)PBS洗滌后，滴加生物素化抗兔SP 試劑盒的二抗復(fù)合物，室溫濕盒孵育30 min；經(jīng)PBS洗滌后，切片滴加DAB 液顯色；蒸餾水洗后，蘇木素復(fù)染、中性樹膠封固，置于顯微鏡下觀察。以0.01 mol/L PBS液替代一抗作為陰性對照，每例均有HE 切片作對照觀察。

1.2.2結(jié)果判斷 兩名病理科醫(yī)生采用盲法閱片的方式進行結(jié)果判斷。觀察10個具有代表性的顯微鏡視野并確定陽性染色細胞的數(shù)量和所占的比例。染色強度評分：無陽性反應(yīng)細胞為0分，染色強度淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細胞百分比評價染色面積：<0%～5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，75%～100%為4分。兩項評分相乘為最后結(jié)果。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析，利用卡方檢驗分析Galectin-1蛋白表達與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1Galectin-1在膀胱癌及癌旁組織的表達情況免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測膀胱癌組織及癌旁組織樣本中Galectin-1表達情況，結(jié)果顯示：20例癌旁組織樣本有6例Galectin-1染色陽性，陽性表達率為30%；90例膀胱癌組織中Galectin-1陽性染色為50例，陽性表達率為55.6%，Galectin-1在膀胱癌組織的表達水平顯著高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，表1)。Galectin-1陽性染色為在細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒狀(圖1)。

表1 Galectin-1在膀胱癌組織及癌旁組織中的表達 [例(%)]

2.2Galectin-1表達與膀胱癌臨床病理的關(guān)系分析Galectin-1表達與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，Galectin-1的表達與性別、年齡、腫瘤的大小無相關(guān)性(P>0.05)。Galectin-1蛋白在低級別膀胱癌中的陽性率低于高級別膀胱癌(40.5%vs.68.8%，P<0.05); Galectin-1蛋白在病理分期T2～T4 期膀胱癌中的陽性率高于Ta～T1 期膀胱癌的陽性率(70.4%vs.33.3%，P<0.05)，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,表2)。

表2 Galectin-1的表達同膀胱癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 [例(%)]

圖1 Galectin-1在膀胱癌組織的表達情況(×40)

2.3Galectin-1表達與臨床預(yù)后的關(guān)系進一步分析Galectin-1 蛋白陽性表達與3年生存率的關(guān)系。膀胱癌組織中Galectin-1蛋白陽性表達50 例，3年生存率為36%，顯著低于Galectin-1蛋白陰性表達的67.5%(P<0.05)；Galectin-1蛋白陽性表達的3年生存中位時間為24.8個月，顯著短于Galectin-1 蛋白陰性表達的38.7個月(P<0.05)。

3 討 論

膀胱癌的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的過程，其中可能涉及許多腫瘤相關(guān)因子的參與和調(diào)控。膀胱移行細胞癌的發(fā)病率呈上升及年輕化趨勢，且肌層浸潤性尿路上皮癌具有較強的侵襲能力，患者的預(yù)后較差。如何進一步探究膀胱癌發(fā)生、發(fā)展的分子機制，尋找可靠的生物標志物和有效的分子治療靶點對提高膀胱癌患者生存率顯得尤為重要。Galectin-1是半乳糖凝集素家族成員，其分布廣泛，在細胞粘附、細胞的生長和凋亡、炎癥反應(yīng)、新血管形成以及腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移等許多生理和病理過程中發(fā)揮著重要作用。研究表明，在多種惡性腫瘤中，Galectin-1表達上調(diào)有助于致瘤性轉(zhuǎn)化，腫瘤細胞的存活、血管生成和腫瘤侵襲，并可能在腫瘤細胞免疫逃逸中發(fā)揮關(guān)鍵作用[2-3]。Galectin-1可誘導(dǎo)激活的T 細胞凋亡進而促使腫瘤免疫逃逸,也可以調(diào)節(jié)同型腫瘤細胞的粘附以及腫瘤細胞與細胞外基質(zhì)的作用[4-5]。Galectin-1通過調(diào)節(jié)腫瘤粘附到內(nèi)皮細胞,促進腫瘤的侵襲和遷移。腫瘤細胞內(nèi)的Galectin-1可促進腫瘤的增殖,并且與癌基因H-Ras 相互作用來調(diào)節(jié)腫瘤的轉(zhuǎn)化[6-7]。 Galectin-1的高表達涉及結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、膀胱癌、Kaposi 肉瘤和神經(jīng)膠質(zhì)瘤等多種腫瘤[8]。最近的研究顯表明，分期晚、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織標本中Galectin-1的表達率明顯增高[9]。在結(jié)腸癌患者血液中能檢測出Galectin-1的表達，而且晚期結(jié)腸癌患者血液中的Galectin-1水平明顯高于早期結(jié)腸癌患者[10]。由此推測，Galectin-1參與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，深入研究Galectin-1在膀胱癌中的作用對于臨床上診治惡性腫瘤具有現(xiàn)實意義，有望成為膀胱癌的診斷和靶向治療的新指標。

本組實驗結(jié)果顯示，90例膀胱癌組織和20例癌旁膀胱黏膜組織中Galectin-1的陽性表達率分別為55.6%(50 /90)、30%(6/20)，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，提示Galectin-1的高表達可能參與膀胱癌的發(fā)生。研究報道，Galectin-1可誘導(dǎo)卵巢癌和肺癌細胞增殖[11-12]。在宮頸癌細胞中，通過RNA 干擾技術(shù)抑制Galectin-1 的活性，可顯著抑制腫瘤細胞的增殖[9]。 TOUSSAINT等[13]研究發(fā)現(xiàn)Galectin-1在體外可增強膠質(zhì)母細胞瘤的遷移和侵襲能力，而體內(nèi)高表達者更易浸潤、預(yù)后更差。Galectin-1通過調(diào)節(jié)趨化蛋白的合成和分泌，誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)成纖維細胞，從而增強惡性腫瘤細胞的侵襲和遷移能力[14]。 Galectin-1的表達與病理分級、病理分期相關(guān)，并且出現(xiàn)隨病理分級、病理分期提升表達率升高的趨勢。表明隨著膀胱癌臨床分期的進展Galectin-1蛋白表達逐漸升高，Galectin-1蛋白可能參與了膀胱癌的進展及侵襲轉(zhuǎn)移。生存分析結(jié)果顯示，Galectin-1陽性表達組3年生存率顯著低于陰性表達組，提示Galectin-1可能可作為判斷膀胱癌預(yù)后的指標。

綜上所述，本研究結(jié)果提示Galectin-1在膀胱癌中異常表達，與膀胱癌的臨床病理參數(shù)具有一定的相關(guān)性，其高表達對患者的遠期預(yù)后產(chǎn)生不良影響，提示Galectin-1與膀胱癌發(fā)生發(fā)展及生物學(xué)行為密切相關(guān)，為膀胱癌的基因靶向治療也提供了一個新的思路。

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