上調(diào)FBP1表達對胃癌細胞生長的抑制作用

張 磊, 宋 鑫, 汪景坤, 宋 光

解放軍第二五二醫(yī)院消化內(nèi)科，河北 保定 071000

胃癌是一種起源于胃黏膜上皮細胞的消化道惡性腫瘤。2015年數(shù)據(jù)顯示，我國每年胃癌的新發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)分別約為40萬和30萬[1-2]。雖然全球胃癌的發(fā)病率和死亡率有所下降，但我國的發(fā)病率和死亡率仍居高不下，是威脅我國人民身體健康和降低生活質(zhì)量的重要原因[3]。隨著胃癌的診斷手段和治療技術(shù)進步，除了傳統(tǒng)的手術(shù)治療外，分子靶向治療也逐漸成為胃癌治療的較好選擇。尋找有效的分子靶點一直是胃癌領(lǐng)域及臨床研究的焦點問題。近年來，果糖-1,6-二磷酸酶1(fructose-1,6-bisphosphatase 1，F(xiàn)BP1)作為一種新的靶分子逐漸成為學(xué)者們研究的熱點。FBP1是FBP單鏈DNA結(jié)合家族中的重要成員，在細胞增殖、侵襲及凋亡等細胞過程中發(fā)揮重要作用，與肝癌、乳腺癌和胰腺癌等多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4-6]。有研究[7]發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)BP1在胃癌組織中低表達，與胃癌的腫瘤大小、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和生存率有關(guān)，提示其可能在胃癌的發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。目前，關(guān)于FBP1在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中的作用未見報道。因此，本研究以體外實驗的方式，先觀察FBP1在胃癌細胞中的表達，并通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染構(gòu)建FBP1過表達細胞，通過常用的生物學(xué)方法觀察上調(diào)FBP1表達對胃癌細胞生長的影響，以期為胃癌的治療提供新的靶點。

1 材料與方法

1.1細胞胃癌BGC-823細胞、SGC-7901細胞、正常胃黏膜上皮GES-1細胞均購自中國科學(xué)院上海細胞庫。

1.2試劑FBP1過表達重組質(zhì)粒(pcDNA3.1-Flag-FBP1)、空載體陰性對照質(zhì)粒(pcDNA3.1)和引物購自南京巴傲得生物科技有限公司。RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、BCA蛋白濃度測定試劑盒、膜聯(lián)蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)細胞凋亡檢測試劑盒均購自上海碧云天公司，辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔/鼠IgG(IgG-HRP)抗體、FBP1多克隆抗體、 c-Myc單克隆抗體、Cyclin D1單克隆抗體和β-actin單克隆抗體均購自美國Santa Cruz公司，LipofectamineTM2000、RPMI 1640培養(yǎng)液、 Opti-MEM培養(yǎng)液、青/鏈霉素、MTT試劑、胎牛血清均購自美國Gibco公司。

1.3方法

1.3.1 細胞培養(yǎng)：以DMEM完全培養(yǎng)液培養(yǎng)GES-1細胞、BGC-823細胞及SGC-7901細胞，均培養(yǎng)于37 ℃、95%濕度和體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2孵育箱中，2 d換液1次。待細胞幾乎完全鋪滿培養(yǎng)瓶底部時，以質(zhì)量濃度為2.5 g/L的胰蛋白酶消化細胞，待細胞脫落后以完全培養(yǎng)液終止消化。離心后(1 500×g)，棄上清，加入適量的完全培養(yǎng)液，按照1∶3的比例進行傳代。

