QuEChERS 前處理UPLC-MS/MS法測定蔬菜中11 種農(nóng)藥殘留

◎ 何瑞雪

（珠海市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 珠海 519000）

傳統(tǒng)的食品農(nóng)藥殘留檢測方法往往需要大量的樣品、復(fù)雜的提取和凈化步驟，導(dǎo)致檢測成本高、效率低、環(huán)境污染等問題[1]，2003 年美國科研工作者針對各種基質(zhì)中的農(nóng)藥殘留檢測樣品前處理開發(fā)了QuEChERS前處理方法，該方法具有快速簡便、廉價(jià)高效、穩(wěn)定安全的特點(diǎn)[2]，可用于分析果蔬[3-4]、谷物[5-6]、植物 油[7-8]、土壤[9]等基質(zhì)中的藥物殘留。農(nóng)藥殘留的國標(biāo)方法一般是氣相色譜、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測，但對于熱不穩(wěn)定的農(nóng)藥如辛硫磷[10]等，靈敏度及重現(xiàn)性不好，而液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)則為此類農(nóng)藥檢測的理想方法。本文利用QuEChERS 前處理及液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，研究了蔬菜中多菌靈、殺蟲脒、甲萘威、噻菌靈、啶蟲脒、辛硫磷、聯(lián)苯肼酯、氯唑磷、氟硅唑、蟲酰肼以及甲維鹽11 種農(nóng)藥殘留的測定方法，并取得了滿意結(jié)果，可為蔬菜中熱不穩(wěn)定及苯環(huán)結(jié)構(gòu)農(nóng)藥的快速檢測提供方法依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甲醇、乙腈、甲酸（均為色譜純）默克公司；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品包括多菌靈、殺蟲脒、甲萘威、噻菌靈、啶蟲脒、辛硫磷、聯(lián)苯肼酯、氯唑磷、氟硅唑、蟲酰肼以及甲維鹽，購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所、北京曼哈格生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

XEVO TQ-S Micro 三重四級桿質(zhì)譜儀（配有Acquity UPLC 超高效液相色譜儀及電噴霧離子源），QuEChERS 前處理包購自美國Agilent 公司；SIGMA高速冷凍離心機(jī)購自美國SIGMA 公司；Milli Q 超純水系統(tǒng)購自美國Millipore 公司；IKA 刀式研磨儀、IKA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、渦旋振蕩器產(chǎn)自美國IKA。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

由于樣品中存在基質(zhì)效應(yīng)，因此采用空白樣品基質(zhì)溶液配制混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。分別移取適量標(biāo)準(zhǔn)溶液，用空白樣品基質(zhì)溶液配制濃度為：5.0、10.0、20.0、50.0 ng·mL-1及100.0 ng·mL-1的多菌靈、殺蟲脒、 甲萘威、噻菌靈、聯(lián)苯肼酯、氯唑磷、氟硅唑、蟲酰肼以及辛硫磷的標(biāo)準(zhǔn)工作液，啶蟲脒、甲維鹽的標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為：25.0、50.0、100.0、250.0 ng·mL-1及500.0 ng·mL-1。

1.3.2 樣品前處理

稱取15 g 花菜到50 mL 離心管中，準(zhǔn)確加入15 mL 含1%乙酸的乙腈，放冰箱冷凍10 min 后取出，加入QuEChERS 提取包和陶瓷均質(zhì)子，渦旋1 min，使其充分混合，4 000 r·min-1離心5 min，取離心后的上清液8 mL 加入QuEChERS 凈化管中，渦旋1 min， 4 000 r·min-1離心5 min，取上清液過0.22 μm 濾膜，上機(jī)測定。

1.3.3 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

色譜柱：Waters Acquity HSS T3（100 mm×2.1 mm， 1.8 μm）；柱溫：40 ℃；流動(dòng)相：A 相為乙腈，B 相 為0.05%甲酸水溶液；梯度洗脫程序0 ～0.01 min，5%A，0.01 ～3.00 min，5%～50%A，3.00 ～5.00 min， 50% ～80%A，5.00 ～8.00 min，80% ～80%A， 8.00 ～8.01 min，80% ～5%A，8.01 ～12.00 min，5%A；流速：0.2 mL·min-1；進(jìn)樣量5 μL。

質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子源；正離子掃描；多反應(yīng)監(jiān)測掃描模式；毛細(xì)管電壓1.0 kV；脫溶劑氣溫度400 ℃；脫溶劑氣流量1 000 L·min-1。

2 結(jié)果與分析

2.1 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件的選擇

用300 ng·mL-1的甲醇標(biāo)準(zhǔn)品，通過蠕動(dòng)泵與適當(dāng)流速的流動(dòng)相共同進(jìn)入質(zhì)譜儀中，化合物進(jìn)入電噴霧離子源后，能形成穩(wěn)定的加和離子，在MS 模式下，調(diào)節(jié)錐孔電壓使母離子的豐度最大。開啟MS/MS 模式后，逐漸增大碰撞能量，選擇相對豐度較高、出峰穩(wěn)定的碎片，微調(diào)碰撞能量，使碎片離子的豐度最大。

本實(shí)驗(yàn)考察了甲醇、乙腈、0.05%甲酸水溶液以及1% 1 mol·L-1乙酸銨水溶液等不同流動(dòng)相對組分的分離效果，結(jié)果表明，使用乙腈-0.05%甲酸水溶液作為流動(dòng)相可有效分離11 種農(nóng)藥，如圖1 所示。11 種農(nóng)藥的保留時(shí)間及質(zhì)譜參數(shù)見表1。

圖1 11 種農(nóng)藥的總離子流圖

表1 11 種農(nóng)藥保留時(shí)間及質(zhì)譜參數(shù)表

2.2 方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

采用5 組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)算出待測物質(zhì)和儀器響應(yīng)值之間的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)（r）：以待測物的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表2，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)： r ＞0.99，符合GB/T 27417-2017《合格評定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》要求。

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)表

2.2.2 回收率和精密度

本實(shí)驗(yàn)采用加標(biāo)回收試驗(yàn)來驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性，在花菜樣品中分別加入高、中、低濃度的待測物，計(jì)算回收率，每個(gè)濃度做6 個(gè)平行，計(jì)算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。由實(shí)驗(yàn)可知，多菌靈、殺蟲脒、甲萘威、噻菌靈、啶蟲脒、辛硫磷、氯唑磷、氟硅唑、蟲酰肼、甲維鹽的加標(biāo)回收率在86.7%～118.9%，但是聯(lián)苯肼酯的回收率則相對偏低，對于苯環(huán)結(jié)構(gòu)農(nóng)藥的處理還有待進(jìn)一步優(yōu)化。11 種待測物的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于20%，滿足GB/T 27417-2017《合格評定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》的要求。

表3 回收率及精密度表

3 結(jié)論

本文采用QuEChERS 前處理，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，建立了蔬菜中11 種農(nóng)藥殘留的檢測方法。結(jié)果表明：相比常規(guī)前處理方法，該法大大減少 了試劑用量，縮短了時(shí)間，降低了成本，且對環(huán)境友好，多菌靈、殺蟲脒、甲萘威、噻菌靈、聯(lián)苯肼酯、氯唑磷、氟硅唑、蟲酰肼、辛硫磷、啶蟲脒以及甲維鹽線性關(guān)系良好，加標(biāo)回收率及精密度均能滿足殘留檢測的要求。但檢測苯環(huán)結(jié)構(gòu)農(nóng)藥時(shí)，需進(jìn)一步優(yōu)化前處理方法，以得到更為理想的回收率。