鼠李糖乳桿菌grx10降血脂效果初探

柳園，李晶晶，石磊，馬亞，胡雯

四川大學(xué)華西醫(yī)院 臨床營養(yǎng)科，四川 成都 610041

血脂異常(dyslipidemia)是指由于機(jī)體脂質(zhì)合成增加和/或血液中脂質(zhì)清除能力減弱而導(dǎo)致的一種代謝障礙性疾病。國內(nèi)外大量指南共識提出血脂異常是眾多心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，CVD已經(jīng)成為危害人類健康最為嚴(yán)重的疾病之一，針對心血管疾病防治的研究十分必要[1-5]。益生菌通過產(chǎn)生膽鹽水解酶、與膽固醇結(jié)合、粘附、轉(zhuǎn)化等機(jī)制調(diào)節(jié)腸道功能參與體內(nèi)膽固醇代謝，改善血脂水平，益生菌也成為了防治CVD的一種潛在手段[6-8]。本研究所使用的鼠李糖乳桿菌grx10(Lactobacillusrhamnosusgrx10，簡稱grx10)由我國自主篩選，其降血脂的健康效益已經(jīng)在體外實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物研究中得到了驗(yàn)證，目前尚未見人體的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[9]。因此，本課題擬采用隨機(jī)、雙盲、安慰劑對照研究，旨在觀察grx10對血脂水平的改善作用，為血脂代謝異常達(dá)到用藥指針前的非藥物干預(yù)及CVD防治提供新的思路。臨床試驗(yàn)注冊號為ChiCTR-IIR-15007384。

1 對象與方法

1.1受試者的選擇

1.1.1納入標(biāo)準(zhǔn) (1)年齡≥18歲；(2)參考《中國成人血脂異常防治指南2016版》，選擇血清膽固醇水平達(dá)到邊緣升高的低危、中危人群為本研究的受試對象，即血脂檢測總膽固醇(TC)為5.2～7.2 mmol/L，和(或)低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)為3.4～4.9 mmol/L；(3)簽訂知情同意書，自愿參加試驗(yàn)者。

1.1.2排除標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)益生菌代謝特點(diǎn)及生物醫(yī)學(xué)倫理要求，并依照ASCVD發(fā)病危險(xiǎn)分層[1]，排除可能被列為高危、極高危人群的因素，匯總排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)已診斷患有ASCVD、高血壓和/或糖尿病者；(2)BMI>28 kg/m2者；(3)過敏體質(zhì)，尤其乳制品過敏或不耐受者；(4)妊娠、哺乳期或更年期婦女；(5)具有早發(fā)缺血性心血管病家族史者，或合并有心、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病，精神病患者；(6)研究期間食用除本菌粉外的其他各種形式的含益生菌的食品或產(chǎn)品，如酸奶等；(7)研究期間服用抗生素者；(8)近2周曾服用調(diào)脂藥物，影響到對結(jié)果的判斷者；(9)患有消化系統(tǒng)疾病，如胃腸道感染、胃腸道潰瘍者；(10)住院的血脂異常者；(11)未按規(guī)定食用受試樣品，或資料不全，影響功效或安全性判斷者；(12)研究者認(rèn)為不適合參加本研究的其他志愿者。

1.2研究方法與內(nèi)容

1.2.1研究方法 將篩選出符合納入排除標(biāo)準(zhǔn)的受試對象，隨機(jī)分為對照組、低劑量組、高劑量組。對照組每日食用安慰劑(脫脂乳粉)10 g/d，低劑量組每日食用grx10粉劑4 g/d(活菌量為3.2×1010CFU/d)以及安慰劑6 g/d，高劑量組每日食用grx10粉劑10 g/d(8.0×1010CFU/d)。試驗(yàn)周期：2周洗脫期+6周干預(yù)期。所有納入對象在正式接受干預(yù)前需經(jīng)歷2周的洗脫期，要求不攝入任何含有益生菌的食品。在干預(yù)期間，也要求受試對象不攝入干預(yù)樣品之外的含有益生菌的產(chǎn)品。所有受試對象在入組前、干預(yù)期結(jié)束后均接受我院營養(yǎng)醫(yī)師的飲食調(diào)查；在入組前及試驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行血液指標(biāo)檢測。為保證研究對象的飲食及生活習(xí)慣在入組前后無差異，整個(gè)試驗(yàn)期間不為受試者提供飲食及生活方式建議。

