胃癌中CXCR4與VEGFR2的表達及其相關性研究

趙琦琦，孫秀梅（濰坊醫(yī)學院，山東濰坊261000）

胃癌是全球范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，我國是胃癌高發(fā)區(qū)，胃癌發(fā)病率及病死率為世界平均水平的2倍多，手術為目前的主要治療手段，但患者預后不佳[1?2]。因此，尋找精確的腫瘤標志物，對早期胃癌患者進行篩選且預測預后十分重要，也可為生物靶向治療提供新的治療靶點，這些標志物將有助于進一步實施個體化精確治療。趨化因子受體4（CXCR4）是7次跨膜G蛋白偶聯(lián)受體，是趨化因子12（CXCL12）的特異性配體，CXCL12/CXCR4信號通路參與了胚胎發(fā)育、器官發(fā)生、B細胞成熟、造血干/祖細胞歸巢過程等，在腫瘤生長、浸潤、血管新生、器官特異性轉(zhuǎn)移及自身免疫中發(fā)揮著重要作用[3?5]。有研究發(fā)現(xiàn)，CXCL12/CXCR4 信號通路參與了調(diào)控乳腺癌、非小細胞肺癌、結直腸癌、胰腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤等多種腫瘤的增殖、浸潤及器官特異性轉(zhuǎn)移，CXCR4高表達與淋巴結轉(zhuǎn)移密切相關，其與腫瘤的器官特異性轉(zhuǎn)移的關系也是當今研究的熱點，然而其在胃癌中的表達尚無明確結論[6?7]。血管內(nèi)皮生長因子受體2（VEGFR2）是一種酪氨酸激酶型受體，在腫瘤血管的新生過程中具有重要作用，為腫瘤轉(zhuǎn)移提供了通道，與腫瘤分期、預后密切相關，針對其介導的信號通路為靶點的靶向治療，是近年來抗腫瘤血管新生治療的研究熱點[8]。本研究應用免疫組織化學（免疫組化）的方法，利用組織芯片技術，通過檢測胃癌組織中CXCR4、VEGFR2蛋白表達的差異，分析其與臨床病理特征的關系，以及探索二者之間的聯(lián)系，旨在為胃癌的臨床治療與監(jiān)測提供新的位點。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 一般資料 選取2012年1月至2015年12月濰坊醫(yī)學院附屬醫(yī)院行胃癌手術的術后標本蠟塊35例，其中男28例，女7例；年齡38～79歲，中位年齡60歲；管狀腺癌29例，黏液腺癌3例，腺癌（部分印戒細胞癌）3例；低分化腺癌23例，高中分化腺癌12例。TNM分期（采用胃癌美國癌癥聯(lián)合會指南第7版標準）：Ⅰ期6例，Ⅱ期10例，Ⅲ期19例。選取上海芯超組織芯片補充病例75例，其中男55例，女20例；年齡40～87歲，中位年齡69歲；管狀腺癌73例，黏液腺癌1例，腺癌（部分印戒細胞癌）1例；低分化腺癌52例，高中分化腺癌23例。TNM分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期31例，Ⅲ期27例，Ⅳ期10例。選取距胃癌組織5 cm的正常胃組織75例。所有納入病例術前均未接受過放、化療，免疫及中醫(yī)藥治療。

1.1.2 試劑 鼠抗人VEGFR2單克隆抗體、兔抗人CX?CR4多克隆抗體均購自武漢博士德生物工程有限公司，PV?9000免疫組化試劑盒、Harris蘇木素染液、濃縮型DAB試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司，乙二胺四乙酸抗原修復液購自北京索萊寶科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 采用PV?9000二步法免疫組化染色，CXCR4、VEGFR2 切片均經(jīng)乙二胺四乙酸（pH=8.0）抗原修復。

1.2.2 免疫組化結果判定 CXCR4、VEGFR2均以出現(xiàn)細胞膜或細胞質(zhì)棕黃色染色顆粒為陽性染色，于顯微鏡下觀察染色并進行評分：顯微鏡（400×）視野下隨機選取5個有代表性的不同區(qū)域，依照陽性細胞比例：＜5%、5%～＜25%、25%～＜50%、50%～＜75%、≥75% 分別計0、1、2、3、4 分；依照顯色強度：未著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別計0、1、2、3分；每個視野評分由陽性細胞比例和顯色強度項決定。將2項評分相乘計算該視野的最終評分，選取的5個視野評分的平均值為最后評分。該切片按分值評為4個等級：0～2分為陰性表達，3～5分為弱陽性表達，6～8分為陽性表達，＞8分為強陽性表達[9]。

1.3 統(tǒng)計學處理 應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，多組間比較采用Kruskal?Wallis非參數(shù)檢驗，兩組間比較采用Mann?WhitneyU非參數(shù)檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關分析；檢驗水準：α=0.05。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 CXCR4、VEGFR2在胃癌組織中的表達 細胞膜和細胞質(zhì)均可見CXCR4陽性表達，陽性表達率為87.3%（96/110）；細胞膜和細胞質(zhì)均可見VEGFR2陽性表達，陽性表達率為 91.8%（101/110）；CXCR4、VEGFR2在胃癌組織中的表達明顯高于正常胃組織。見圖1。胃癌組織中CXCR4、VEGFR2表達與不同臨床病理特征的關系見圖2、3。