1.3.2 FBP1 mRNA檢測：采用實時定量PCR檢測。收集生長良好的對數(shù)生長期GES-1細胞、BGC-823細胞及SGC-7901細胞，先以試劑盒提取3種細胞的總RNA，并進行逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA。以25 ml反應(yīng)體系(上下引物各0.5 μl，cDNA模板 2 μl，Taq酶1 μl，Master Mix 10 μl)，上PCR儀進行擴增。反應(yīng)條件：95 ℃ 3 min；95 ℃ 10 s、60 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s(×40)；72 ℃ 7 min。其中，F(xiàn)BP1上游引物：5′-CGCGCACCTCTATGGCATT-3′；下游引物：5′-TTCTTCTGACACGAGAACACAC-3′。β-actin上游引物：5′-GGACCTGACTGACTACCTC-3′；下游引物：5’-TACTCCTGCTTGCTGAT-3′。各種細胞均設(shè)3個平行孔，以內(nèi)參β-actin校正，2-△△CT法計算各種細胞中FBP1 mRNA的相對表達水平。

1.3.3 FBP1蛋白檢測：采用Western blotting檢測FBP1蛋白。收集對數(shù)期的GES-1細胞、BGC-823細胞和SGC-7901細胞，以細胞裂解液提取細胞總蛋白，并以BCA法進行濃度定量。將5×Loading buffer與提取的總蛋白混勻后，置于沸水浴中加熱3 min，以質(zhì)量濃度為15 g/L的SDS-PAGE蛋白進行電泳。其中，每孔加入變性蛋白60 μg，各種細胞均設(shè)置3個重復(fù)。先以80 V電壓分離30 min，再換120 V電壓。電泳結(jié)束后，取出蛋白凝膠，按濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)印到聚偏二氟乙烯膜上，以TBST液(含質(zhì)量濃度為50 g/L的脫脂奶粉)封閉處理1.5 h后，加入500倍稀釋的一抗(FBP1抗體和β-actin抗體)、2 000倍稀釋的二抗(IgG-HRP)孵育。避光條件下，滴加ECL發(fā)光液顯影曝光，以凝膠成像儀進行掃描，Image軟件分析計算FBP1蛋白的相對表達量。

1.3.4 細胞分組及轉(zhuǎn)染：取對數(shù)生長期的BGC-823細胞，以50 000/孔的密度平鋪到6孔板上。待細胞融合度在75%以上時，按照LipofectamineTM2000說明書操作步驟次日進行轉(zhuǎn)染。將BGC-823細胞隨機分為對照組(未轉(zhuǎn)染)、陰性組(轉(zhuǎn)染pcDNA3.1質(zhì)粒)和實驗組(轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-Flag-FBP1質(zhì)粒)。將預(yù)先配制的200 μl Opti-MEM培養(yǎng)液(無血清)、2.5 μg質(zhì)粒和10 μl LipofectamineTM2000的混合液分別加入陰性組和實驗組細胞中進行轉(zhuǎn)染，對照組加入等體積的培養(yǎng)液，充分混勻后，于常溫下反應(yīng)20 min。轉(zhuǎn)染后48 h，將各組細胞分為兩份，分別以1.3.2和1.3.3中的方法檢測各組BGC-823細胞中FBP1 mRNA和蛋白的表達情況。

1.3.5 細胞增殖：MTT法檢測細胞增殖。收集上述轉(zhuǎn)染后48 h的各組BGC-823細胞，以每孔200 μl接種細胞懸液(細胞濃度為50 000/ml)至96孔細胞板上。置于飽和濕度、37 ℃和體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)預(yù)培養(yǎng)。分別在培養(yǎng)24 h、48 h和72 h后，每孔中加入10 μl MTT溶液，孵育4 h，以酶標(biāo)儀檢測各組細胞450 nm處的吸光度(OD值)。其中，每組設(shè)5個平行孔，實驗重復(fù)3次。

1.3.6 細胞凋亡：流式細胞儀檢測細胞凋亡。收集轉(zhuǎn)染48 h后的1.3.4中的各組BGC-823細胞，其中每組實驗重復(fù)3次。先以質(zhì)量濃度為2.5 g/L的胰蛋白酶進行消化，再經(jīng)磷酸鹽緩沖液洗滌，離心(1 500×g)，加入500 μl細胞凋亡檢測試劑盒中Binding Buffer制成細胞懸液(細胞濃度為30 000/ml)。取1 ml細胞懸液，分別加入體積均為5 μl Annexin V-FITC和PI，充分混勻后，避光處理15 min，再加入200 μl Binding Buffer，置于流式細胞儀中檢測各組細胞的凋亡率。

