茄尼醇對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎的影響

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1.昆明醫(yī)科大學(xué)研究生院，云南　昆明　650500；2.紅云紅河煙草(集團(tuán))有限責(zé)任公司，云南　昆明　650231; 3.昆明醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院，云南　昆明　650101; 4.云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司技術(shù)中心，云南　昆明　650231

牙周炎是一種牙周組織破壞的慢性炎癥性疾病，而牙菌斑是牙周炎發(fā)生的始動(dòng)因子，致病菌入侵時(shí)，中性粒細(xì)胞(Neutrophil)作為首要的防御細(xì)胞，吞入病原體清除這些有害物質(zhì)的過程中, 激活細(xì)胞膜上的還原型輔酶Ⅱ(Nicotinamide adenosine denucleotide hydro-phosphoric acid, NADPH)氧化酶, 氧化酶攝取大量氧，還將還原型NADPH的一個(gè)電子傳遞給氧分子而形成超陰離子自由基((O2-)，導(dǎo)致自由基在體內(nèi)逐漸增多，引起氧化應(yīng)激，造成組織破壞[1-2]。

煙草(Nicotiana tabacum)為茄科(Solanaceae)煙屬植物，廢次煙葉中含有多種化學(xué)成分，其中許多都具有較高藥用價(jià)值和營養(yǎng)價(jià)值，如煙堿、茄尼醇(Solanesol)、多酚類化合物等，且在廢次煙葉中茄尼醇含量突出為0.5%～2.7%[3]。茄尼醇作為一種天然化合物，屬于九聚異戊二烯伯醇或四倍半萜烯醇,分子式為 C45H14O，不溶于水。研究發(fā)現(xiàn)茄尼醇在煙草、馬鈴薯和桑葉中的含量較豐富，尤其是煙葉中茄尼醇含量最高，使得煙葉成為提取茄尼醇的主要原料[4-5]。當(dāng)前，國際上以茄尼醇為原料的新藥研制工作非?；钴S，茄尼醇作為一種重要的醫(yī)藥中間體，很多藥物連接上茄尼醇這樣的長鏈烯基，往往能獲得某些優(yōu)良的性能[6]。文獻(xiàn)報(bào)道，茄尼醇本身含有多個(gè)非共軛雙鍵，以及它特殊的全反式鏈節(jié)結(jié)構(gòu)使它具有非常強(qiáng)烈的吸收自由基的性能[7]和脂質(zhì)抗氧化作用[8]。因此，其本身也有望成為有醫(yī)療效果的生化物質(zhì)。

牙周炎的治療，除了控制牙周致病菌，外源性補(bǔ)充抗氧化劑，可以通過調(diào)節(jié)免疫和氧化應(yīng)激反應(yīng)，提高體內(nèi)抗氧化酶的活性，從而有效改善體內(nèi)氧化還原平衡而緩解牙周組織的損傷[9]。因此，實(shí)驗(yàn)將以煙草中提取的茄尼醇為研究對(duì)象，通過應(yīng)用牙周炎模型，初步探討茄尼醇對(duì)牙周炎的影響作用，為其在牙周炎中的治療或者改善牙周組織的狀況提供實(shí)驗(yàn)參考數(shù)據(jù)。

1　材料和方法

1.1儀器YVITC001N電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)、Mettler Toledo高精密電子分析天平(Mettler Toledo公司)、DT5-1 離心機(jī)(時(shí)代北利)、BM-IX生物組織包埋機(jī)(孝感市宏業(yè)醫(yī)用儀器有限公司)、石蠟切片機(jī)(上海市醫(yī)療器械工業(yè)公司醫(yī)療器械批發(fā)部修配廠)。

