復方顛倒凝膠的設(shè)計與評價*

林姍姍，王佳露，劉 睿，年 莉，國大亮

（天津中醫(yī)藥大學，天津 300193）

痤瘡作為一種常見皮膚病不僅影響個人美觀，而且可引發(fā)心理疾病，因而得到醫(yī)學界的廣泛關(guān)注?！夺t(yī)宗金鑒》中的顛倒散治療痤瘡具有較好的療效[1-4]，其藥物來源于天然植物和礦物，符合人們對于控制抗生素耐藥性和降低藥物毒副作用的需求[5]。但散劑在皮膚表面滯留時間短導致藥效難以發(fā)揮，大量學者對其進行改良均取得了較好的效果[6-9]?，F(xiàn)以顛倒散為基礎(chǔ)加入黃柏、苦參、蘆薈中抗痤瘡的有效成分制成藥效持久、安全性高且使用方便的復方顛倒凝膠并進行評價，為其治療痤瘡提供理論依據(jù)，同時為其他中藥外用處方的劑型改制開拓新的思路。

1 實驗材料

1.1 實驗儀器 PHS-25型酸度計（上海皓莊儀器有限公司），NDJ-79旋轉(zhuǎn)式黏度計（上海平軒科學儀器有限公司），BT125D型分析天平（德國賽得利斯公司），SPD-M20A高效液相色譜儀（日本島津公司），YB-P6智能透皮實驗儀（天津市鑫洲科技有限公司）。

1.2 藥材與試劑 大黃總蒽醌（50%，南京朗澤生物科技有限公司），鹽酸小檗堿（98%，南京朗澤生物科技有限公司），苦參堿（98%，南京朗澤生物科技有限公司），氧化苦參堿（98%，南京朗澤生物科技有限公司），蘆薈提取物（10∶1，南京朗澤生物科技有限公司），升華硫（商丘市亮峰衛(wèi)生用品有限公司），卡波姆-940（武漢瑞孚因科技發(fā)展有限公司），1-2丙二醇（分析純，天津市富宇精細化工有限公司），甘油、三乙醇胺、氫氧化鈉、尿素（均為分析純，天津市風船化學試劑科技有限公司），蒸餾水（屈臣氏）。

2 復方顛倒凝膠的制備

2.1 凝膠成分的確立 本實驗參考文獻中的藥物組成[9]，以顛倒散為基礎(chǔ)加入黃柏、苦參、蘆薈，明確該5味藥物中抗痤瘡的有效成分，包括大黃總蒽醌、鹽酸小檗堿、苦參堿、氧化苦參堿、蘆薈提取物、升華硫。根據(jù)中醫(yī)學中君臣佐使的方劑配伍理論確定中藥原材料的比例，通過查閱文獻得到所需的每種中藥提取物的含量，確立復方顛倒凝膠的組成比例為：大黃總蒽醌∶鹽酸小檗堿∶苦參堿∶氧化苦參堿∶蘆薈提取物：升華硫=4∶2∶1∶1∶2∶100。

2.2 復方顛倒凝膠單因素考察

2.2.1 凝膠基質(zhì)的選擇 根據(jù)不同型號卡波姆的特點及應(yīng)用范圍，本實驗最終選用卡波姆-940作為凝膠基質(zhì)的基本材料?？ú?940在皮膚表面粘附性強、涂展性好，可延長藥物在皮膚表面滯留時間，增加藥物作用，被廣泛用于皮膚疾病，并且其能吸收組織滲出液，有利于分泌物的排出，特別適宜治療脂溢性皮膚病[10]。

2.2.2 凝膠處方膠凝溫度的考察 以膠凝處方的膠凝溫度和凝膠處方的黏度為指標篩選凝膠基質(zhì)占處方總量20%、25%和30%的不同凝膠處方（n=3）。參考文獻采取[11-12]以下方法進行膠凝溫度的測定：分別取凝膠2 mL至玻璃試管中，將試管置于10℃恒溫水浴中，其試管內(nèi)液面低于水面2 cm，平衡10 min。水浴溫度采用精度1℃的精密溫度計測定，緩慢升溫，升溫速率為每分鐘升高1℃。每升高1℃，取出試管，使試管迅速傾斜45℃，觀察內(nèi)容物流動情況。當試管內(nèi)液體不流動時的溫度即為膠凝溫度，見表1。

表1 凝膠處方的膠凝溫度 ℃

2.2.3 凝膠處方黏度的考察 由于該凝膠呈現(xiàn)高黏度狀態(tài)，故選擇黏度計的第Ⅱ單元測定器、100#轉(zhuǎn)筒，在相同溫度條件下（實測室溫：33℃）分別對凝膠基質(zhì)占處方總量20%、25%、30%時的凝膠處方進行凝膠黏度的測定（n=3）。取凝膠約15 mL于測試容器中，直至凝膠達到該容器錐形面下部邊緣，安裝完成后，起動電機，待指針穩(wěn)定后讀取數(shù)據(jù)。根據(jù)所選的測定器和轉(zhuǎn)筒，計算結(jié)果見表2。凝膠黏度值=刻度盤讀取的數(shù)值×100（因子數(shù)）mPa/s

