不同采收期和部位黔產(chǎn)千里光中總黃酮、綠原酸和金絲桃苷含量動態(tài)比較*

李 燕，韓忠耀，魏學軍

（貴州省黔南民族醫(yī)學高等?？茖W校，都勻 558000）

千里光為菊科植物千里光（Senecio scandens Buch.-Ham.）的干燥地上部分，具有清熱解毒、明目退翳、殺蟲止癢、散瘀消腫等功效，主要含黃酮、生物堿、萜類、酚酸類、揮發(fā)油等化學成分[1-3]。收載于《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標準》(2003年版)，在貴州苗族聚集區(qū)被廣泛應用，全草用于風熱感冒，目赤腫痛，泄瀉痢疾，皮膚濕疹，瘡癤[4]。目前國內(nèi)外針對千里光的研究多以化學成分、藥理作用和含量測定為主，作為影響其品質(zhì)的采收期、用藥部位和炮制加工方法等因素，雖有文獻記載，如采收期有夏秋采收和全年采收的記載；藥用部位有全草入藥和地上部位入藥的記載，但標準并不統(tǒng)一。總黃酮、綠原酸、金絲桃苷是千里光的重要活性物質(zhì)，具有抗菌抗病毒、抗癌等廣泛的藥理作用[5-7]。現(xiàn)以總黃酮、綠原酸和金絲桃苷為考察指標，比較不同采收期和部位的黔產(chǎn)千里光中3種活性成分的含量和生物產(chǎn)量，以明確黔產(chǎn)千里光的適宜采收期和部位，實驗結(jié)果可為建立和完善千里光的質(zhì)量控制標準提供科學依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司）；Cary 100型雙光束紫外-可見分光光度計（美國安捷倫公司）；IKA RV10型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國IKA）；SG-4050C型數(shù)顯恒溫水浴鍋；2.0R型離心機（德國Heraeus）；AE240型電子天平（瑞士Mettler）。蘆丁對照品（批號 100080-200803）、綠原酸對照品（批號110753-201314）、金絲桃苷對照品（批號110753-201314）均購買于中國生物制品檢定所；乙腈為色譜純；純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司）；其余試劑均為分析純。

2 材料

千里光2013年3月扦插于實驗田，土壤黃壤，質(zhì)地中等，常規(guī)管理，采集時間為2015年3月15日—2016年2月30日，每月采集2次，每次隨機采集生長良好的完整植株10株，55℃下烘干，備用。千里光3—9月主要以營養(yǎng)生長為主，花果期10月至次年3月，9月份部分葉開始枯萎，莖全年均不枯萎。采集藥材經(jīng)黔南民族醫(yī)學高等?？茖W校魏學軍副教授鑒定為菊科植物千里光（Senecioscandens Buch.-Ham.）全草，樣本保存在黔南民族醫(yī)學高等?？茖W校中藥教研室標本室。

3 方法與結(jié)果

3.1 供試品溶液的制備 精密稱取1 g干燥千里光粗粉，加入10倍70%乙醇，加熱回流提取2次，每次1.5 h，過濾合并濾液并定容至50 mL，離心，吸取上清溶液，0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液即得供試品溶液[8]。

3.2 對照品溶液的制備 精密稱取蘆丁對照品7.60 mg，置于25 mL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻后即得濃度為0.304 g/L的蘆丁對照品溶液；精密稱取綠原酸對照品10.30 mg，置于50 mL容量瓶中，加75%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻后即得濃度為0.206 g/L的綠原酸對照品溶液；精密稱取金絲桃苷對照品4.10 mg，置于50 mL容量瓶中，加75%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻后即得濃度為0.082 g/L的金絲桃苷對照品溶液[8]。

3.3 色譜條件 綠原酸測定的色譜條件：色譜柱為Diamonsil C18柱（200 nm × 4.6 nm，5 μm），流動相為甲醇-0.2% 冰醋酸（15∶85），流速：1.0 mL/min，進樣量：10 μL，柱溫 25 ℃，檢測波長為 327 nm，理論塔板數(shù)按綠原酸峰算不低于8 000[9]，綠原酸標準品、供試品色譜圖見圖1；金絲桃苷的色譜條件：色譜柱為 Diamonsil C18柱（200 nm×4.6 nm，5 μm），流動相為乙腈-0.2%醋酸（18∶82），流速：1.0 mL/min，進樣量：10 μL，柱溫 25 ℃，檢測波長為 360 nm，理論塔板數(shù)按金絲桃苷峰算不低于8 000。金絲桃苷標準品、供試品色譜圖見圖2。

圖1 綠原酸對照品（A）和供試品溶液（B）HPLC圖譜

圖2 金絲桃苷對照品（A）和供試品溶液（B）HPLC圖譜

3.4 檢測波長的選擇及標準曲線的繪制 精密量取濃度為0.304 mg/mL的蘆丁對照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL 分別加入到 25 mL 的容量瓶中，再向各容量中加入1 mL 5%亞硝酸鈉，搖勻，靜置6 min后，再分別加入1 mL 10%硝酸鋁，搖勻，靜置6 min后，再加入10 mL 5%氫氧化鈉，用70%的乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置15 min后，在400～700 nm波長進行掃描，確定最大吸收波長為508 nm，以吸光度對溶液濃度進行回歸分析，繪制濃度-吸光度標準曲線見圖3，求得回歸方程為Y=0.010 7X-0.041 3（r2＝0．999 9），結(jié)果表明蘆丁濃度在0.012 0～0.060 8 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；吸取一定量的綠原酸對照品溶液分別制成6個不同濃度，分別進樣 10 μL，按“3.3”項下條件測定峰面積，以進樣量為橫坐標，以峰面積為縱坐標進行回歸分析繪制標準曲線見圖4，回歸方程為Y=6546.9X+468.47（r2＝0．999 9），結(jié)果表明綠原酸進樣量在0.020 6～2.060 0 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；吸取一定量的金絲桃苷對照品溶液分別制成6 個不同濃度,分別進樣 10 μL，按“3.3”項下條件測定峰面積，以進樣量為橫坐標，以峰面積為縱坐標進行回歸分析繪制標準曲線見圖5，回歸方程為Y=4044.7X+0.8333（r2＝0．9999），結(jié)果表明金絲桃苷進樣量在0.082～0.820 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系[9-10]。

