離子色譜柱后補(bǔ)液-脈沖安培法檢測(cè)米卡芬凈鈉中殘留鹽酸羥胺

(華東理工大學(xué)化學(xué)與分子工程學(xué)院 分析測(cè)試中心，上海 200237)

米卡芬凈鈉是一種新型水溶性半合成脂肽類化合物，是繼卡泊芬凈之后美國(guó)FDA批準(zhǔn)的第2種棘白菌素類抗真菌藥物[1]，能夠非競(jìng)爭(zhēng)性抑制1,3-?-D葡萄糖合成酶的活性從而抑制真菌細(xì)胞壁的合成[2]。它對(duì)深部真菌感染的主要致病真菌曲霉菌屬和念珠菌屬有廣譜抗真菌活性[3]，因此對(duì)真菌細(xì)胞有較高的特異性[4]，因而對(duì)人體正常細(xì)胞影響不大[5,6]，相比于比傳統(tǒng)兩性霉素 B、伏立康唑、伊曲康唑等有較少的副作用。

鹽酸羥胺是一種重要的工業(yè)有機(jī)化合物，常常作為藥物的中間體或原料[7,8]，也是合成米卡芬凈鈉的一個(gè)重要原料。鹽酸羥胺本身有毒性，對(duì)皮膚有刺激性。半數(shù)致死量(小鼠經(jīng)口)408mg/kg，有腐蝕性。因此對(duì)米卡芬凈鈉成品中鹽酸羥胺的殘留需要嚴(yán)格控制。

鹽酸羥胺的常用檢測(cè)方法有滴定法[9]、分光光度計(jì)法[10-12]、光譜法[13,14]等，上述方法操作繁瑣、靈敏度低、重復(fù)性差。鹽酸羥胺也可以衍生后用液相色譜和氣相色譜分析[15，16]，但操作要求高。作為有機(jī)陽(yáng)離子，也可以直接用離子色譜電導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè)，但靈敏度無(wú)法滿足藥物殘留的分析，且易受干擾。根據(jù)鹽酸羥胺的特性，采用離子色譜陽(yáng)離子分離，柱后補(bǔ)堿，用脈沖安培檢測(cè)，則靈敏度比電導(dǎo)法提高幾個(gè)數(shù)量級(jí)，干擾少，特異性好。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Dionex ICS5000雙系統(tǒng)多功能離子色譜儀(含AS-DP自動(dòng)進(jìn)樣器，DC模塊(脈沖安培檢測(cè)器)，DP-5雙泵)、Dionex IonPac CG16保護(hù)柱(4*50mm)、Dionex IonPac CS16分析柱(4*250mm)；Chromeleon6.8色譜工作站(Thermo Fisher Scientific，美國(guó))；甲基磺酸(99.5%)；阿拉?。畸}酸羥胺對(duì)照品(98.5%)；北京百靈威科技有限公司；氫氧化鈉溶液(50%)，Merck。

1.2 溶液的配制

1.2.1 淋洗液、衍生液的配制

準(zhǔn)確量取5.2 mL甲磺酸，加水稀釋至4000 mL，搖勻，即得30mmol/L甲磺酸溶液淋洗液；精密量取50%氫氧化鈉溶液80 mL，加水稀釋至2000 mL，搖勻，即得500mmol/L氫氧化鈉衍生液。

1.2.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液的配制

精密稱取鹽酸羥胺對(duì)照品25.36mg，置100mL容量瓶中，加淋洗液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置200 mL容量瓶中，用淋洗液稀釋至刻度，搖勻，作為鹽酸羥胺對(duì)照品儲(chǔ)備溶液(1.25μg/ mL)。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密量取鹽酸羥胺對(duì)照品儲(chǔ)備溶液3 、1 、1 、3 、2 mL，于100 、20 、10 、20 、10 mL容量瓶中，用淋洗液稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，配成0.0375、0.0625、0.1250、0.1875、0.2500 μg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.4 供試品溶液的配制

精密稱取供試品約250mg，置10mL容量瓶中，加淋洗液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

1.3 色譜條件

分析柱：Dionex IonPac CS16 (4*250mm)；保護(hù)柱：Dionex IonPac CG16 (4*50mm)；淋洗液：30mmol/L 甲磺酸溶液；稀釋劑：同淋洗液；柱后衍生液：500mmol/L 氫氧化鈉；進(jìn)樣量：25μL；柱溫：30℃；淋洗液流速：1.0mL/min，衍生液流速：0.3mL/min，檢測(cè)器：安培檢測(cè)器，脈沖安培(糖四電位波形)，金電極，Ag/AgCl參比電極。