1.3.7 Cyclin D1、c-Myc和Cleaved caspase-3蛋白檢測：采用Western blotting檢測各蛋白。收集轉(zhuǎn)染48 h后的1.3.4中的各組BGC-823細胞，每組細胞設(shè)3個重復(fù)，以裂解液提取總蛋白并定量后，經(jīng)沸水浴變性、電泳、封閉、轉(zhuǎn)印后，加入800倍稀釋的一抗(Cyclin D1抗體、c-Myc抗體、Cleaved caspase-3抗體和β-actin抗體)，4 ℃下過夜后，經(jīng)TBST洗膜后，加入2 000倍稀釋的二抗，室溫下孵育2 h后，以ECL顯影曝光，Image軟件分析計算各組BGC-823細胞中Cyclin D1、c-Myc和Cleaved caspase-3蛋白的相對表達量。

2 結(jié)果

2.1FBP1在胃癌細胞中低表達與正常胃黏膜上皮GES-1細胞相比，胃癌BGC-823、SGC-7901細胞中FBP1蛋白及mRNA的相對表達水平均顯著降低(P<0.05)，且BGC-823細胞較SGC-7901細胞下降更明顯(P<0.05)(見圖1、表1)。

圖1 Western blotting檢測胃癌細胞中FBP1蛋白表達水平Fig 1 The expression level of FBP1 protein in gastric cancer cells detected by Western blotting

表1 FBP1蛋白和mRNA在正常胃黏膜及胃癌細胞中的相對表達量Tab 1 The relative expressions of FBP1 protein and mRNA in normal gastric tissue and gastric cancer cells

注：與GES-1細胞相比，*P<0.05；與SGC-7901細胞相比，#P<0.05。

2.2上調(diào)FBP1抑制BGC-823細胞增殖與對照組比較，實驗組細胞FBP1蛋白及mRNA相對表達量顯著升高(P<0.05)，而陰性組中差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(見表2、圖2)。結(jié)果成功構(gòu)建了過表達的BGC-823細胞。MTT法檢測3組細胞中的OD值，結(jié)果如表3所示。轉(zhuǎn)染后24 h，對照組、陰性組和實驗組細胞的增殖能力比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；而在轉(zhuǎn)染后48 h和72 h，陰性組與對照組比較，細胞的增殖能力差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但實驗組細胞的增殖能力較對照組顯著受到抑制(P<0.05)。

圖2 Western blotting檢測各組BGC-823細胞中FBP1蛋白的表達水平Fig 2 The expression level of FBP1 protein in BGC-823 cells of each group detected by Western blotting

表2 各組細胞中FBP1蛋白及mRNA的相對表達量Tab 2 The relative expression of FBP1 protein and mRNA in the cells of each group

注：與對照組相比，*P<0.05。

表3 上調(diào)FBP1表達對各組細胞增殖的影響Tab 3 The effect of up-regulation of FBP1 expression on cell proliferation in each group

注：與對照組相比，*P<0.05。

2.3上調(diào)FBP1促進BGC-823細胞凋亡與對照組比較，陰性組細胞的凋亡率差異無統(tǒng)計學(xué)意義[(7.06±2.03)%vs(6.89±1.20)%](P>0.05)，但在過表達FBP1的實驗組中細胞的凋亡率較對照組顯著升高[(18.32±3.58)%vs(6.89±1.20)%]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見圖3)。

2.4上調(diào)FBP1抑制CyclinD1、c-Myc蛋白表達并促進Cleavedcaspase-3蛋白表達與對照組比較，陰性組中Cyclin D1、c-Myc和Cleaved caspase-3蛋白的表達水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而實驗組中Cyclin D1、c-Myc蛋白表達水平均顯著降低，Cleaved caspase-3蛋白表達顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見圖4、表4)。

