Notch信號(hào)通路在骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞中的表達(dá)及意義

， ， ，，，，，鄧月

(四川省骨科醫(yī)院上肢科，四川 成都 610041)

Notch信號(hào)通路是高度保守的細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)通路，廣泛存在于無(wú)脊椎動(dòng)物及脊椎動(dòng)物中。Notch信號(hào)通路通過(guò)配體與受體結(jié)合激活，調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化與凋亡，決定細(xì)胞的命運(yùn)，與多種組織、器官、系統(tǒng)的發(fā)育及多種疾病密切相關(guān)[1-2]。目前證實(shí)哺乳動(dòng)物有4個(gè)Notch受體(Notch1～4)和5個(gè)Notch配體(Delta1、Delta3、Delta4、Jagged-1、Jagged-2)。骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)是最常見(jiàn)的退行性關(guān)節(jié)疾病，具有較高的發(fā)病率。有文獻(xiàn)報(bào)道40歲以下人群的發(fā)病率約5%，60歲以上人群中高達(dá)50%的人在X射線上有OA表現(xiàn)，75歲以上人群中高達(dá)80%的人有OA癥狀[3-4]。OA晚期導(dǎo)致關(guān)節(jié)疼痛、畸形和功能障礙，嚴(yán)重影響患者的工作與日常生活，是成年人勞動(dòng)力喪失的主要原因之一。我國(guó)骨關(guān)節(jié)炎患者可能超過(guò)5 000萬(wàn)[4]。Notch信號(hào)通路在OA軟骨細(xì)胞增殖、分化、凋亡、基質(zhì)合成及維持軟骨細(xì)胞表型等方面起著十分重要的作用[1-2]。OA關(guān)節(jié)軟骨中異常表達(dá)的Notch信號(hào)通路與其他OA致病因子共同作用于OA軟骨及滑膜等組織，參與OA的整個(gè)病變過(guò)程[5-6]。但目前Notch配體及受體信號(hào)通路在OA中的作用地位及作用機(jī)制尚不明確，還需要進(jìn)一步研究。

本文旨在通過(guò)細(xì)胞跨膜Notch配體4(delta-like ligand 4,DLL4)和γ-分泌酶抑制劑(DAPT)分別激活和抑制Notch信號(hào)通路后，觀察體外培養(yǎng)的OA軟骨細(xì)胞中Notch1、Notch3、Jagged-1、Jagged-2、HES5的表達(dá)情況，探索DLL與OA軟骨細(xì)胞基質(zhì)合成的關(guān)系及其可能的作用機(jī)制，從而探索Notch信號(hào)通路在骨關(guān)節(jié)炎病變進(jìn)程中的作用及其可能的作用機(jī)制，為探索骨關(guān)節(jié)炎早期藥物治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集2017年我院8例因膝關(guān)節(jié)OA行膝關(guān)節(jié)置換患者的股骨髁軟骨作為觀察組，再選擇1例因外傷行膝上截肢的正常股骨髁軟骨作為對(duì)照組。收集患者一般資料，根據(jù)病史、X射線片、術(shù)中肉眼觀察、術(shù)后鏡下病理學(xué)等排除標(biāo)本腫瘤、結(jié)核、感染、類風(fēng)濕炎癥、明顯骨質(zhì)疏松，同時(shí)排除有免疫系統(tǒng)疾病、糖尿病等全身性疾病患者。觀察組8例，男2例，女6例，年齡57～85歲，平均68.1歲；左側(cè)5例，右側(cè)3例。對(duì)照組1例，男性，19歲。觀察組及對(duì)照組取適量軟骨組織塊放入4%多聚甲醛固定，剩余部分放入DMEM低糖培養(yǎng)基等待細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)液為無(wú)菌的DMEM低糖培養(yǎng)基(鏈霉素100 u/mL,青霉素100 u/mL)。細(xì)胞培養(yǎng)用100 ng/μL DLL4和20 μmol/L DAPT分別激活和抑制OA軟骨細(xì)胞Notch信號(hào)通路，使用OA軟骨細(xì)胞+PBS緩沖液作為對(duì)照。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

