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    河南省雞源大腸桿菌的分離鑒定與耐藥性分析

    2018-04-25 02:02:26艾偉昌方忠意李金磊狄元冉高延玲吳志明劉振陽(yáng)
    畜牧與飼料科學(xué) 2018年1期
    關(guān)鍵詞:雞源瓊脂霉素

    艾偉昌 ,方忠意 ,李金磊 ,董 鵬 ,狄元冉 ,高延玲 ,吳志明 ,王 璐 ,劉振陽(yáng)

    (1.河南省野生動(dòng)物救護(hù)中心,河南 鄭州 450044;2.河南省獸藥飼料監(jiān)察所,河南 鄭州 450008;3.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院,河南 鄭州 450002)

    大腸桿菌(Escherichia coli)是人和動(dòng)物腸道內(nèi)的常駐菌,一些特殊血清型的大腸桿菌對(duì)人和動(dòng)物有致病性,尤其易引起嬰兒和幼畜(禽)嚴(yán)重腹瀉和敗血癥。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的致病性大腸桿菌可分為產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(ETEC)、產(chǎn)vero細(xì)胞毒素大腸桿菌(VTEC)、腸致病性大腸桿菌(EPEC)、腸侵襲性大腸桿菌 (EIEC)、腸出血性大腸桿菌(EHEC)和尿道致病性大腸桿菌(UPEC)等。

    雞大腸桿菌病是由大腸桿菌(E.coli)的某些致病性菌株所引起的多種疾病的總稱,也是對(duì)養(yǎng)雞業(yè)危害嚴(yán)重的一種細(xì)菌性疾病,臨床癥狀以及典型病理多變化,經(jīng)常同病毒性疾病和其他細(xì)菌性疾病并發(fā)感染,給養(yǎng)雞業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。臨床上主要應(yīng)用喹諾酮類、氨基糖苷類、β-內(nèi)酰胺類藥物對(duì)大腸桿菌病進(jìn)行預(yù)防和治療。近些年由于抗菌藥物的廣泛使用、不合理應(yīng)用,使得肉雞體內(nèi)大腸桿菌耐藥菌株出現(xiàn)與耐藥譜不斷擴(kuò)大[1],普遍存在的細(xì)菌耐藥性與抗菌藥物的選擇壓力有關(guān)[2],耐藥菌株的不斷出現(xiàn)已成為嚴(yán)重危害人類健康的公共衛(wèi)生問題。

    該研究對(duì)河南省4個(gè)地區(qū)的規(guī)?;B(yǎng)雞場(chǎng)抽取樣品進(jìn)行大腸桿菌分離、鑒定,隨后進(jìn)行耐藥性試驗(yàn)。初步掌握了河南省雞源大腸桿菌的耐藥情況,為進(jìn)一步防控雞源大腸桿菌病提供了重要的理論依據(jù)和臨床試驗(yàn)資料,為指導(dǎo)養(yǎng)殖戶臨床合理用藥提供了參考價(jià)值。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 樣品來(lái)源:2017年1—11月抽取鄭州、開封、焦作、許昌4個(gè)地區(qū)規(guī)?;u場(chǎng)肛門拭子樣品120批。具體抽樣數(shù)量見表1。

    表1 2017年樣品抽樣數(shù)量統(tǒng)計(jì)

    1.1.2 標(biāo)準(zhǔn)菌株:大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC 25922,購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

    1.1.3 培養(yǎng)基與試劑:一次性無(wú)菌采樣棒(BPW),購(gòu)自鄭州君越科萊特健康科技有限公司;麥康凱瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂、營(yíng)養(yǎng)瓊脂購(gòu)自北京路橋技術(shù)有限公司;革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定板購(gòu)自BD公司。

    1.1.4 儀器設(shè)備:低溫?fù)u床—數(shù)字SHKE6000-8CE(Thermo Fisher Scientific),細(xì)菌濁度儀(北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司);全自動(dòng)細(xì)菌鑒定/藥敏系統(tǒng)(BD PhoenixTM-100)。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 預(yù)增菌:將一次性無(wú)菌采樣棒采集的樣品盡快送到實(shí)驗(yàn)室,(36±1)℃培養(yǎng) 16~20 h, 同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。

    1.2.2 樣品的分離純化及鑒定:取預(yù)增菌菌液1~2環(huán),劃線于伊紅美藍(lán)瓊脂或麥康凱瓊脂上,(36±1)℃培養(yǎng)16~20 h,選取單個(gè)典型菌落進(jìn)行純化,最后將純化好的菌落劃線接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,采用全自動(dòng)細(xì)菌鑒定/藥敏系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。

    1.2.3 藥敏試驗(yàn):取營(yíng)養(yǎng)瓊脂上經(jīng)鑒定的大腸桿菌,用生理鹽水調(diào)制0.5 MCF,吸取10 μL加入到肉湯中,然后分別取100 μL加入到96孔藥敏板中,(36±1)℃培養(yǎng) 16~20 h,讀取藥敏試驗(yàn)結(jié)果。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 菌株分離結(jié)果