受試對象所有血液采用全自動(dòng)生化檢測儀進(jìn)行檢測。營養(yǎng)師負(fù)責(zé)收集患者的飲食記錄結(jié)果。

1.2.2觀察指標(biāo) (1)基本信息：姓名、年齡、性別、教育程度、職業(yè)、身高、體重、吸煙、飲酒情況、體育活動(dòng)情況等；(2)應(yīng)用中國成人血脂異常防治指南推薦的高脂血癥患者膳食評價(jià)表評估膳食情況，評分總和<3分為合格，3～5分為輕度膳食不良，≥6分為嚴(yán)重膳食不良；(3)血清TC、LDL-C、HDL-C(高密度脂蛋白膽固醇)、TG(甘油三酯)檢測結(jié)果；(4)血常規(guī)、肝、腎功能等安全性指標(biāo)檢查及不良反應(yīng)監(jiān)測。

1.3質(zhì)量控制 研究者根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分配受試對象的入組情況，每位受試對象以編號來區(qū)分，不同組別的干預(yù)物以A、B、C區(qū)分，所有結(jié)果在試驗(yàn)結(jié)束后揭盲。采用雙人雙錄入法進(jìn)行數(shù)據(jù)錄入，錄入完畢后對數(shù)據(jù)庫進(jìn)行糾錯(cuò)。

2 結(jié) 果

2.1一般情況 招募符合納入排除標(biāo)準(zhǔn)70人，其中15人由于個(gè)人原因未能堅(jiān)持服用，6人因身體不適而中止試驗(yàn)，5人因干預(yù)中途使用降脂藥物或抗生素而中止試驗(yàn)。最終完成試驗(yàn)44人。其中高劑量組17人，低劑量組14人，安慰劑組13人；男14人，女30人；年齡為20～64歲，平均年齡(43.34±11.11)歲，均為原發(fā)性血脂升高者，不伴有其他慢性病。

2.2干預(yù)前組間基線情況比較 試驗(yàn)開始前三組志愿者組間性別、年齡、體重、BMI、吸煙率、飲酒率、體育活動(dòng)率、空腹血糖、血脂等比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

2.3干預(yù)后受試者基本情況組內(nèi)比較 對受試者的體重、BMI、吸煙率、飲酒率、體育活動(dòng)率、膳食得分進(jìn)行組內(nèi)比較，結(jié)果顯示除高劑量組體重及BMI干預(yù)后顯著降低外，其余指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1vs表2)。

表1 干預(yù)前三組研究對象組間基線情況比較

表2 干預(yù)結(jié)束后研究對象飲食、生活方式變化

注：a：與自身干預(yù)前比較。

2.4干預(yù)后血脂指標(biāo)變化 各組組內(nèi)干預(yù)前后比較：經(jīng)自身配對t檢驗(yàn)，與干預(yù)前相比，grx10高劑量干預(yù)組血清TC、TG、LDL-C顯著下降[TC(5.66±1.44)mmol/L，P=0.0138；TG(1.57±0.67)mmol/L，P=0.0091；LDL-C(2.98±1.18)mmol/L，P=0.0262]，HDL-C差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(1.81±0.77)mmol/L，P=0.0672]；低劑量組、安慰劑組組內(nèi)比較，干預(yù)前后血脂指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

干預(yù)后三組組間比較：將高、低劑量組干預(yù)后的血脂值分別與安慰劑組比較，t檢驗(yàn)顯示高劑量組干預(yù)后TG指標(biāo)顯著下降[(1.57±0.67)mmol/L，P=0.0306]，但TG改變差值及其余血脂指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

2.5安全性指標(biāo)及不良反應(yīng)監(jiān)測 干預(yù)過程中，對所有受試對象血常規(guī)、肝功能、腎功能、空腹血糖等指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測，干預(yù)前后上述指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討 論

本次隨機(jī)、雙盲、安慰劑對照試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過6周的干預(yù)，高劑量grx10組組內(nèi)前后對照TC、TG、LDL-C差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。將高低劑量組血脂變化分別與安慰劑組比較，發(fā)現(xiàn)組間血脂變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三組間的有關(guān)飲食、行為、生活方式指標(biāo)，如體重、BMI、吸煙率、飲酒率、體育活動(dòng)率、血脂異常膳食得分等差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 。綜上，研究結(jié)果顯示當(dāng)grx10達(dá)到較高劑量時(shí)可以降低血清TC、TG、LDL-C水平，但是尚不能說明grx10干預(yù)與安慰劑組的作用有差異。可能的原因有：