1.2試劑水合氯醛(Solarbio)；食用調(diào)和油(上海香滿園，批號(hào)：20140829)；茄尼醇(純度為97 %，云南云藥醫(yī)藥研究有限公司)；SOD試劑盒(批號(hào)：20150708)、GSH-Px試劑盒(批號(hào)：20150708)、MDA試劑盒(批號(hào)20150708)等購置南京建成；TNF-α試劑盒(批號(hào)165232)、IL-1β試劑盒(批號(hào)154256)等購置深圳欣博盛；PGE2試劑盒(美國 RD公司)、TRAP試劑盒(Sigma，批號(hào)：SLBM2508V)。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組選取四川省簡陽市簡城比爾動(dòng)物養(yǎng)殖場提供的清潔級(jí)雄性SD大鼠126只，6周齡，體重180～220g(合格證號(hào)：SCXK(川)2013-24)。實(shí)驗(yàn)過程中遵循動(dòng)物福利倫理原則。大鼠隨機(jī)分為正常組(N組，18只)，牙周炎建模組108只。通過雙側(cè)上頜第二磨牙絲線結(jié)扎配合黏性高糖飲食4周建立牙周炎模型。成模后，牙周炎大鼠再隨機(jī)分為牙周炎組(P組)、維生素C組(VitC組)、茄尼醇低劑量組(S1)、中劑量組(S2)、高劑量組(S3)，每組18只。

1.4牙周炎模型的建立及給藥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)l周后，10%水合氯醛按0.3mL/100g腹腔注射麻醉，大鼠仰臥位固定四肢，用4/0 #醫(yī)用絲線，在大鼠雙側(cè)上頜第二磨牙環(huán)牙頸部結(jié)扎，腭側(cè)打結(jié)，并使絲線盡量位于齦溝內(nèi)[10]。同法結(jié)扎對(duì)側(cè)上頜第二磨牙，并從實(shí)驗(yàn)當(dāng)天開始喂養(yǎng)l00g/L蔗糖和軟食(常規(guī)鼠料用蔗糖水泡制)。建模成功后，每天早晨9點(diǎn)茄尼醇低、中、高劑量組分別按1.5 mg、3.0 mg、6.0 mg/100 g BW給藥，維生素C組按10 mg/100 g BM給藥[11]，茄尼醇通過食用調(diào)和油稀釋，VitC通過生理鹽水稀釋。正常組和牙周炎模型組灌胃等體積的食用調(diào)和油，灌胃體積0.1 mL / 100 g。

1.5模型的評(píng)估4周后隨機(jī)抽取建模大鼠4只，脫頸椎猝死，取其上頜骨，去凈軟組織，用電子數(shù)顯卡尺測量上頜第二磨牙釉牙骨質(zhì)界至牙槽嵴頂?shù)木嚯x[12]作為此牙的牙槽骨喪失值來評(píng)估模型是否成功。

1.6標(biāo)本采集分別于灌胃后的2、4、6周末三個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組隨機(jī)抽取6只大鼠，在10 % 水合氯醛腹腔麻醉后腹主動(dòng)脈采血。采血后，迅速分離上頜骨，一分為二，右側(cè)上頜骨浸泡于4 %多聚甲醛固定液中，用于HE染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase，TRAP)染色觀察炎癥變化和破骨細(xì)胞數(shù)量。左側(cè)上頜骨置于75%酒精中，用于測量牙槽骨喪失程度(alveolar bone loss, ABL)。

1.7血液的檢測收集的腹主動(dòng)脈血3600 r/min，離心10 min，血漿-80 ℃保存，用于ELISA檢測炎癥因子腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α, TNF-α)、白介素1β (inteleukins1-β, IL-1β)、前列腺素E2 (prostaglandin E2, PGE2)蛋白表達(dá)水平，分別用羥胺法和DTNB法檢測超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathion peroxidase, GSH-Px)的活性，TBA法檢測丙二醛(malodiadehyde, MDA)含量。

1.9組織學(xué)檢測

1.9.1HE染色取右側(cè)上頜，4 % 多聚甲醛固定液4 ℃ 條件下固定24 h，15 % EDTA 脫鈣液脫鈣3～4周。系列乙醇脫水，二甲苯置換至石蠟包埋。近遠(yuǎn)中向連續(xù)5 μm厚石蠟切片，切片常規(guī)HE染色，在光鏡下觀察第一、二磨牙間和第二、三磨牙間的牙周組織病理變化。