    經(jīng)預(yù)增菌、大腸桿菌選擇性培養(yǎng)基的分離純化,最后經(jīng)全自動(dòng)細(xì)菌鑒定/藥敏系統(tǒng)鑒定,河南地區(qū)規(guī)?;u場(chǎng)共分離大腸桿菌100株,總體分離率為83.3%(100/120)。其中鄭州地區(qū)分離率最高,為100%(30/30);焦作地區(qū)分離率次之,為90.0%(27/30);開封、許昌地區(qū)分離率相對(duì)較低,分別為 76.7%(23/30)和 66.7%(20/30)。 具體結(jié)果見表2。

    表2 2017年河南省雞場(chǎng)大腸桿菌分離情況

    2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

    分離的100株大腸桿菌,對(duì)四環(huán)素、氨芐西林、磺胺異噁唑、恩諾沙星、復(fù)方新諾明的耐藥率較高,分別為 88.0%、87.0%、86.0%、85.0%、81.0%;對(duì)氧氟沙星、強(qiáng)力霉素(多西環(huán)素)、氟苯尼考、頭孢噻呋中度耐藥,耐藥率在40.0%~80.0%;對(duì)多黏菌素E、阿莫西林/克拉維酸、頭孢他啶、美羅培南較為敏感,耐藥率均在20%以下。具體結(jié)果見圖1、表 3。

    2.3 不同地區(qū)耐藥結(jié)果

    從不同地區(qū)來(lái)看,耐藥結(jié)果存在明顯差異:鄭州地區(qū)雞源大腸桿菌對(duì)氨芐西林、恩諾沙星、氧氟沙星耐藥率明顯低于其他3個(gè)地區(qū),其中對(duì)氧氟沙星耐藥率低于其他3個(gè)地區(qū)45%以上;開封地區(qū)大腸桿菌對(duì)磺胺異噁唑、復(fù)方新諾明、氟苯尼考耐藥率明顯低于其他3個(gè)地區(qū),其中對(duì)磺胺異噁唑的耐藥率低于其他3個(gè)地區(qū)40%以上;焦作地區(qū)大腸桿菌對(duì)強(qiáng)力霉素、氟苯尼考、大觀霉素、慶大霉素、阿莫西林/克拉維酸、頭孢他啶的耐藥率明顯高于其他3個(gè)地區(qū),其中對(duì)大觀霉素的耐藥率高于其他3個(gè)地區(qū)45%以上;許昌地區(qū)大腸桿菌對(duì)強(qiáng)力霉素、頭孢噻呋的耐藥率明顯低于其他3個(gè)地區(qū);鄭州、焦作兩地區(qū)大腸桿菌對(duì)四環(huán)素、多黏菌素E的耐藥率明顯高于開封、許昌地區(qū)。具體結(jié)果見圖1、表3。

    2.4 多重耐藥結(jié)果

    總體來(lái)說(shuō),分離的100株雞源大腸桿菌多重耐藥嚴(yán)重,3耐及3耐以上菌株占84.0%,多重耐藥主要集中于3~6耐,占77.0%,其中3耐最多,占28.0%。其中,鄭州地區(qū)3耐及3耐以上菌株占83.3%,3耐最多,占26.7%;開封地區(qū)3耐及3耐以上菌株占78.3%,3耐最多,占30.4%;焦作地區(qū)3耐及 3耐以上菌株占 85.2%,3耐最多,占33.3%;許昌地區(qū)3耐及3耐以上菌株占90.0%,4耐最多,占40.0%;具體結(jié)果見圖2。

    3 結(jié)論與討論

    養(yǎng)殖戶用藥過程中選藥、劑量、療程不當(dāng),嚴(yán)重濫用藥物(不少養(yǎng)殖戶在未確定病因的情況下,大量使用不同種類的抗菌藥物)等行為均可導(dǎo)致耐藥菌株的產(chǎn)生。大多數(shù)雞場(chǎng)的大腸桿菌存在著廣泛的耐藥性,給藥物治療帶來(lái)很大的難度。

    圖1 2017年河南省雞源大腸桿菌對(duì)16種抗菌藥物的耐藥情況

    表3 2017年河南省規(guī)模雞場(chǎng)大腸桿菌耐藥情況 %

    圖2 2017年河南省雞場(chǎng)大腸桿菌多重耐藥結(jié)果

    該試驗(yàn)從河南省4個(gè)地區(qū)抽取樣品120批,共分離雞源大腸桿菌100株,分離率為83.3%。該結(jié)果比孫蓉蓉[3]等從發(fā)病水貂中分離大腸桿菌的分離率[為 35.7%(10/28)]要高,比孫剛?cè)?]等從豬雞糞便中分離大腸桿菌的分離率[為100%(15/15)]要低,表明不同動(dòng)物來(lái)源、不同采樣部位及動(dòng)物不同健康程度大腸桿菌的分離率存在差異。