2 結(jié)果與討論

2.1 實(shí)驗(yàn)原理

鹽酸羥胺屬于有機(jī)陽(yáng)離子，在強(qiáng)堿性條件下，采用糖的電位有很高的靈敏度，但是有機(jī)陽(yáng)離子的分離，只能采用陽(yáng)離子模式，因此，采用陽(yáng)離子分離，柱后補(bǔ)堿方式，同時(shí)解決了分離和靈敏度的問(wèn)題，鹽酸羥胺只在酸性條件下穩(wěn)定，中性和堿性不穩(wěn)定，因此鹽酸羥胺樣品應(yīng)在酸性溶液條件下保存。

2.2 專屬性

在同一色譜條件下，對(duì)空白溶液、對(duì)照儲(chǔ)備液、供試品溶液進(jìn)樣，所得色譜圖如圖1。由圖1可知空白溶液的色譜圖在鹽酸羥胺峰位置處，并無(wú)干擾峰，故淋洗液不干擾供試品的檢測(cè)。

圖1 空白、對(duì)照儲(chǔ)備液、供試品色譜圖

2.3 線性關(guān)系

用1.2.3配置的溶液，連續(xù)進(jìn)樣，得到線性關(guān)系Y=6.4773x-0.0236。相關(guān)系數(shù)r2為0.9999，Y截距絕對(duì)值0.0236<0.7936×20%(100%點(diǎn)峰面積的20%)，符合要求，說(shuō)明在0.0125μg/mL～0.25μg/mL范圍內(nèi)，線性良好。

2.4 檢出限和定量限

取0.0375μg/mL作為定量限溶液，并且連續(xù)進(jìn)樣6次；精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1mL，置于100mL容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為檢出限溶液。以信噪比分別為3和10 計(jì)算，得到鹽酸羥胺檢出限及定量限見(jiàn)表1 。

表1 檢出限和定量限的結(jié)果

2.5 回收率

精密稱取約250mg的供試品于10mL的容量瓶中，再加入一定量的對(duì)照溶液，定容，配置成回收率溶液。按上述條件連續(xù)進(jìn)樣，所得結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知鹽酸羥胺的回收率為97.5%，在80.0%～120.0%之間；RSD為2.8%，小于10.0%，說(shuō)明本方法的準(zhǔn)確度較好。

表2 回收率測(cè)定結(jié)果

2.6 進(jìn)樣精密度

取回收率項(xiàng)下對(duì)照品溶液作為進(jìn)樣精密度溶液，連續(xù)進(jìn)樣6針，得到鹽酸羥胺含量的平均值為0.0005%，RSD為2.1%(n=6)，說(shuō)明進(jìn)樣精密度較好。

2.7 溶液穩(wěn)定性

將專屬項(xiàng)下對(duì)照品溶液在室溫下放置0h、12h、20h、24h再檢測(cè)。精密精密稱取供試品(No161201)251.5mg，置10mL量瓶中，精密量取鹽酸羥胺對(duì)照品儲(chǔ)備溶液1mL上述量瓶中，用淋洗液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液穩(wěn)定性溶液，于室溫放置，在0h、12h、20h、24h檢測(cè)定。其結(jié)果如表3，從表3可以看出，在室溫下放置不同時(shí)間后，無(wú)論是對(duì)照品溶液還是供試品溶液，峰面積變化非常小，因此溶液穩(wěn)定性良好。

表3 溶液穩(wěn)定性結(jié)果

2.7 樣品測(cè)定

精密稱取批號(hào)No161201、No161202、 No161203分別為 249.8mg、248.5mg、251.2mg，置于10mL容量瓶中，加淋洗液溶解并稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣。從表4中可看出，3批樣品中均為檢測(cè)出鹽酸羥胺，說(shuō)明米卡芬凈鈉中未含有殘留的鹽酸羥胺。

表4 樣品中鹽酸羥胺的含量

3 結(jié)論

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過(guò)離子色譜柱后補(bǔ)液-脈沖安培法能準(zhǔn)確地分析米卡芬凈鈉中殘的痕量鹽酸羥胺的含量，而且此方法靈敏度高、穩(wěn)定性好、重復(fù)性滿足實(shí)驗(yàn)要求。

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