1.9.2抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP染色) 按試劑盒說明進(jìn)行Trap染色。破骨細(xì)胞鑒定標(biāo)準(zhǔn)為：胞核顯多核、胞漿嗜酸性多偽足、胞體大而不規(guī)則，與牙槽骨表面直接接觸或位于骨吸收陷窩內(nèi)，行Trap染色后胞漿被染為紅色，胞核為藍(lán)色[13]，在400倍鏡下，每張切片以牙槽嵴頂為起始，隨機(jī)選取第二磨牙近遠(yuǎn)中側(cè)牙槽嵴邊緣的4個(gè)不重疊視野，分別計(jì)算每一個(gè)視野內(nèi)的破骨細(xì)胞數(shù)，共計(jì)8個(gè)視野，并計(jì)算其均值，作為該片的破骨細(xì)胞數(shù)，每組4張切片，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

1.10統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSSl7．0軟件包分析處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用單因素方差分析和LSD檢驗(yàn)比較同一時(shí)間點(diǎn)6個(gè)組間的差異。所有組的數(shù)據(jù)使用K-S檢驗(yàn)正態(tài)性，數(shù)據(jù)為正態(tài)性分布，使用單因素方差分析對(duì)6個(gè)組相應(yīng)指標(biāo)的均數(shù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，并通過LSD檢驗(yàn)進(jìn)行樣本均數(shù)的兩兩比較，以雙側(cè)P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1建模大鼠牙周情況隨機(jī)抽取建模大鼠檢測牙周組織情況，其牙頸部較多的軟垢堆積，牙齦顏色鮮紅、邊緣圓鈍，紅腫剝離，牙齦輕觸出血，HE染色可見大量炎癥細(xì)胞浸潤及紊亂的牙周膠原纖維束。去盡牙齦軟組織可見牙槽嵴頂模糊呈蟲蝕狀，嵴頂呈凹陷狀，第二磨牙釉牙骨質(zhì)界至牙槽嵴頂?shù)木嚯x模型組(0.90±0.07)顯著高于正常組(0.30±0.07)。如圖1所示。

2.2給藥后大鼠的一般特征和牙周情況

2.2.1一般特征由表1可知，灌胃期間，各組大鼠體重都在逐漸增加。灌胃2周末，正常組大鼠體重較重，與牙周炎組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與茄尼醇各劑量組相比無明顯差異(P>0.05)。灌胃4周末，正常組大鼠體重明顯高于茄尼醇劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。灌胃6周末，各組大鼠體重兩兩比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

組別劑量/mg/100g體重2周4周6周N組等體積溶媒30223±265740420±352142432±2390P組等體積溶媒26522±3212△33200±3214△41067±3124VitC組1029835±265436826±342943425±3613S1組1528836±353433800±3521△44214±2441S2組329721±3012435551±3864△42963±3864S3組628625±373833250±3751△43025±2484

注：與N組比較，△P<0.05。

2.2.2各組大鼠牙槽骨喪失情況由表2可知，灌胃2周、4周、6周后，與牙周炎組相比，茄尼醇各劑量組大鼠ABL有改善趨勢，但是改善程度不明顯，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，茄尼醇用藥組的牙槽骨喪失明顯多于正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，茄尼醇各劑量組間兩兩比較差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

組別劑量/mg/100gABL2周4周6周N組等體積溶媒031±005032±002034±004P組等體積溶媒086±009△085±008△084±009△VitC組10085±006△080±009△077±005△S1組15085±007△082±008△080±005△S2組3086±007△082±008△080±009△S3組6085±010△081±009△079±008△