    分離菌株對(duì)四環(huán)素、氨芐西林、磺胺異噁唑、恩諾沙星、復(fù)方新諾明的耐藥率均超過80%,對(duì)氧氟沙星、強(qiáng)力霉素(多西環(huán)素)、氟苯尼考、頭孢噻呋耐藥率在40%~80%,4個(gè)地區(qū)之間耐藥結(jié)果存在差異。該研究中雞源大腸桿菌對(duì)磺胺異噁唑、復(fù)方新諾明、多西環(huán)素、大觀霉素的耐藥率分別為86.0%、81.0%、66.0%和 39.0%,比寧昆等[5]的研究雞源大腸桿菌對(duì)磺胺異噁唑、復(fù)方新諾明、多西環(huán)素、大觀霉素的耐藥率 (分別為100%、91.7%、87.5%和70.8%)要低;而對(duì)恩諾沙星、頭孢噻呋耐藥率(分別為85.0%和54.0%)比其結(jié)果(58.3%和41.7%)要高。比張彬[6]等從腹瀉雞病料中分離的大腸桿菌對(duì)強(qiáng)力霉素的耐藥率(為91.0%)要低。該研究分離的大腸桿菌對(duì)慶大霉素的耐藥率為38.0%,比朱二勇[7]等從診斷為子宮內(nèi)膜炎的患牛中分離的大腸桿菌對(duì)慶大霉素的耐藥率 (為11.8%)要高;而對(duì)復(fù)方新諾明的耐藥率比其研究耐藥率(為95.9%)要低。該試驗(yàn)結(jié)果對(duì)四環(huán)素的耐藥率為88.0%,比蒲承君[8]等研究雞源大腸桿菌對(duì)四環(huán)素的耐藥率(為100%)要低,表明不同地區(qū)、不同用藥情況以及動(dòng)物健康狀況不同其耐藥結(jié)果也存在差異,該結(jié)果和肖利君[9]的研究結(jié)果一致。大腸桿菌在不同地區(qū)的耐藥性差異較大,在臨床應(yīng)用時(shí),要因地制宜,切勿亂用藥。

    從多重耐藥情況來(lái)看,河南省雞源大腸桿菌多重耐藥情況嚴(yán)重,3耐及3耐以上菌株占84.0%,該結(jié)果比植嬋萍[10]等的研究——有機(jī)農(nóng)場(chǎng)雞源大腸桿菌3重耐藥及以上所占比例為56.4%要高;同饒麗麗[11]等的研究屠宰前雞源大腸桿菌9重耐藥比例最高(為19.20%),存在差異,表明不同環(huán)境其用藥情況存在差異,大腸桿菌多重耐藥情況不同。

    從該試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看河南省雞源大腸桿菌的耐藥現(xiàn)象已相當(dāng)嚴(yán)重。在今后的養(yǎng)殖生產(chǎn)中應(yīng)加強(qiáng)消毒,加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,科學(xué)合理地使用抗生素,選用中草藥或生物制劑進(jìn)行治療,必要時(shí)進(jìn)行藥敏試驗(yàn),選擇敏感性藥物進(jìn)行針對(duì)性治療。同時(shí)注意交叉用藥和聯(lián)合用藥,逐步減少雞源大腸桿菌的耐藥性的產(chǎn)生。

    [1]王影,李欣南,韓鐫竹,等.某肉雞場(chǎng)雞源大腸桿菌耐藥性跟蹤檢測(cè)與分析 [J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2015,42(12):3329-3337.

    [2]王影,李欣南,韓鐫竹,等.大腸桿菌耐藥性產(chǎn)生與傳播機(jī)制研究現(xiàn)狀[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī),2016(1):32-37.

    [3]孫蓉蓉,鄒玲,劉文華,等.水貂大腸桿菌的分離鑒定及 藥 敏 試 驗(yàn) [J]. 安 徽 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) ,2015,43 (11):119,126.

    [4]孫剛?cè)?,敖光第.重慶一例豬源及雞源大腸桿菌的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)[J].四川畜牧獸醫(yī),2014(12):26-28.

    [5]寧昆,沈莉萍,王曉旭,等.上海市動(dòng)物源性大腸桿菌的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2016,33(9):23-26.

    [6]張彬,韓志霞,馬金玉,等.河南省部分地區(qū)雞大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性研究 [J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,44(2):127-131.

    [7]朱二勇,殷麗霞,曲立春,等.黑龍江雞西地區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌分離鑒定及耐藥性研究[J].畜牧與飼料科學(xué),2014,35(2):18-19.

    [8]蒲承君,呂明環(huán),曾鈺涵,等.雞、豬糞便源大腸桿菌對(duì)4種抗生素耐藥性的比較 [J].生態(tài)毒理學(xué)報(bào),2017,12(1):141-147.

    [9]肖利君.大腸埃希菌臨床感染的分布及耐藥性分析[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2011,18(2):345-347.

    [10]植嬋萍,郭小婷,姚旭,等.有機(jī)農(nóng)場(chǎng)雞、豬源大腸桿菌耐藥性研究[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2015,42(12):3351-3357.

    [11]饒麗麗,羅東妹,陳佩玲,等.屠宰前雞、豬源大腸桿菌耐藥性調(diào)查[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2014,41(7):225-229.

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