水產(chǎn)品中諾氟沙星、鹽酸環(huán)丙沙星、恩諾沙星殘留量測定的標(biāo)準(zhǔn)方法改進(jìn)研究

朱宗梅 汪葵陽 吳光洪

（江西省樂平市農(nóng)業(yè)局，江西樂平 333300）

1 試驗(yàn)原理

淡水樣品經(jīng)無水硫酸鈉脫水后由酸化乙腈提取，離心，取上清液加正己烷除脂。旋蒸提取液，流動相溶解定容，離心取上清液，經(jīng)微孔濾膜上高效液相熒光檢測器測定，外標(biāo)法定量。

2 試驗(yàn)儀器、設(shè)備和材料

高效液相色譜儀（島津LC-20AB），配熒光檢測器；高速組織搗碎機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、高速離心機(jī)、振蕩器，10 mL具塞帶刻度離心管、100 mL具蓋朔料離心管，150 mL三角燒瓶、100 mL分液漏斗、0.45 μm微孔濾膜及其他。

3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法

本試驗(yàn)以草魚（由江西省樂平市為民生態(tài)漁業(yè)養(yǎng)殖合作社提供）為樣品材料，分2組，Ⅰ組以農(nóng)業(yè)部783號公告-2-2006標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行前處理，Ⅱ組以改進(jìn)方法進(jìn)行前處理。兩組分別準(zhǔn)確稱取4份5.00 g糜狀魚肉，1個(gè)本底BD和3個(gè)平行A、B、C，3個(gè)平行樣同時(shí)添加0.02 mg/kg的鹽酸環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)樣品（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科監(jiān)制100 μg/mL，1 mL）。

3.1 Ⅰ組方法前處理 用三角燒瓶稱取4份樣品，依次加入30 g無水硫酸鈉（640 ℃灼燒4 h，以下同）和30 mL酸化乙腈（50%HCl/乙腈=125/1，以下同）后高速勻漿機(jī)勻漿，放入兩三粒玻璃珠置于120 r/min振蕩器15 min，再轉(zhuǎn)入離心管中4 500 r/min離心15 min，取上清液置于分液漏斗中。往殘?jiān)屑尤?0 mL酸化乙腈重復(fù)上述操作一次，上清液合并于分液漏斗中。向分液漏斗加25 mL正己烷（分析純，以下同），振蕩5 min，充分靜置，取下層乙腈移入燒瓶，55 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。用1.0 mL流動相充分溶解殘?jiān)?，移?.5 mL離心管，4 500 r/min離心5 min，取上清液經(jīng)0.45 μm微孔過濾膜裝瓶供高效液相色譜儀測定。

3.2 Ⅱ組方法前處理 用100 mL離心管稱取4份樣品，依次加入30 g無水硫酸鈉和30 mL酸化乙腈后高速勻漿機(jī)勻漿，再7 500 r/min離心10 min，取上清液置于另一個(gè)100 mL離心管中。往殘?jiān)屑尤?0 mL酸化乙腈重復(fù)上述操作一次，上清液合并于100 mL離心管中。向離心管加25 mL正己烷，渦旋2 min，再5 000 r/min離心5 min，用一次性滴管移去上層正己烷，轉(zhuǎn)入100 mL雞心瓶中，55 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。用1.0 mL流動相充分渦旋溶解殘?jiān)?，移?.5 mL離心管，4 500 r/min離心5 min，取上清液經(jīng)0.45 μm微孔過濾膜裝瓶供高效液相色譜儀測定。

4 結(jié)果與分析

儀器條件為流動相為乙腈（色譜純）/四丁基溴化銨（分析純）溶液（0.01 mol/L）=5/95（V/V），反相色譜C18柱（150.0 mm×4.6 mm），流速1.5 mL/min，激發(fā)波長280 nm，發(fā)射波長450 nm，進(jìn)樣量20 μL，柱溫40 ℃的條件進(jìn)行高效液相色譜儀測定，結(jié)果見表1。

分析結(jié)果可知，改進(jìn)方法Ⅱ組的回收率是81.3%，比Ⅰ組方法的回收率76.3%高；Ⅱ組的精密度（相對標(biāo)準(zhǔn)方差）3.15好于Ⅰ組的4.07，穩(wěn)定性也好；而且改進(jìn)方法的前處理具有操作簡單、檢測速度快等特點(diǎn)。原因是轉(zhuǎn)管次數(shù)較少，盡可能地回收了殘留物，離心分層快，批量處理占用空間較小。改進(jìn)方法具有顯著的效果和效率。

表1 不同前處理方法下鹽酸環(huán)丙沙星殘留量測定結(jié)果

5 試驗(yàn)問題與注意事項(xiàng)

一是用一次性滴管移去上層正己烷時(shí)要小心，移到最后要看清滴管中分層，下面的要放回去；二是該試驗(yàn)僅測定了環(huán)丙沙星，需要驗(yàn)證諾氟沙星和恩諾沙星是否有同樣的效果；三是環(huán)丙沙星的添加濃度是0.02 mg/kg，未做濃度梯度，以后要繼續(xù)加以驗(yàn)證；四是往殘?jiān)屑尤?0 mL酸化乙腈時(shí)應(yīng)先洗上次勻漿機(jī)刀頭，盡量回收殘留。