1.2.1 原代培養(yǎng) 取剩余新鮮的軟骨組織先后使用0.2%胰蛋白酶、0.2%Ⅱ型膠原酶低糖DMEM溶液、0.2%Ⅱ型膠原酶(sigma)溶液消化，再加入DMEM培養(yǎng)基(含20%胎牛血清，鏈霉素100 u/mL,青霉素100 u/mL)制成細(xì)胞懸液，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)皿中，再置于37 ℃、5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，一般4～6 h后軟骨組織塊消化完全。觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，每3 d換液。

1.2.2 傳代培養(yǎng) 原代培養(yǎng)細(xì)胞覆蓋瓶底80%以上時(shí)，吸盡培養(yǎng)基，PBS清洗2次后加入0.25%胰蛋白酶，37 ℃、5%CO2孵育箱消化2～3 min，鏡下觀察待大部分細(xì)胞變圓漂浮時(shí)，加入20%含胎牛培養(yǎng)基終止消化，1 000 r/min離心3 min后加入適量20%胎牛DMEM培養(yǎng)基重懸，血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，104/mL傳代接種進(jìn)入傳代培養(yǎng)。同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞爬片，Ⅱ型膠原免疫組化染色行細(xì)胞鑒定。

1.2.3 細(xì)胞爬片 蓋玻片放置于培養(yǎng)皿中，無(wú)菌0.1 mg/mL多聚賴氨酸溶液包被蓋玻片后干燥備用，待1代軟骨細(xì)胞爬滿培養(yǎng)瓶80%時(shí)，消化收集細(xì)胞，所收集的細(xì)胞按104～105/mL接種，隔夜待細(xì)胞貼壁后按分組加入實(shí)驗(yàn)藥物，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，培養(yǎng)5 d后終止培養(yǎng)待細(xì)胞學(xué)檢測(cè)。分組情況如下：①正常組(正常軟骨細(xì)胞)；②OA組(OA軟骨細(xì)胞+PBS緩沖液)；③DAPT組(OA軟骨細(xì)胞+DAPT 20 μmol/L)；④DLL4組(OA軟骨細(xì)胞+DLL4(DLL4)100 ng/μL)。

1.3 組織學(xué)檢測(cè)

取材后軟骨組織用4%多聚甲醛固定24 h后乙二胺四乙酸(ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA)脫鈣，石蠟包埋后4 μm切片待組織學(xué)檢查。分別使用HE染色、甲苯胺藍(lán)染色觀察軟骨的形態(tài)變化。

1.4 免疫組化

免疫組化檢測(cè)Notch-1、Jagged-1、Jagged-2、HES5、Notch-3在正常軟骨細(xì)胞及OA軟骨細(xì)胞中的表達(dá)情況。待1代細(xì)胞爬滿培養(yǎng)瓶80%后，消化收集細(xì)胞，收集的細(xì)胞按104～105/mL接種于6孔板的蓋玻片上，隔夜待細(xì)胞貼壁后按分組加入實(shí)驗(yàn)藥物，培養(yǎng)5 d后終止培養(yǎng)，待下一步細(xì)胞學(xué)檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)步驟：培養(yǎng)5 d終止細(xì)胞培養(yǎng)，PBS清洗5 min，3次；4%多聚甲醛固定30 min；PBS清洗5 min，3次；3%H2O2(試劑A)孵育10 min；PBS清洗標(biāo)本5 min，3次；山羊血清孵育(試劑B)37 ℃，30 min；相應(yīng)的一抗孵育(滴度1∶200)4 ℃過(guò)夜，陰性對(duì)照滴加等量的PBS；PBS清洗5 min，3次；二抗工作液孵育37 ℃，30 min；PBS清洗5 min，3次；滴加辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液孵育30 min；PBS清洗5 min，3次；DAB顯色，3～10 min；自來(lái)水沖洗；蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化，自來(lái)水沖洗。梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹(shù)膠封片。顯微鏡觀察、讀片，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.5 Western blot蛋白印記技術(shù)