表2 凝膠處方的黏度參數(shù)

2.2.4 凝膠單因素考察結(jié)果 根據(jù)凝膠處方的膠凝溫度和黏度的考察結(jié)果，確定最優(yōu)處方為凝膠基質(zhì)占處方總量的25%，該凝膠處方的膠凝溫度為33℃，黏度為 7 800 mPa/s。

2.3 復方顛倒凝膠制備方法 將文獻[13]中的制備方法進行改進，取卡波姆-940 10.0 g，加水至250 g，溶脹24 h，水浴加熱并攪拌均勻，用三乙醇胺適量調(diào)節(jié)酸堿度至中性，即為空白凝膠基質(zhì)；分別精密稱取大黃總蒽醌4.0 g、鹽酸小檗堿2.0 g、苦參堿1.0 g，氧化苦參堿1.0 g，蘆薈提取物2.0 g和升華硫100.0 g，混合均勻，加甘油100.0 g，研磨至均勻細膩，加丙二醇200.0 g，攪拌均勻，即得到藥物混懸液；取空白凝膠基質(zhì)，將藥物混懸液加至空白凝膠基質(zhì)，快速攪拌，加尿素150.0 g，加水至1 000 g，攪拌均勻，即得到復方顛倒凝膠1 000 g。

3 復方顛倒凝膠的藥物評價

3.1 外觀 表現(xiàn)為金黃色乳膠狀半固體，質(zhì)地均勻細膩，黏稠度適宜，生物相容性及涂展性良好，無油膩感，見圖1。

圖1 復方顛倒凝膠的外觀

3.2 酸堿度 多次精密測量復方顛倒凝膠的pH值，測量方法為：取本品10 g，加入20 mL蒸餾水中進行稀釋，將兩只電極放入稀釋的溶液中，待顯示值穩(wěn)定后即可利用酸度計讀取pH值（n=3），結(jié)果見表3。

表3 復方顛倒凝膠的pH值

3.3 凝膠黏度的測定 方法同2.2.3，利用黏度計在相同溫度條件下（實測室溫：33℃）對復方顛倒凝膠的黏度進行測定（n=3），結(jié)果見表4。

表4 復方顛倒凝膠的黏度

4 鹽酸小檗堿體外釋放度考察

4.1 色譜條件色譜柱Diamonsil C18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL/min；檢測波長：350 nm；進樣量：10 μL；流動相：乙腈：0.1%的磷酸溶液（20∶80）。

4.2 磷酸鹽緩沖液（PBS）的配置 稱取磷酸二氫鉀（KH2PO4）0.24 g，磷酸氫二鈉（Na2HPO4）1.44 g，氯化鈉（NaCl）8.0 g，氯化鉀（KCl）0.2 g，并加入 1 L 蒸餾水，攪拌使充分溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH，作為等滲溶液。

4.3 標準曲線的繪制 精密稱取鹽酸小檗堿對照品2.01 mg置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度線，得濃度為201 μg/mL的鹽酸小檗堿對照品儲備液，置4℃的冰箱中保存?zhèn)溆?。將鹽酸小檗堿對照品儲備液以甲醇逐級稀釋，得濃度分別為100.50、50.25、25.12、12.56、6.28、3.14、1.57 μg/mL，系列對照品溶液。按照4.1中的色譜條件進樣，記錄峰面積，以對照品濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），繪制標準曲線，求得直線回歸方程 Y=954.57X-1 000．5（r＝0．999 3），如圖 2 所示。表明濃度在1.57～100.50 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，符合定量分析要求。

圖2 鹽酸小檗堿在甲醇中的標準曲線

4.4 體外釋放實驗

4.4.1 體外釋放的考察方法 本實驗選擇的釋放介質(zhì)為PBS（pH7.8），采用膜透析法[14]考察復方顛倒凝膠的體外釋藥特性。具體實驗步驟為：分別精密稱取2.01 mg復方顛倒凝膠置于透析袋中，兩端用透析袋夾夾緊，置于含60 mL釋放介質(zhì)PBS的燒杯中，設(shè)置磁力攪拌器轉(zhuǎn)速為200 r/min，溫度為（35±1）℃。分別于 0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、14 h 取樣1 mL，同時補加等溫同體積的釋放介質(zhì)PBS。用高效液相色譜法（HPLC）測定藥物釋放量，每個樣品進行3次平行實驗。