注：與N組比較，△P<0.05。

2.3組織學(xué)觀察由圖2～4可知，灌胃2周、4周和6周后，正常組：上皮附著位于釉牙骨質(zhì)界處，無附著喪失(藍(lán)色箭頭所示)。牙周膜纖維排列整齊，牙槽嵴頂高度正常，無明顯的炎癥細(xì)胞浸潤。牙周炎組：牙周袋內(nèi)壁上皮顯著增生，牙周組織大部分膠原纖維束紊亂甚至纖維束出現(xiàn)斷裂，周圍毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，冠1/3以上部位少量牙槽骨存在，結(jié)締組織充滿這些間隙內(nèi)，袋底的結(jié)合上皮不規(guī)則的向根方退縮，牙槽骨高度明顯降低。茄尼醇各劑量組及VitC組間差異不明顯，均可發(fā)現(xiàn)牙周組織不同程度的破壞，牙槽骨高度降低，牙周袋和牙槽骨之間有粗大的膠原纖維束，結(jié)締組織內(nèi)浸潤的炎癥細(xì)胞，但牙周組織破壞較牙周炎組有改善趨勢。

2.4抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP染色)光學(xué)顯微鏡下觀察，多核破骨細(xì)胞內(nèi)酶活性部位呈現(xiàn)紅色沉淀，胞核染色藍(lán)色(見圖5)。對(duì)TRAP染色切片于400倍顯微鏡放大視野下觀察計(jì)數(shù)，比較同一時(shí)間點(diǎn)不同組別之間破骨細(xì)胞數(shù)目變化情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，牙周炎組大鼠破骨細(xì)胞數(shù)目明顯多于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。茄尼醇灌胃后破骨細(xì)胞數(shù)目與牙周炎組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。但隨著灌胃時(shí)間的增加，各組的破骨細(xì)胞數(shù)目都有逐漸減少的趨勢(表3)。

表3　各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)Trap染色破骨細(xì)胞數(shù)目變化情況 (個(gè)，

注：與N組相比，△P<0.01。

2.5血漿中炎癥因子的表達(dá)

2.5.1茄尼醇對(duì)血漿中致炎因子IL-1β含量的影響作用由表4可知，灌胃2周、4周、6周后牙周炎組血漿中IL-1β的濃度高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。茄尼醇給藥后三個(gè)劑量組IL-1β的濃度均低于牙周炎組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。隨著灌胃時(shí)間增加，到灌胃6周后，茄尼醇高劑量組IL-1β的濃度與正常組及VitC組無明顯差異(P>0.05)。

組別劑量/mg/100gIL-1β2周4周6周N組等體積溶媒1616±2551709±2451884±257P組等體積溶媒3583±347△3154±317△3255±355△VitC組102300±264△▲2165±244△▲2182±245▲S1組152388±219△▲2227±312△▲2368±332△▲S2組32496±267△▲2231±225△▲2413±327△▲S3組62616±234△▲2345±242△▲2234±316▲

注：與N組比較，△P<0.05；與P組比較，▲P<0.05。

2.5.2茄尼醇對(duì)血漿中致炎因子TNF-α含量的影響作用由表5可知，灌胃2周、4周、6周后三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，牙周炎組TNF-α生成水平高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。茄尼醇灌胃后，TNF-α生成水平均顯著低于牙周炎組(P<0.05)。灌胃4周和6周后，茄尼醇三個(gè)劑量組TNF-α的生成水平與VitC組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。且在6周時(shí)茄尼醇高劑量組TNF-α的生成水平與正常組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

組別劑量/mg/100gTNF-α2周4周6周N組等體積溶媒2971±4552830±4452872±444P組等體積溶媒5838±512△5282±617△5051±410△VITC組104423±364△▲4155±489△▲4126±574△▲S1組153917±332△▲◆3896±312△▲4192±332△▲S2組34216±467△▲4083±225△▲3926±327△▲S3組64331±434△▲4119±342△▲3905±31△▲

注：與N組比較，△P<0.05；與P組比較，▲P<0.05；與VITC組比較，◆P<0.05。

2.5.3茄尼醇對(duì)血漿中致炎因子血PGE2含量的影響作用由表6可知，結(jié)果表明灌胃2周、4周、6周后，茄尼醇三個(gè)劑量組與牙周炎組相比，大鼠血漿中PGE2的生成水平均明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與VitC組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。隨著灌胃時(shí)間增加，到6周末，茄尼醇三個(gè)組血漿中PGE2的濃度與正常組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