細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)處理：OA軟骨細(xì)胞培養(yǎng)瓶棄培養(yǎng)基，漂洗細(xì)胞2次，去盡殘留培養(yǎng)基。加入1X SDS樣品緩沖液(每孔100 μL，每瓶500～1 000 μL)，刮落細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到Ep管；蛋白裂解溶液的配制：Laemmli樣品緩沖液950 μL，加入2-硫基乙醇50 μL，混勻；蛋白裂解：取收集的細(xì)胞，每 1X 細(xì)胞加入100 μL蛋白裂解液，反復(fù)吹打，使細(xì)胞充分裂解，樣本經(jīng)100金屬浴變性，高速離心，-20 ℃保存。Western blot聚丙烯酰胺凝膠電泳：安裝配好膠配制，定好分離膠位置，配制分離膠(12%)、濃縮膠，將已準(zhǔn)備好的蛋白樣品置于100金屬浴中煮沸變形5 min，高速離心，備用。將配置好的膠放入電泳槽里，拔去梳子，加入電泳緩沖液，使之沒(méi)過(guò)膠，用加樣器吸取10 μL樣品緩慢加入泳道，其中一空加預(yù)染的蛋白分子量Marker。將電泳裝置與電源相連，恒壓80 V 30 min，恒壓110 V。蛋白膜轉(zhuǎn)移：取出凝膠，去除濃縮膠成分，置于轉(zhuǎn)膜緩沖液中，輕輕晃5 min，剪下與凝膠相同大小的PVDF膜，按梳子的齒列順序用鉛筆輕輕標(biāo)記好泳道，甲醇中浸沒(méi)10 s，然后放入轉(zhuǎn)膜緩沖液中輕輕搖晃10 min。去除電泳轉(zhuǎn)移夾，按陰極(黑色)、海綿墊、濾紙(3～4層)、凝膠、PVDF膜、濾紙、海綿墊、陽(yáng)極(紅色)的順序做好,注意PVDF膜上的序號(hào)應(yīng)與膠的泳道相對(duì)應(yīng)，凝膠和PVDF膜之間不要有氣泡。放置好后置于轉(zhuǎn)移槽中，加入足量的轉(zhuǎn)膜緩沖液，使其完全浸泡在轉(zhuǎn)膜緩沖液中，并在轉(zhuǎn)移槽的四周用碎冰覆蓋，接上電源，恒流240 mA,2.5 h。轉(zhuǎn)膜結(jié)束，去除PDVF膜，TBS溶液洗3次(每次5 min)，凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色30 min，然后清水浸泡，觀測(cè)轉(zhuǎn)膜的效率。免疫雜交：將洗好的PDVF膜置于塑料盒中，加入適量的5%脫脂牛奶，置于搖床輕輕搖晃2 h。倒去封閉液，用TBS/T溶液洗3次(每次10 min)將膜置于封口袋，注意此過(guò)程戴手套，且盡量不用手接觸PDVF膜，加入牛奶稀釋的(濃度1∶1 000)的一抗，封口后置于搖床上室溫緩慢搖晃孵育4～6 h或置于4 ℃過(guò)夜。將PDVF膜置于塑料盒中，TBS/T溶液洗3次，10 min。將膜置于封口袋，加入牛奶稀釋的(濃度1∶5 000)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗(山羊抗兔)，室溫緩慢搖晃2 h。將PDVF膜置于塑料盒中，用TBS/T溶液洗3次(每次10 min)?；瘜W(xué)發(fā)光法顯帶：配制ECL顯色液配制，將顯色液均勻地滴在PVDF膜上，使顯色液與膜充分反應(yīng)。將PVDF膜置于Bio-Rad凝膠成像儀成像。

1.6 評(píng)價(jià)方法

免疫組化結(jié)果評(píng)價(jià)方法：觀察細(xì)胞染色強(qiáng)度A及陽(yáng)性細(xì)胞率B。染色強(qiáng)度A得分方法：0(陰性)，1(弱陽(yáng)性，輕度黃色，棕黃色顆粒)，2(中度陽(yáng)性，棕黃色顆粒)，3(強(qiáng)陽(yáng)性，棕褐色)。陽(yáng)性細(xì)胞率B得分計(jì)分方法：0計(jì)為0分，≤25%計(jì)為1分，25%～50%計(jì)為2分，≥51%計(jì)為3分。AXB得分計(jì)為總得分0～9分，總得分0分計(jì)為陰性，1～2分計(jì)為弱陽(yáng)性，3～8分計(jì)為中度陽(yáng)性，9分計(jì)為強(qiáng)陽(yáng)性。