注：A：對照組，B：陰性組，C：實驗組。

圖4 Western blotting檢測細胞中Cyclin D1、c-Myc、Cleaved caspase-3蛋白的表達

注：與對照組相比，*P<0.05。

3 討論

BFP1是糖代謝過程中的一種關(guān)鍵酶，通過催化1,6-二磷酸果糖水解在糖降解過程中發(fā)揮抑制作用。另外，F(xiàn)BP1作為一種轉(zhuǎn)錄輔助因子，可直接進入細胞核，通過與缺氧誘導(dǎo)因子相互作用參與腫瘤細胞增殖、侵襲、細胞周期和細胞凋亡等生理過程[8]。有研究[9-11]發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)BP1在肺癌組織及細胞中低表達，恢復(fù)FBP1表達不僅抑制葡萄糖攝取和乳酸生產(chǎn)，也會在體外缺氧條件下抑制肺癌細胞增殖和侵襲，并在體內(nèi)抑制肺癌生長；肝癌細胞中，F(xiàn)BP1啟動子超甲基化使FBP1表達下調(diào)后，細胞凋亡明顯受到抑制，腫瘤生長加速；同時，在結(jié)腸上皮HT-29細胞中降低FBP1表達后，細胞周期受到阻滯，細胞凋亡受到影響，F(xiàn)BP1在結(jié)腸炎的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。近年來，有研究[7,12]指出，F(xiàn)BP1在胃癌組織中低表達，與胃癌的腫瘤大小、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和生存率有關(guān)，F(xiàn)BP1下調(diào)促進胃癌腫瘤轉(zhuǎn)移，并預(yù)示著預(yù)后差。推測FBP1可能在胃癌的發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。目前，有關(guān)FBP1在胃癌中的作用未見報道。因此，本研究先對比正常胃黏膜上皮細胞和胃癌細胞中FBP1的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，胃癌BGC-823和SGC-7901細胞中FBP1表達水平顯著降低，且BGC-823細胞中FBP1下降更明顯。再以脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染FBP1過表達質(zhì)粒后，以MTT法和流式細胞儀檢測細胞的增殖和凋亡情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)BP1過表達的BGC-823細胞增殖能力顯著降低，且細胞凋亡能力顯著升高。提示低表達的FBP1促進胃癌細胞增殖，抑制細胞凋亡。

Cyclin D1是一種G1期的細胞周期蛋白，主要分布在細胞核和細胞質(zhì)中，通過與CDK4/6結(jié)合形成復(fù)合物，調(diào)控G1/S期，在細胞增殖和分裂過程中發(fā)揮著正向調(diào)節(jié)的作用[13]；c-Myc是一種原癌基因，屬Myc蛋白家族，正常情況下不表達或低表達，當(dāng)受到刺激時c-Myc基因被激活，編碼的c-Myc蛋白過表達，可以與Cyclin D1共同作用調(diào)控細胞周期G1/S期，加速細胞增殖[14]；半胱氨酸蛋白酶(caspase)是細胞凋亡途徑中重要的一組蛋白酶，caspase-3是其中的一員，位于caspase級聯(lián)反應(yīng)的最下游，正常情況下以非活性的酶原形式存在，一旦受到凋亡信號的刺激，則聚集成為有催化活性的Cleaved caspase-3，在細胞凋亡途徑中履行著凋亡執(zhí)行者的功能[15]。Cyclin D1、c-Myc和caspase-3在胃癌組織中的高表達，與胃癌惡性程度及預(yù)后關(guān)系密切[16-18]。有研究[19-20]發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌中，下調(diào)FBP1基因可增強Wnt/β-catenin信號通路活性、增加c-Myc和MMP7的表達；同時，F(xiàn)BP1通過上調(diào)細胞內(nèi)ROS和促凋亡蛋白cleaved PARP、Cleaved caspase 3和 Bax的表達水平和下調(diào)抗凋亡蛋白PARP，caspase 3、Bcl-2促進細胞凋亡；在瘦素處理后的乳腺癌BT-474和MDA-MB-231細胞中，上調(diào)FBP1表達后，通過調(diào)控c-Myc和cyclin D1蛋白的表達，抑制細胞增殖，促進細胞凋亡能力[21]。為了探討上調(diào)FBP1抑制胃癌細胞生長的分子機制，以Western blotting進一步檢測BGC-823細胞中Cyclin D1、c-Myc、Cleaved caspase-3蛋白的表達情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，實驗組中Cyclin D1、c-Myc蛋白表達水平均顯著降低，Cleaved caspase-3蛋白表達顯著升高。提示上調(diào)FBP1表達可能通過調(diào)控Cyclin D1、c-Myc和Cleaved caspase-3抑制胃癌BGC-823細胞增殖并誘導(dǎo)細胞凋亡。

