雙歧桿菌三聯(lián)活菌散對兒童輪狀病毒性腸炎患者腸道菌群及腸黏膜通透性的影響

蔡海芳

麗水市中心醫(yī)院 兒科，浙江 麗水 323000

輪狀病毒(rotavirus，RV)是引起兒童急性腹瀉的主要病原體之一，其病情相對較重，易發(fā)生電解質(zhì)酸堿平衡紊亂等各種并發(fā)癥，嚴(yán)重時可危及生命[1]。輪狀病毒性腸炎(rotavirus enteritis，RVE)的發(fā)病機制至今尚未闡明，腸道菌群紊亂及其引起的腸黏膜通透性改變在RVE發(fā)病中的作用越來越受到重視[2-3]。近年來研究發(fā)現(xiàn)微生態(tài)制劑輔助治療兒童RVE效果較好，但其對腸道菌群及腸黏膜通透性的影響鮮有報道[4]。本研究分析了雙歧桿菌三聯(lián)活菌散對兒童RVE患者腸道菌群及腸黏膜通透性的影響，并分析其療效。

1 對象與方法

1.1一般資料 選取94例RVE患兒，均為2016年1月至2017年8月于麗水市中心醫(yī)院兒科門診治療的病例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)與《兒科學(xué)》第6版中的診斷標(biāo)準(zhǔn)相符[5]；(2)大便ELISA法快速檢測RV抗原陽性；(3)年齡12個月～36個月。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴有重度脫水或合并嚴(yán)重并發(fā)癥患兒；(2)治療前2個月使用過抗生素和益生菌的患兒。全部入選病例采用隨機數(shù)字表分為兩組。兩組患兒性別、年齡、病程、大便頻率和脫水程度等基本情況差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

1.2治療方法 兩組患兒均予以調(diào)整飲食、補液、調(diào)節(jié)電解質(zhì)紊亂和酸堿失衡等治療。觀察組患兒加用雙歧桿菌三聯(lián)活菌散(上海信誼藥業(yè)有限公司，批號：20150927)1.0 g/次，3次/d，溫水沖服，兩組患兒療程均為72 h。觀察兩組患兒治療前后腸道菌群(雙歧桿菌、乳桿菌和大腸埃希菌)數(shù)量及腸黏膜通透性指標(biāo)[內(nèi)毒素(ETX)和D-乳酸]的變化，并比較其臨床療效。

1.3指標(biāo)檢測

1.3.1腸道菌群檢測 取3 g濕糞便樣品常規(guī)離心后洗滌，采用細菌DNA試劑盒(Sigma公司)提取濕糞便樣品中的細菌總DNA進行PCR擴增，擴增引物見表2。將糞便細菌DNA標(biāo)本和相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品進行PCR反應(yīng)，系統(tǒng)軟件自動計算出Ct值，并繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，使用Ct值與標(biāo)準(zhǔn)曲線定量測定乳桿菌、雙歧桿菌和大腸埃希菌數(shù)量。結(jié)果用每克糞便濕重中菌落數(shù)對數(shù)值表示(lgCFU/g)。

表1 兩組患兒一般資料比較

表2 腸道菌群擴增引物

1.3.2ETX和D-乳酸檢測 取患兒空腹靜脈血3～5 mL，3 000 r/min低溫離心10 min分離出上層血清，置于-70℃冰箱保存待檢。采用鱟試劑偶氮顯色基質(zhì)法(鱟試劑購自廈門市鱟試劑公司)測定血清 ETX水平，采用聯(lián)免疫吸附法(試劑盒購自南京建成科技公司)測定血清D-乳酸水平。

1.3.2療效評估標(biāo)準(zhǔn)[6]顯效：治療后患兒糞便性狀及大便次數(shù)基本恢復(fù)正常，全身癥狀完全消失。有效：治療后患兒大便次數(shù)減至<3次/d，糞便外觀性狀明顯好轉(zhuǎn)，全身癥狀基本消失。無效：未符合上述評估標(biāo)準(zhǔn)。除無效外其余均為總有效。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1腸道菌群數(shù)量對比 治療72 h后，觀察組患兒雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量明顯增加，大腸埃希菌數(shù)量明顯下降(P<0.05)，而對照組患兒治療前后差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療后，觀察組患兒雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量高于對照組，大腸埃希菌數(shù)量低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患兒腸道菌群數(shù)量對比