Western blot蛋白印記技術(shù)結(jié)果評(píng)價(jià)方法：利用Quantity one分析軟件，在考慮到內(nèi)參蛋白的灰度值后，對(duì)目的條帶的灰度值進(jìn)行分析比較。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 OA軟骨的HE及甲苯胺藍(lán)染色

OA軟骨HE染色，關(guān)節(jié)軟骨表層粗糙，軟骨細(xì)胞數(shù)量減少，軟骨細(xì)胞固縮，排列紊亂，放射層部分軟骨細(xì)胞集簇成團(tuán)，軟骨基質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)空的軟骨陷窩，基質(zhì)染色深淺不一。OA軟骨甲苯胺藍(lán)染色，表面不整齊，排列紊亂染色深淺不一，放射層顏色較正常軟骨組織淺。

2.2 Notch1、Notch3、Jagged-1、Jagged-2、HES5的表達(dá)

在正常軟骨細(xì)胞組中，Notch-1呈弱陽(yáng)性表達(dá)；Jagged-1、Notch-3呈陰性表達(dá)；HES5、Jagged-2有表達(dá)，但是很不明顯(圖1)。在OA軟骨細(xì)胞組中，Notch1、HES5呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；Jagged-1、Jagged-2呈中度陽(yáng)性表達(dá)；Notch-3呈弱陽(yáng)性表達(dá)(圖2)。在DAPT組軟骨細(xì)胞中，Notch-1呈弱陽(yáng)性表達(dá)，與OA組比較Notch-1表達(dá)量明顯下調(diào)；Jagged-1仍呈中度陽(yáng)性表達(dá)，較OA組染色變淺，表達(dá)量下調(diào)；Jagged-2呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，較OA組表達(dá)情況可能有上調(diào)或者不變；HES5仍呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，與OA組比較，HES5表達(dá)量下調(diào)；Notch-3仍呈弱陽(yáng)性表達(dá)，較OA表達(dá)量下調(diào)(圖3)。

在DLL組軟骨細(xì)胞中，Notch-1染色深度明顯加強(qiáng)，呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，與OA組比較Notch-1表達(dá)量明顯上調(diào)；Jagged-1呈中度陽(yáng)性表達(dá)，與OA組比較，Jagged-1表達(dá)量無(wú)明顯變化；Jagged-2較OA組比較，染色明顯加深，呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，表達(dá)上調(diào)；HES5仍呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，與OA組比較，染色變深，HES5表達(dá)上調(diào)；Notch-3仍呈弱陽(yáng)性表達(dá)，與OA組比較Notch-3表達(dá)量無(wú)明顯變化(圖4)。