3.5 精密度實驗 精密吸取6份0.5 mL同一蘆丁對照品溶液，按“3.4”項下條件在508 nm處測定各吸光度，結(jié)果RSD=0.36%，表明紫外分光光度計儀器精密度良好；精密吸取綠原酸對照品溶液，連續(xù)進樣6次，按“3.3”項下條件測定峰面積，RSD=0.45%，表明高效液相色譜儀儀器精密度良好；精密吸取金絲桃苷對照品溶液，連續(xù)進樣6次，按“3.3”項下條件測定峰面積，RSD=0.48%，表明高效液相色譜儀儀器精密度良好。

圖3 蘆丁標準曲線圖

圖4 綠原酸標準曲線

圖5 金絲桃苷標準曲線

3.6 穩(wěn)定性實驗 精密吸取0.5 mL供試品溶液，按“3.4”項，分別在 0.0，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，12 h 時于508 nm處測定吸光度，RSD=1.52%，表明蘆丁在12 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性；取供試品溶液，按“3.3”項下條件分別在 0，6，12，18，24，36 h 時分別進樣10 μL，測定綠原酸峰面積，RSD=1.70%，表明綠原酸在36 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性；取供試品溶液，按“3.3”項下條件別在 0，6，12，18，24，36 h 時分別進樣 10 μL，測定金絲桃苷峰面積，RSD=1.67%，表明金絲桃苷在36 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

3.7 重復性實驗 精密吸取6份0.5 mL同一供試品溶液，按“3.4”項下條件分別測定吸光度，結(jié)果RSD=1.66%，表明重復性良好；取同一供試品6份，按“3.3”項下條件測定峰面積，結(jié)果RSD=1.87%，表明重復性良好；取同一供試品6份，按“3.3”項下條件測定峰面積，結(jié)果RSD=1.83%，表明重復性良好。

3.8 含量測定 取各供試品溶液0.5 mL，按“3.4”項下條件測定總黃酮含量，結(jié)果見表1；精密吸取各供試品溶液，按“3.3”項下條件測定綠原酸的含量，結(jié)果見表2；精密吸取各供試品溶液，按“3.3”項下條件測定金絲桃苷的含量，結(jié)果見表3。

3.9 生物產(chǎn)量 樣品55℃下烘干后稱取根、莖、葉、全草4部位的干重，結(jié)果見表4。

4 結(jié)果與討論

實驗結(jié)果表明，不同采收期和部位黔產(chǎn)千里光中3種活性成分的含量和生物產(chǎn)量存在明顯差異。從采收期考慮，千里光6—8月份總黃酮的含量相對較高，以6月份含量最高，6—9月千里光中綠原酸和金絲桃苷的含量都相對較高，其中8月份綠原酸和金絲桃苷含量均最高，8月千里光的生物產(chǎn)量最大，和7、9月份差異不明顯，提示7—9月份為千里光的最佳采收期。

從藥用部位考慮葉中三者含量均最高，根、莖中也含有少量的黃酮類、綠原酸，根中除了4、5月檢出微量金絲桃苷外，其余月份均未檢出，莖、葉的生物產(chǎn)量占的比重較大，根的產(chǎn)量最低，提示千里光以地上部位入藥為佳，綜合考慮3種活性成分的含量和生物產(chǎn)量，建議千里光藥材7-9月份采收地上部位為宜。

千里光為多年生植物，在生長初期，植物以營養(yǎng)生長為主，光合作用形成的初生代謝產(chǎn)物主要滿足植物的生長需求，此時全草的總黃酮、綠原酸和金絲桃苷的含量相對較低，5月份后，初生代謝產(chǎn)物開始轉(zhuǎn)化為次生代謝產(chǎn)物，次生代謝產(chǎn)物含量開始富集，6月份總黃酮出現(xiàn)含量富集的高峰期，到6月份綠原酸、金絲桃苷含量開始較高，到8月份綠原酸和金絲桃苷富集達到峰值，9月份金絲桃苷的含量開始下降，在生長的初期柔軟和葉子一起參與光合作用和初生代謝，莖逐漸木質(zhì)化后，較少參與植物的代謝，根基本上不參與植物的光合作用。

故葉中的總黃酮、綠原酸和金絲桃苷等次生代謝產(chǎn)物的含量明顯高于根、莖，根中幾乎不含金絲桃苷。至于黃酮類化合物和綠原酸、金絲桃苷富集的高峰期不一致，需進一步研究。8月份生物產(chǎn)量也達到峰值，9月份的生物產(chǎn)量開始緩慢下降，因為部分葉開始枯萎、脫落，由于花和果實較小，對生物產(chǎn)量影響較小，故未予考察。

本實驗結(jié)果為指導千里光合理的采收期和資源合理利用提供了科學依據(jù)，結(jié)果提示用藥時應注

采收期、藥用部位對藥材質(zhì)量的影響。

表1 不同采收期和部位千里光中總黃酮的含量（x±s）mg/g

表2 不同采收期和部位千里光中綠原酸的含量(x±s)mg/g

表3 不同采收期和部位的千里光中金絲桃苷的含量(x±s)mg/g

表4 不同采收期和部位的千里光的生物產(chǎn)量(x±s)g

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