注：a：與同組治療前比較，t=2.43、2.38、2.31，P<0.05；b：與對照組治療后比較，t=2.37、2.34、2.27，P<0.05。

2.2血清ETX和D-乳酸水平對比 治療72 h后，兩組患兒血清ETX和D-乳酸水平明顯下降(P<0.05)，且觀察組下降幅度更大(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患兒血清ETX和D-乳酸水平對比

注：a：與同組治療前比較，t=2.41、2.37、3.38、3.42，P<0.05；b：與對照組治療后對比，t=2.34、2.41，P<0.05。

2.3療效分析 治療72 h后，觀察組患兒總有效率高于對照組(χ2=4.37，P<0.05)。見表3。

表3 兩組患兒療效比較[n(%)]

3 討 論

3.1兒童輪狀病毒腸炎患者腸道菌群和腸黏膜通透性情況[7-9]近年來研究已證實腸道菌群紊亂參與了RVE的發(fā)病過程。RV主要侵襲機體腸微絨毛柱狀上皮細胞使其發(fā)生空泡變性和壞死，出現(xiàn)吸收障礙和腹瀉；加上腸微絨毛上皮細胞受RV病毒入侵后，雙糖酶的分泌量明顯下降且其活性亦發(fā)生障礙，不能正常分解乳糖，使得腸腔滲透壓明顯增高而發(fā)生滲透性腹瀉，從而破壞了患兒腸道的厭氧環(huán)境，有利于需氧菌的繁殖。同時，益生菌生存的腸道微環(huán)境被破壞，使得患兒腸道內(nèi)雙歧桿菌、乳桿菌等益生菌數(shù)量減少，而大腸埃希菌、腸球菌等致病菌數(shù)量增加。腸道菌群的破壞，使得腸黏膜表面形成的“菌群屏障”受損，增加了腸黏膜通透性，進一步引起腸液的大量分泌，形成惡性循環(huán)。因此，糾正腸道菌群紊亂和降低腸黏膜的通透性是目前治療兒童RVE的新途徑。

3.2雙歧桿菌三聯(lián)活菌散對RVE患兒的作用 雙歧桿菌三聯(lián)活菌散口服后進入腸道，能直接粘附于腸壁并逐漸生長繁殖，不僅可直接補充腸道益生菌，還可競爭拮抗致病菌的生長，使得腸道微生態(tài)平衡逐漸恢復(fù)，并能保護與修復(fù)受損的腸黏膜，降低其通透性，促進水鈉重吸收，減輕腹瀉[10-11]。同時，能激活腸道的局部淋巴組織，增加腹腔內(nèi)單核巨噬細胞活性，穩(wěn)定腸黏膜免疫屏障，減輕腸黏膜炎癥反應(yīng)[12-14]。本研究顯示觀察組患兒治療72 h后腸道雙歧桿菌和乳桿菌數(shù)量上升，而大腸埃希菌數(shù)量明顯下降，且治療后雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量較對照組更高，大腸埃希菌數(shù)量較對照組更低；同時觀察組患兒血清ETX和D-乳酸水平下降幅度較對照組更大，臨床總有效率高于對照組。表明雙歧桿菌三聯(lián)活菌散治療兒童RVE的療效較佳，能增加雙歧桿菌、乳桿菌等有益菌的數(shù)量，減少大腸埃希菌等致病菌的數(shù)量，糾正并恢復(fù)被破壞的腸道菌群結(jié)構(gòu)，改善患兒腸道微生態(tài)，降低腸黏膜通透性，減少腸液的分泌滲出。雙歧桿菌三聯(lián)活菌散治療兒童RVE可能通過改善患兒腸道微生態(tài)，恢復(fù)腸道正常菌群，抑制RV病毒在腸道定植，保護其微絨毛上皮細胞免遭RV病毒入侵，降低腸黏膜通透性，保護與修復(fù)腸黏膜屏障功能，減少腸液的大量分泌，從而控制患兒的腹瀉達到治療的目的[15-17]。由于腸黏膜通透性直接測定較困難，本研究選擇血清ETX和D-乳酸水平間接評估腸黏膜通透性，可能存在一定的實驗誤差。

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