2.3 Western blot蛋白質(zhì)印跡

免疫組化實(shí)驗(yàn)完成后，下一步Western blot技術(shù)半定量檢測(cè)OA軟骨細(xì)胞中Notch-1、Jagged-1、Jagged-2、HES5、Notch-3的表達(dá)情況。Nocth-1表達(dá)量：DLL組>OA組>DAPT組，OA軟骨細(xì)胞中Notch-1大量表達(dá)，重組人Delta4蛋白干預(yù)后，Notch-1表達(dá)量顯著上調(diào)，γ-分泌酶抑制劑DAPT干預(yù)后，Notch-1表達(dá)量明顯下調(diào)，表達(dá)情況的變化與免疫組化結(jié)果類似。Jagged-1在DLL組以及OA組反應(yīng)帶著色相近，在DAPT組略有變淺并模糊，表明Jagged-1在OA軟骨中大量表達(dá)，重組人Delta4蛋白干預(yù)后，Jagged-1表達(dá)含量未出現(xiàn)明顯的下調(diào)或上調(diào)，γ-分泌酶抑制劑DAPT干預(yù)后，Jagged-1表達(dá)量有下調(diào)，這與免疫組化結(jié)果有相近之處。Jagged-2在3個(gè)組別中的反應(yīng)條帶未出現(xiàn)明顯大的差異變化，免疫組化結(jié)果顯示在OA軟骨細(xì)胞組、DAPT組、DLL組中均成強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，Western blot檢查結(jié)果與免疫組化結(jié)果基本相似。HES5表達(dá)量：DLL組>OA組>DAPT組，OA軟骨細(xì)胞中HES5存在大量表達(dá)，重組人Delta4蛋白干預(yù)后，HES5表達(dá)量上調(diào)，γ-分泌酶抑制劑DAPT干預(yù)后，HES5下調(diào)，DAPT抑制HES5的表達(dá)。Notch-3的三個(gè)反應(yīng)條帶，PBS組與DLL組著色均模糊無(wú)明顯差別，說(shuō)明Notch-3在OA軟骨細(xì)胞以及DLL干預(yù)后，表達(dá)量無(wú)明顯變化，DAPT組無(wú)反應(yīng)條帶的出現(xiàn)，推測(cè)使用γ-分泌酶抑制劑DAPT干預(yù)，Notch-3明顯下調(diào)，與免疫組化結(jié)果相似(見(jiàn)圖5)。

a：Notch-1；b：Jagged-1；c：Jagged-2；d：HES5；e：Notch-3

a：Notch-1；b：Jagged-1；c：Jagged-2；d：HES5；e：Notch-3

a：Notch-1；b：Jagged-1；c：Jagged-2；d：HES5；e：Notch-3

圖5 Western blot蛋白印跡

3 討論

原發(fā)性O(shè)A的病因不明，發(fā)病與年齡、性別、職業(yè)、種族、肥胖、遺傳等多種因素有關(guān)[4,7]。OA發(fā)病機(jī)制目前尚不明確，多種信號(hào)通路、基因、細(xì)胞因子、趨化因子、蛋白酶等參與OA的病變過(guò)程[8]，在軟骨基質(zhì)降解過(guò)程中存在著多種信號(hào)通路、基因、蛋白酶、細(xì)胞因子等生物學(xué)因素的參與。Notch信號(hào)通路在多種動(dòng)物及人軟骨發(fā)生、發(fā)育過(guò)程中表達(dá)并起著十分重要的作用[9]。Notch信號(hào)通路參與軟骨的發(fā)生、發(fā)育，與軟骨細(xì)胞的增殖、分化、凋亡密切相關(guān)[1,2,10-11]。Notch信號(hào)通路在OA軟骨中的表達(dá)水平變化[6]，說(shuō)明Notch信號(hào)通路可能密切參與OA的病變過(guò)程。既往報(bào)道顯示Notch信號(hào)通路在對(duì)軟骨基質(zhì)的合成代謝和分解代謝都起著重要作用[10]。Mirando等[11]和Liu等[12]的研究均顯示，丟失了Notch信號(hào)通路的關(guān)節(jié)軟骨表現(xiàn)出類似于OA的病理過(guò)程，提示Notch信號(hào)通路在關(guān)節(jié)軟骨的表型維持上是必不可少的。Notch信號(hào)通路作用十分廣泛，除了經(jīng)典的DNA結(jié)合蛋白(C-promoter-binding factor-1，CBF1)依賴的信號(hào)傳導(dǎo)途徑外，還存在獨(dú)立CBF1的Notch信號(hào)傳導(dǎo)通路[13-14]。研究表明Notch同時(shí)抑制DLX4基因的表達(dá)和促進(jìn)TNFRSF10C的表達(dá)，而DLX4抑制細(xì)胞凋亡，TNFRSF10C促進(jìn)細(xì)胞凋亡[5]。OA中軟骨集簇細(xì)胞中較多細(xì)胞Notch表達(dá)陽(yáng)性[15]。還有學(xué)者認(rèn)為Notch信號(hào)高表達(dá)可能是軟骨細(xì)胞表型改變的結(jié)果[5,15-16]。本組結(jié)果發(fā)現(xiàn)Notch信號(hào)通路表達(dá)水平在OA中發(fā)生變化，軟骨細(xì)胞表型改變，Notch-1、Jagged-1、Jagged-2、HES5大量表達(dá)。γ-分泌酶抑制劑DAPT干預(yù)Notch信號(hào)通路后，抑制OA軟骨細(xì)胞中Notch-1、HES5、Jagged-1、Notch-3的表達(dá)，對(duì)Jagged-2的表達(dá)作用不明顯。重組人Delta4蛋白干預(yù)Notch信號(hào)通路后，促進(jìn)Notch-1、Jagged-2、HES5的表達(dá)增加，對(duì)Jagged-1、Notch-3作用不太明顯。