組別劑量/mg/100gPGE22周4周6周N組等體積溶媒145771±8327149100±17651161165±15330P組等體積溶媒210743±15883△207162±15183△232952±24492△VitC組10177423±9509△▲171391±7022△▲179013±6383▲S1組15173184±11084△▲165826±24082△▲168932±17759▲S2組3184632±12474△▲174002±18015△▲173632±15685▲S3組6183812±17790△▲168211±15679△▲166324±19479▲

注：與N組比較，△P<0.05；與P組比較，▲P<0.05。

2.6大鼠血漿中氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化

2.6.1茄尼醇對(duì)血漿中MDA含量的影響作用由表7可知，灌胃2周、4周、6周后，牙周炎組MDA的生成水平顯著高于正常組(P<0.05)。茄尼醇給藥后三個(gè)劑量組MDA的生成水平都顯著降低，與牙周炎組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，灌胃2周和4周后，茄尼醇低劑量組MDA的生成水平接近正常組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。到灌胃6周后，茄尼醇三個(gè)組MDA的生成水平均與正常組接近，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。灌胃同一時(shí)間點(diǎn)末茄尼醇各劑量組兩兩比較，差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

組別劑量/mg/100gMDA2周4周6周N組等體積溶媒506±052473±053503±065P組等體積溶媒714±063△688±022△756±066△VitC組10474±068▲447±059▲438±068△▲S1組15531±039▲◆503±052▲◆526±052▲◆S2組3567±067△▲◆517±045△▲◆513±077▲◆S3組6570±054△▲◆518±062△▲◆501±066▲◆

注：與N組比較，△P<0.05；與P組比較，▲P<0.05；與VITC組比較，◆P<0.05。

2.6.2茄尼醇對(duì)血漿SOD活性的影響作用由表8可知，灌胃2周、4周、6周后牙周炎組SOD活性均低于正常組，茄尼醇給藥后三個(gè)劑量組SOD活性都明顯高于牙周炎組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，灌胃2周和4周后茄尼醇三個(gè)劑量組和正常組及VitC組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。到灌胃6周后，茄尼醇高劑量組與正常組、VitC組相比差異仍無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。同一時(shí)間點(diǎn)末，茄尼醇三個(gè)劑量組兩兩相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

組別劑量/mg/100gSOD2周4周6周N組等體積溶媒24783±247224644±299024913±1303P組等體積溶媒17389±986△17490±2077△14913±2657△VitC組1023797±2509▲23853±3129▲25679±1569▲S1組1522418±2063▲23222±2306▲21019±2610△▲◆S2組321582±2699▲22121±2047▲22240±1903▲◆S3組621633±2532▲22734±1941▲24078±2049▲

注：與N組比較，△P<0.05；與P組比較，▲P<0.05；與VITC組比較，◆P<0.05。

2.6.3茄尼醇對(duì)血漿中GSH-Px活性的影響作用由表9可知，灌胃2周、4周、6周后，牙周炎組GSH-Px活性都低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。茄尼醇給藥后，三個(gè)劑量組的GSH-Px活性都高于牙周炎組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。到4周末，茄尼醇低劑量組GSH-Px活性與正常組接近，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。到6周末，茄尼醇高劑量組的GSH-Px活性繼續(xù)升高與正常組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。三個(gè)時(shí)間點(diǎn)末，茄尼醇三個(gè)劑量組兩兩相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表9　不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠血漿中GSH-Px的活性情況　(酶活力單位,

