生白術(shù)化學(xué)成分研究△

李瀅，楊秀偉*

(1.北京大學(xué) 天然藥物及仿生藥物國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100191；2.北京大學(xué) 藥學(xué)院 天然藥物學(xué)系，北京 100191)

傳統(tǒng)中藥白術(shù)(Atractylodis Macrocephalae Rhizoma)系菊科植物白術(shù)AtractylodesmacrocephalaKoidz.的干燥根莖，《神農(nóng)本草經(jīng)》列為上品，謂之具有健脾益氣、燥濕利水、止汗安胎之功效。鑒于化學(xué)成分是中藥藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)[1]，前文我們報(bào)道了白術(shù)揮發(fā)油成分的GC-MS分析[2]、對鼠性巨噬細(xì)胞一氧化氮生成具有抑制活性的多炔類成分[3]，文獻(xiàn)報(bào)道了白術(shù)的非揮發(fā)性化學(xué)成分研究[4-5]，本文繼續(xù)報(bào)道中藥白術(shù)的物質(zhì)基礎(chǔ)，分離到9個(gè)化合物，分別鑒定為蒼術(shù)酮(1)、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ(2)、雙白術(shù)內(nèi)酯(3)、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ(4)、白術(shù)內(nèi)酰胺(5)、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ(6)、4R，15-環(huán)氧白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ(7)、4R，15-環(huán)氧-8β-羥基白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ(8)和8β，9α-二羥基白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ(9)。其中，化合物7為新的天然產(chǎn)物，化合物9為首次從中藥白術(shù)中分離鑒定，豐富了白術(shù)中化學(xué)結(jié)構(gòu)的多樣性。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Autopol Ⅲ旋光測定儀(Rudolph Research Analytical，F(xiàn)landers，NJ，USA)，甲醇為溶劑；Nexus-470 FTIR型紅外光譜儀(Thermo Nicolet Inc.，Madison，WI，USA)，KBr壓片；Bruker AV Ⅲ 400型核磁共振波譜儀(Bruker BioSpin AG Facilities，F(xiàn)?llanden，Switzerland)，四甲基硅烷為內(nèi)標(biāo)；Finnigan TRACE 2000 GC-MS質(zhì)譜儀(EI-MS，Thermo Finnigan，San Jose，CA，USA)；LabTech半制備型高效液相色譜(SP-HPLC)儀系統(tǒng)，配置LC P600型泵，UV600 UV-vis型檢測器，Labtech Chrom software數(shù)據(jù)處理工作站；Phenomenex Luna 10 C18(2)色譜柱(250 mm×21.2 mm，10 μm)(Phenomenex Inc.，Torrance，CA，USA)；柱色譜硅膠(200～300目，青島海洋化工廠)；GF254薄層色譜(TLC)硅膠板分別購自青島海洋化工廠和Merck公司(Darmstadt，Germany)。分析純環(huán)己烷、石油醚、乙酸乙酯、甲醇等(北京化工廠)。

1.2 材料

生品白術(shù)于2010年10月采自浙江省磐安縣，經(jīng)北京大學(xué)藥學(xué)院楊秀偉教授鑒定為白術(shù)AtractylodesmacrocephalaKoidz.的根莖；為《中華人民共和國藥典》規(guī)定的正品。憑證標(biāo)本(No.201010SBZ)存放于北京大學(xué)天然藥物及仿生藥物國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

稱取生白術(shù)干燥藥材9 kg，粉碎成粗粉后用環(huán)己烷進(jìn)行加熱回流提取，共提取4次，每次1.5 h；合并提取液，過濾后減壓回收溶劑，得浸膏約185 g(收率為2.06%)。將環(huán)己烷提取物進(jìn)行硅膠柱色譜，石油醚、石油醚-乙酸乙酯、乙酸乙酯進(jìn)行梯度洗脫，TLC檢識(shí)引導(dǎo)合并相同或類似的流分，得到6個(gè)組分Fr.1～6。Fr.2為無色油狀物，置于低溫冰箱中析出無色冰晶化合物1(13 g)。Fr.3經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯(20∶1)為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，再經(jīng)重結(jié)晶得到化合物2(350 mg)和3(15 mg)。Fr.4經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚-乙酸乙酯(10∶1～5∶1)梯度洗脫，重結(jié)晶得到化合物4(330 mg)和5(11 mg)。Fr.5經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜以及反相高效液相制備色譜分離(60%甲醇-水為流動(dòng)相)，分別得到化合物6(1.2 g)、7(3 mg)、8(5 mg)和9(8 mg)。

3 化合物結(jié)構(gòu)鑒定

化合物5：白色粉末(甲醇)；EI-MSm/z229[M]+。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：7.45(1H，s，N-H)，2.04(1H，ddd，J=13.4，13.4，3.5 Hz，Ha-1)，2.36(1H，m，Hb-1)，1.62(2H，m，H-2)，1.61(1H，m，Ha-3)，2.35(1H，dd，J=11.0，2.5 Hz，Hb-3)，1.58(1H，dd，J=13.5，4.1 Hz，Hα-5)，2.46(1H，dd，J=14.2，13.5 Hz，Hβ-6)，2.63(1H，dd，J=14.2，4.1 Hz，Hα-6)，5.43(1H，s，H-9)，1.86(3H，s，H-13)，0.91(3H，s，H-14)，4.63(1H，brs，Ha-15)，4.89(1H，brs，Hb-15)；13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ：39.6(C-1)，22.5(C-2)，36.3(C-3)，148.7(C-4)，49.4(C-5)，23.3(C-6)，135.5(C-7)，141.8(C-8)，120.9(C-9)，38.3(C-10)，124.9(C-11)，173.5(C-12)，8.2(C-13)，18.7(C-14)，107.2(C-15)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的一致[5，13]，故鑒定化合物5為白術(shù)內(nèi)酰胺(atractylenolactam)。

4 結(jié)果與討論

本文從傳統(tǒng)中藥白術(shù)的生品中分離鑒定了9個(gè)化合物，均為桉烷型倍半萜，為白術(shù)的特征性化學(xué)成分結(jié)構(gòu)類型之一。9個(gè)化合物中，4R，15-環(huán)氧白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ(4R，15-epoxylatractylenolide Ⅱ，7)曾從白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的大鼠肝臟微粒體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中分離鑒定[15]，因此是新的天然產(chǎn)物；8β，9α-二羥基白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ(8β，9α-dihydroxylatractylenolide Ⅱ，9)曾從TrattinickiarhoifoliaWilld.[16]和草珊瑚(Sarcandraglabra(Thunb.)Nakai)的全草[17]分離鑒定，本文為首次從白術(shù)中分離鑒定。本文的這些成果豐富了白術(shù)中化學(xué)結(jié)構(gòu)的多樣性。已有文獻(xiàn)報(bào)道，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、4R，15-環(huán)氧-8β-羥基白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對催產(chǎn)素和乙酰膽堿所致大鼠子宮痙攣具有抑制作用，其作用機(jī)制與抑制膽堿系統(tǒng)和鈣流有關(guān)[18]；白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ和Ⅲ有抗過度陰道出血和抗高血脂作用[19]；白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ具有抗炎作用[12]。這些研究結(jié)果提示白術(shù)中的桉烷型倍半萜可能是白術(shù)的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)之一，是研制白術(shù)現(xiàn)代中藥的靶物質(zhì)。

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