累積釋放量（Qn）和累積釋放百分率（F%）分別由公式（1）和公式（2）求得：

公式中Qn為各時間點的累積釋放量；F%為各時間點的累積釋放百分率；t（min）為取樣時間點；Cn為第n個取樣時間點的實測藥物濃度；V0為溶出介質(zhì)總體積；Vi為每次取樣體積；Ci為第i個取樣時間點實測藥物濃度；C0為總藥物濃度。

4.4.2 體外釋放的計算方法 體外釋放實驗結(jié)果通過計算測定濃度與初始制劑濃度之比得到藥物累積釋放百分率。以藥物累積釋放百分率（%）對取樣時間（T）進行擬合，得到鹽酸小檗堿和復方顛倒凝膠的體外累積釋放率曲線。如圖3所示，凝膠的累積釋放率在1 h達到25.03%，表明藥物前期釋放突釋，12 h達到90.38%，后期釋藥完全，說明凝膠中的有效成分能夠持續(xù)釋放，保證藥物達到有效的治療作用。將釋放數(shù)據(jù)進行零級、一級、Higuchi，Hixcon-Crowell，Ritger-Peppas和 Weibull方程擬合并進行回歸分析，比較各回歸方程的相關(guān)系數(shù)。所得的擬合方程中以Ritger-Peppas方程的R值最高，R值為0.956 2，說明藥物具有良好的緩釋作用，如表5所示。

圖3 復方顛倒凝膠的體外累積釋放率

表5 體外釋放的擬合方程結(jié)果

5 討論

現(xiàn)代研究表明，大黃中的大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚等大黃蒽醌類物質(zhì)對痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌均有較強的抑制作用[15]，且具有明顯的抗炎作用[16-18]；硫磺中的硫易與皮膚作用生成硫化氫和五硫磺酸使表皮軟化，具有脫脂、殺菌、止癢及角質(zhì)促溶作用[19]；黃柏中的鹽酸小檗堿具有抗病原微生物等作用[20]；苦參中的苦參堿和氧化苦參堿對金黃色葡萄桿菌有較強的抑制作用[21-22]；蘆薈具有抗菌作用，對葡萄球菌最為敏感[23]，此外還有調(diào)節(jié)免疫功能、促進傷口愈合、抗炎以及抗氧化等作用[24]，而且它是一種優(yōu)良的天然保濕劑和皮膚營養(yǎng)劑，具有護膚美容功能。

本課題以中醫(yī)治療痤瘡的傳統(tǒng)有效方劑顛倒散為基礎(chǔ)方，加黃柏、苦參、蘆薈3味藥物中抗痤瘡的有效成分組成復方顛倒散。由于傳統(tǒng)外用散劑表面積大，容易吸濕、結(jié)塊和分散，導致散劑在皮膚表面的滯留時間短，不利于藥效的發(fā)揮[25]；且散劑調(diào)制麻煩、劑量難以確定、藥物浪費大、不便于患者使用等諸多弱點日益突出[26]，這些都不適應(yīng)現(xiàn)代用藥的需求，因此散劑的應(yīng)用有著一定的局限性。凝膠具有良好的緩釋作用，使藥效持久，可以提高藥物的安全性和有效性；凝膠可吸水膨潤的特點保證其更好地吸收組織滲出液，促進藥物透皮吸收；且使用劑量小，幾乎無毒副作用，不妨礙皮膚的正常生理功能[27-28]。故本實驗將傳統(tǒng)外用散劑改制為凝膠劑。

選取卡波姆-940制成凝膠基質(zhì)，是考慮到其良好的黏滯性和親水凝膠性能夠使凝膠劑在體外釋放中有較好的緩釋作用[29]，可以產(chǎn)生持久并容易控制的血藥濃度，避免峰谷現(xiàn)象的出現(xiàn)，減少用藥次數(shù)，提高藥物的安全性和有效性[30]，因此凝膠劑在很大程度上克服了散劑的不足。另外，凝膠在不同溫度條件下的黏度對保證其在被使用過程中的患者順應(yīng)性和治療效果起決定作用，是重要的流變學參數(shù)，因此對凝膠溫度和用量的考察可以保證復方顛倒凝膠常溫下呈半固體的狀態(tài)。

6 結(jié)論

本實驗制得復方顛倒凝膠的凝膠基質(zhì)占處方總量的25%，膠凝溫度為33℃；其外觀為金黃色帶乳膠狀半固體，pH值為7，凝膠黏度為7 533 mPa/s；體外釋放實驗中，復方顛倒凝膠在12 h釋放率達到90.38%，符合Ritger-Peppas方程，表明凝膠具有良好的緩釋作用。由此可見，復方顛倒凝膠制備工藝穩(wěn)定，其外觀、酸堿度、流變學和體外釋放性能均良好，為復方顛倒凝膠臨床上用于治療痤瘡提供理論依據(jù)，同時為中醫(yī)領(lǐng)域其他中藥外用處方的劑型改制開拓新的思路。

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