3.1疾病嚴(yán)重程度較低 本次研究旨在觀察grx10的單獨(dú)效應(yīng)，綜合生物醫(yī)學(xué)倫理要求，建議血脂水平達(dá)到邊緣升高的下限并且經(jīng)危險(xiǎn)度評定后ASCVD中、低危且未服藥人群參加本項(xiàng)目。Greany等[10]和Ivey等[11]的RCT研究觀察益生菌對健康人群血脂水平影響，疾病嚴(yán)重程度低可能是得到陰性結(jié)果的原因。Fuentes等[7]的開展的臨床試驗(yàn)得出結(jié)論，患者的TC水平越高，益生菌降低CVD風(fēng)險(xiǎn)的效果越好。由于臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)差異較大，Meta分析將不同研究中受試者的血脂基線進(jìn)行亞組分析，同樣指出益生菌對血脂TC較高人群的干預(yù)效果更明顯[12-13]。盡管如此，為了受試者的安全考慮，我們納入研究對象疾病嚴(yán)重程度較低，這可能影響了grx10的干預(yù)效果。

表3 干預(yù)后血脂指標(biāo)變化

注：a：組內(nèi)干預(yù)前后自身配對t檢驗(yàn)；b：高、低劑量組分別與安慰劑組比較。

3.2依從性較低，樣本量小 本次研究采用公共網(wǎng)絡(luò)平臺招募的形式納入受試人群，未能如期堅(jiān)持服用益生菌的人數(shù)較多，同時(shí)，受試人群血脂升高程度較低，隨著時(shí)間的推移研究對象對自己血脂水平的關(guān)注度下降，使得本研究失訪率較高。依從性是影響干預(yù)結(jié)果的因素之一。由于此次研究是grx10首次應(yīng)用于人體，我們的納入排除標(biāo)準(zhǔn)較為嚴(yán)格，限制了志愿者的入組，使得樣本量較小，未來仍然需要大樣本臨床試驗(yàn)支持益生菌的人體功效。

3.3飲食和生活方式等混雜因素較多 血脂水平異常的治療性生活方式改變包括控制體重、戒煙、限酒和堅(jiān)持規(guī)律的中等強(qiáng)度代謝運(yùn)動(dòng)[1]，無論是否使用調(diào)脂藥物，飲食治療和改善生活方式是血脂異常治療的基礎(chǔ)措施[14]。為控制這些混雜因素，本項(xiàng)目研究人員沒有給受試者提供相關(guān)建議，但從干預(yù)前后吸煙、飲酒率來看，研究對象沒有主動(dòng)做出改變；通過血脂異常者膳食得分量表的評價(jià)也可以看出，受試者沒有限制飲食中飽和脂肪含量較高，可能升高膽固醇的食物；體育活動(dòng)率在干預(yù)結(jié)束后出現(xiàn)下降，也進(jìn)一步說明受試者難以堅(jiān)持非藥物的治療方式，依從性不高。

3.4劑量及療程 目前對于益生菌的服用劑量尚無一個(gè)明確的標(biāo)準(zhǔn)。由于菌株特異性，不同的益生菌菌株、同一株益生菌不同劑量、不同干預(yù)周期或不同人群，對益生菌的效果相差影響很大。我國《益生菌類保健食品申報(bào)與審評規(guī)定》指出益生菌類食品保質(zhì)期內(nèi)的活菌數(shù)≥106CFU/mL(g)。大部分關(guān)于益生菌降血脂的RCT試驗(yàn)采用108～1010CFU/d的益生菌劑量，相關(guān)研究大都處于劑量摸索階段，故研究者多設(shè)置高、低劑量組來評估益生菌的效果。Sharafedtinov等[15]的RCT研究益生菌劑量達(dá)7.5×1012CFU/d，有可能我們目前所使用的干預(yù)劑量不是這一菌株作用于人體的最佳劑量。此外，益生菌與血脂的Meta分析指出多種菌株混合、干預(yù)周期長，比單一菌株、干預(yù)周期短降脂效果更好[12-13]，但我們同時(shí)需要考慮長時(shí)間使用可能發(fā)生的安全性問題[16]。

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