圖1 胃癌組織與正常胃黏膜組織中CXCR4、VEGFR2表達比較（免疫組化，100×，50 μm）

圖2 胃癌組織中CXCR4表達與不同臨床病理特征的關系

圖3 胃癌組織中VEGFR2表達與不同臨床病理特征的關系

2.1.1 胃癌組織中CXCR4的表達 淋巴結轉(zhuǎn)移陽性胃癌組織中CXCR4陽性表達率高達93.2%（69/74），明顯高于無淋巴結轉(zhuǎn)移者[69.4%（25/36）]，有無淋巴結轉(zhuǎn)移胃癌組織中CXCR4蛋白表達比較，差異有統(tǒng)計學意義（Z=3.050，P=0.002）；在Ⅲ、Ⅳ期胃癌組織中 CXCR4陽性表達率[96.4%（54/56）]明顯高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌組織[77.8%（42/54）]，不同臨床分期胃癌組織中CXCR4表達比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=8.312，P=0.04）；胃癌組織中CXCR4表達與有無淋巴結轉(zhuǎn)移及臨床分期有關（r=0.318，P=0.001）。但不同年齡、性別、病理分化程度腫瘤浸潤深度胃癌組織中CXCR4表達比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

2.1.2 胃癌組織中VEGFR2的表達 腫瘤浸潤深度較大胃癌組織中VEGFR2蛋白的強陽性表達率[23.5%（20/85）]明顯高于浸潤深度較小者[12.0%（3/25）]，不同腫瘤浸潤深度胃癌組織中VEGFR2蛋白表達比較，差異有統(tǒng)計學意義（Z=2.180，P=0.029）；淋巴結轉(zhuǎn)移陽性胃癌組織中VEGFR2蛋白的強陽性表達率[24.3%（18/74）]明顯高于無淋巴結轉(zhuǎn)移[13.9%（5/36）]，有無淋巴結轉(zhuǎn)移胃癌組織中VEGFR2蛋白表達比較，差異有統(tǒng)計學意義（Z=3.050，P=0.002）；Ⅲ、Ⅳ期胃癌組織中 VEGFR2陽性表達率[23.2%（13/56）]明顯高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌組織[18.5%（10/54）]，不同臨床分期胃癌組織中VEGFR2蛋白表達比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=8.586，P=0.035）。胃癌組織中VEGFR2蛋白表達與腫瘤浸潤深度、有無淋巴結轉(zhuǎn)移及臨床分期有關（r=0.236，P=0.013）。但不同年齡、性別、病理分化程度胃癌組織中VEGFR2蛋白表達比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

2.2 胃癌組織中CXCR4和VEGFR2表達的相關性胃癌組織中CXCR4蛋白表達與VEGFR2蛋白表達強度呈正相關（r=0.475，P=0.000）。見表 1。

表1 胃癌組織中CXCR4和VEGFR2表達的相關性（n）

3 討 論

既往研究對CXCL12/CXCR4生物軸是否與淋巴結轉(zhuǎn)移相關仍存在爭議[10?11]。本研究結果顯示，CXCR4陽性表達率與腫瘤淋巴結轉(zhuǎn)移呈正相關（P＜0.05），表明CXCR4高表達腫瘤組織與淋巴結轉(zhuǎn)移密切相關，其與腫瘤的器官特異性轉(zhuǎn)移的關系也是當今研究的熱點，以CXCR4為靶點而阻斷其信號傳導通路成為胃癌治療的新方向；CXCL12類似物CTCE?9908與CXCR4阻斷劑AMD3100已批準用于骨肉瘤及白血病患者的治療[12]。有研究發(fā)現(xiàn)，CXCR4多肽類抑制劑TN14003可通過抑制乳腺腫瘤細胞遷移，進而抑制腫瘤轉(zhuǎn)移[13]。目前，以CXCR4/CXCL12生物軸為靶點在腫瘤的治療方面已取得了相當?shù)呐R床前數(shù)據(jù)的支持，隨著研究的深入，對其傳導通路的干預將進一步用于抑制腫瘤生長、轉(zhuǎn)移的臨床治療。

有研究發(fā)現(xiàn)，VEGFR2表達強度與有無淋巴結轉(zhuǎn)移及腫瘤浸潤深度有關，且與臨床分期呈正相關；腫瘤組織中VEGFR2表達上調(diào)在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移中具有關鍵性作用，以VEGFR2為位點阻斷信號通路，可成為治療胃癌的理想靶位[14]?，F(xiàn)已有多項針對VEGFR2為治療靶點阻斷信號通路的研究，主要通過干預內(nèi)皮細胞增殖、存活、遷移及血管通透性4種形式及其相應抑制劑，如阿柏西普（VEGF?Trap）、貝伐單抗（Bevacizumab）、阿昔替尼（AG?013736）、瓦他拉尼堿（vatalanib）、卡博替尼（Cabozantinib）、Foretinib、XL647 和 布 立 尼 布（Brivanib）進行治療，這些抑制劑已在美國食品藥品監(jiān)督管理局批準上市或正處于臨床研究中[15]。

綜上所述，胃癌組織中VEGFR2、CXCR4表達與腫瘤臨床分期呈正相關，與有無淋巴結轉(zhuǎn)移相關，以此為胃癌的治療提供了針對性靶點，為指導臨床精準醫(yī)學提供了理論依據(jù)；且VEGFR2、CXCR4在胃癌組織中的表達呈現(xiàn)出一致性，但其內(nèi)在相關性尚有待于進一步研究。

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