綜上，F(xiàn)BP1在胃癌細胞中低表達，上調(diào)其表達能夠抑制細胞增殖并誘導(dǎo)細胞凋亡，其作用機制可能與上調(diào)Cleaved caspase-3蛋白和下調(diào)Cyclin D1、c-Myc蛋白的表達有關(guān)。這一結(jié)果豐富了胃癌發(fā)生、發(fā)展的分子機制，同時為建立以FBP1為靶點的分子靶向治療提供理論依據(jù)。

[1] CHEN W, ZHENG R, BAADE P D, et al. Cancer statistics in China, 2015 [J]. CA Cancer J Clin, 2016, 66(2): 115-132. DOI: 10.3322/caac.21338.

[2] 聶愛英, 梁麗娟, 雷超, 等. 飲食和生活習(xí)慣與胃癌的相關(guān)性研究進展[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展, 2017, 17(3): 578-581. DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2017.03.047.

NIE A Y, LIANG L J, LEI C, et al. Research progress on the relationship between diet and living habits and gastric cancer [J]. Progress in Modern Biomedicine, 2017, 17 (3): 578-581. DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2017.03.047.

[3] 黃倩倩, 陳晶. 胃癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的研究進展[J]. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志, 2017, 26(3): 241-244. DOI: 10.3969/j.issn.1006-5709.2017.03.001.

HUANG Q Q, CHEN J. Progress of recurrence and metastasis of gastric cancer [J]. Chin J Gastroenterol Hepatol, 2017, 26 (3): 241-244. DOI: 10.3969/j.issn.1006-5709.2017.03.001.

[4] 陳鐘, 唐慶林, 韓忠政, 等. 胃癌的治療進展[J]. 國際消化病雜志, 2017, 37(2): 77-78. DOI: 10.3969/j.issn.1673-534X.2017.02.003

[5] HIRATA H, SUGIMACHI K, KOMATSU H, et al. Decreased expression of fructose-1,6-bisphosphatase associates with glucose metabolism and tumor progression in hepatocellular carcinoma [J]. Cancer Research, 2016, 76(11): 3265-3276. DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-15-2601.

[6] DONG C, YUAN T, WU Y, et al. Loss of FBP1 by snail-mediated repression provides metabolic advantages in basal-like breast cancer [J]. Cancer Cell, 2013, 23(3): 316-331. DOI: 10.1016/j.ccr.2013.01.022.

[7] ZHU Y, SHI M, CHEN H, et al. NPM1 activates metabolic changes by inhibiting FBP1 while promoting the tumorigenicity of pancreatic cancer cells [J]. Oncotarget, 2015, 6(25): 21443-21451. DOI: 10.18632/oncotarget.4167.

[8] 楊璟, 陳建平, 徐斌,等. 果糖-1,6-二磷酸酶在肝癌組織的表達及其對預(yù)后的影響[J]. 中華實驗外科雜志, 2016, 33(4): 1088-1090. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2016.04.067.

YANG J, CHEN J P, XU B, et al. Expression of fructose-1, 6-bisphosphatase in heptocelluar carcinoma tissues and its effect on the prognosis of patients [J]. Chin J Exp Surg, 2016, 33(4): 1088-1090. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2016.04.067.

[9] LI B, QIU B, LEE D S, et al. Fructose-1,6-bisphosphatase opposes renal carcinoma progression [J]. Nature, 2014, 513(7517): 251-255. DOI: 10.1038/nature13557.