Karlsson等[5]發(fā)現(xiàn)Notch-1、Jagged-1和HES5在OA軟骨中表達(dá)范圍較正常軟骨中的表達(dá)范圍明顯擴(kuò)大。Notch1陽(yáng)性率與OA軟骨Outerbridge分級(jí)相關(guān)，隨著軟骨退變的加重，淺層及中層軟骨細(xì)胞Notch1陽(yáng)性率增高，深層軟骨細(xì)胞Notch1陽(yáng)性率降低。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)與OA軟骨細(xì)胞HES5表達(dá)呈正相關(guān)，阻斷Notch信號(hào)可以下調(diào)MMP13的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)γ-分泌酶抑制劑DAPT可抑制OA軟骨細(xì)胞中HES5的表達(dá)，提示DAPT可通過(guò)MMP13途徑改變軟骨基質(zhì)代謝。Karlsson等[17]又通過(guò)軟骨培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)Notch-1、Notch-2、Notch-3、Jagged-1、Jagged-2、Delta-1和Delta4在單層培養(yǎng)中表達(dá)。三維培養(yǎng)中Notch-1、Notch-2、Notch-3、Jagged-1、Delta-1和HES5表達(dá)明顯減少，并且無(wú)明確定位表達(dá)現(xiàn)象。Notch-2和Delta4在前7 d表達(dá)無(wú)明顯下降，且在7～14 d時(shí)升高。最近一項(xiàng)研究同樣顯示Notch信號(hào)通路的另一重要配體HES1可以誘導(dǎo)MMP13等分解代謝因子[13]。Liu等[18]的實(shí)驗(yàn)證實(shí)Notch-1可分別于體內(nèi)和體外獨(dú)立激活包括IL-6在內(nèi)的多種炎性因子參與OA病理過(guò)程。本次實(shí)驗(yàn)的DAPT與DLL均可對(duì)OA軟骨中的Notch-1產(chǎn)生明顯的作用，可能為潛在的治療藥物。

其他細(xì)胞因子也對(duì)Notch信號(hào)通路起調(diào)節(jié)作用，例如IL-1β和TNF-α抑制正常及OA軟骨細(xì)胞Notch-3、Jagged-1、HES5的表達(dá)，其中IL-1β輕度抑制其表達(dá)，TNF-α明顯抑制Notch-1表達(dá)。IL-1β明顯增加Delta4的表達(dá)，TNF-α只輕度增加Delta4的表達(dá)[5]。本組結(jié)果顯示，γ-分泌酶抑制劑DAPT能抑制Notch信號(hào)通路，Delta4蛋白能激動(dòng)Notch信號(hào)通路，對(duì)軟骨細(xì)胞基質(zhì)代謝產(chǎn)生重要作用。Notch信號(hào)通路對(duì)OA的病理過(guò)程的影響十分復(fù)雜，具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

綜上所述，Notch信號(hào)通路與OA軟骨代謝密切相關(guān)，Notch信號(hào)通路可能對(duì)OA軟骨細(xì)胞基質(zhì)合成具有重要作用，弄清Notch信號(hào)通路作用機(jī)制，能為Notch信號(hào)的調(diào)節(jié)提供理論依據(jù)，有利于通過(guò)Notch信號(hào)通路的調(diào)控改善OA軟骨細(xì)胞的代謝，減輕或延緩OA病變進(jìn)展，為探索早期骨關(guān)節(jié)炎藥物治療提供理論依據(jù)。

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