[10] ZHANG J, WANG J, XING H, et al. Down-regulation of FBP1 by ZEB1-mediated repression confers to growth and invasion in lung cancer cells [J]. Mol Cell Biochem, 2016, 411(1-2): 331-340. DOI: 10.1007/s11010-015-2595-8.

[11] WANG B, HSU S H, FRANKEL W, et al. Stat3-mediated activation of microRNA-23a suppresses gluconeogenesis in hepatocellular carcinoma by down-regulating Glucose-6-phosphatase and peroxisome proliferator-activated receptor gamma, coactivator 1 alpha [J]. Hepatology, 2012, 56(1): 186-197. DOI: 10.1002/hep.25632.

[12] LI J, WANG Y, LI Q G, et al. Downregulation of FBP1 promotes tumor metastasis and indicates poor prognosis in gastric cancer via regulating epithelial-mesenchymal transition [J]. PLoS One, 2016, 11(12): e0167857. DOI: 10.1371/journal.pone.0167857.

[13] PESTELL R G. New roles of cyclin D1 [J]. Am J Pathol, 2013, 183(1): 3-9. DOI: 10.1016/j.ajpath.2013.03.001.

[14] 鄒治銘, 郭華雄. C-myc在腫瘤中作用的研究進展[J]. 現(xiàn)代醫(yī)學(xué), 2016, 44(7): 1024-1026.

[15] MCILWAIN D R, BERGER T, MAK T W. Caspase functions in cell death and disease [J]. Cold Spring Harb Perspect Biol, 2013, 5(4): a008656. DOI: 10.1101/cshperspect.a008656.

[16] KUMARI S, PUNEET, PRASAD S B, et al. Cyclin D1 and cyclin E2 are differentially expressed in gastric cancer [J]. Med Oncol, 2016, 33(5): 40. DOI: 10.1007/s12032-016-0754-8.

[17] 李良慶, 宋俊, 潘敦. 胃癌組織中LIN28B和c-myc的表達及其臨床意義[J]. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志, 2015, 24(2): 176-181. DOI: 10.3969/j.issn.1006-5709.2015.02.015 .

LI L Q, SONG J, PAN D. Expression of LIN28B and c-myc in gastric carcinoma and its clinical significance [J]. Chin J Gastroenterol Hepatol, 2015, 24 (2): 176-181.DOI: 10.3969/j.issn.1006-5709.2015.02.015.

[18] 謝瓊, 盧月月, 易宏鋒. Caspase-3和P53在胃癌中的表達及臨床意義[J]. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志, 2014, 23(11): 1287-1289. DOI: 10.3969/j.issn.1006-5709.2014.11.012.

XIE Q, LU Y Y, YI H F. Expression and clinical significance of Caspase-3 and P53 in gastric cancer [J]. Chin J Gastroenterol Hepatol, 2014, 23 (11): 1287-1289. DOI: 10.3969/j.issn.1006-5709.2014.11.012.

[19] LI K, YING M, FENG D, et al. Fructose-1, 6-bisphosphatase is a novel regulator of Wnt/β-Catenin pathway in breast cancer [J]. Biomed Pharmacother, 2016, 84: 1144-1149. DOI: 10.1016/j.biopha.2016.10.050.

[20] LIU Y, JIANG Y, WANG N, et al. Invalidation of mitophagy by FBP1-mediated repression promotes apoptosis in breast cancer [J]. Tumor Biology, 2017, 39(6): 1010428317708779. DOI: 10.1177/1010428317708779.

[21] 劉一鋒, 蔣玉林, 張志乾, 等. 瘦素通過下調(diào)FBP1基因表達促進人乳腺癌BT-474和MDA-MB-231細胞增殖并抑制細胞凋亡[J]. 腫瘤, 2017, 37(6): 556-567. DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2017.11.080.

LIU Y F, JIANG Y L, ZHANG Z Q, et al. Leptin promotes proliferation and inhibits apoptosis of human breast cancer BT-474 and MDA-MB-231 cells by down-regulating the expression of FBP1 gene [J]. Tumor, 2017, 37(6): 556-567. DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2017.11.080.