注：與N組比較，△P<0.05；與P組比較，▲P<0.05；與VitC組比較，◆P<0.05。

3　討論

煙草化學(xué)成分多種多樣，其中許多都是具有一定應(yīng)用價(jià)值的生物活性物質(zhì)，這些物活性成分主要有煙堿、茄尼醇、綠原酸、蘆丁、功能蛋白、活性多糖等[14]。煙草中的萜類化合物茄尼醇、酚類化合物綠原酸以及黃酮類物質(zhì)都有一定的抑菌、抗炎以及較好的清除自由基的能力，是具有潛力的抗氧化劑[15-17]。牙周炎癥中，研究發(fā)現(xiàn)在自由基過量或抗氧化劑不足的條件下，增多的自由基可直接參與菌斑-宿主免疫反應(yīng)，自由基在牙周組織損傷的致病機(jī)理中起著一定的作用[18]。從而也暗示我們調(diào)控炎性因子和自由基的生成對(duì)牙周病的發(fā)生和治療起著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)茄尼醇具有較強(qiáng)的抗生物活性[19]，但其在牙周炎的防治中是否起到作用，目前鮮見相關(guān)報(bào)道。因此，實(shí)驗(yàn)通過實(shí)驗(yàn)性牙周炎大鼠模型對(duì)煙草提取物茄尼醇的潛在療效進(jìn)行評(píng)估。

牙槽骨吸收總量可以客觀地反映牙周破壞程度，衡量和判斷牙周組織狀況，是牙周病診斷中重要的檢查指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)中牙周炎組牙周組織破壞最嚴(yán)重，牙槽骨喪失較多。給藥2周、4周、6周后，維生素C組以及茄尼醇各劑量組牙齦炎癥減輕，探診出血減少。HE染色可發(fā)現(xiàn)膠原纖維紊亂和斷裂有所減輕，結(jié)合上皮及牙周膜內(nèi)的炎癥細(xì)胞數(shù)目減少，但炎癥反應(yīng)并沒有恢復(fù)到正常水平。灌胃期間牙周炎組ABL也出現(xiàn)逐漸改善的情況，說明局部刺激因素去除后，大鼠牙周組織有一定的自我恢復(fù)能力，結(jié)果與張鯤的研究結(jié)果相符合[20]。但是，茄尼醇組ABL以及破骨細(xì)胞計(jì)數(shù)與牙周炎組相比差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中年齡可能是一個(gè)影響因素，大鼠開始灌胃時(shí)已有11周齡，本實(shí)驗(yàn)中灌胃2、4、6周三個(gè)時(shí)間段，成年大鼠要觀察到骨修復(fù)可能時(shí)間需要適當(dāng)延長[21]。此外，由于本實(shí)驗(yàn)是關(guān)于茄尼醇對(duì)牙周炎作用的初步探討，茄尼醇的用量以及用藥時(shí)間需要進(jìn)一步的研究。

TNF-α和IL-1β在牙周炎的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵的作用，IL-1β和 TNF-α 能夠募集炎癥細(xì)胞，誘導(dǎo)PGE2和基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPS)的產(chǎn)生，抑制膠原合成，刺激骨吸收、組織降解以及基質(zhì)細(xì)胞的凋亡從而限制了牙周組織的修復(fù)[22]。本實(shí)驗(yàn)顯示牙周炎組血漿中TNF-α、IL-1β濃度最高(P<0.05)，給藥2、4、6周后，茄尼醇劑量組下調(diào)了血漿中炎癥因子的表達(dá)，其抗炎效果與維生素C組相似，我們推測茄尼醇下調(diào)炎癥因子可能是通過調(diào)控NF-κB而實(shí)現(xiàn)。研究顯示在牙周組織中NF-κB的激活率達(dá)到了75 %～ 90 %，明顯的高出了正常組織的5 %～ 30 %，NF-κB又能上調(diào)炎癥因子的表達(dá)，表明了NF-κB的活化在牙周炎的發(fā)生發(fā)展中也起著重要因素[23]。

在牙周炎發(fā)展過程中，機(jī)體內(nèi)菌斑-宿主免疫反應(yīng)，使機(jī)體產(chǎn)生過度的活性氧(包括氧化自由基和非自由基活性物質(zhì))，長久后引起機(jī)體抗氧化酶水平下降。超氧化物歧化酶(SOD)作為機(jī)體重要的抗氧化酶，是機(jī)體內(nèi)唯一能夠清除生物氧化所產(chǎn)生的超氧陰離子的酶[24]。谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)是一種廣泛存在于機(jī)體組織細(xì)胞線粒體、胞質(zhì)內(nèi)以及生物膜上的水溶性四聚蛋白酶，它不僅可以清除過氧化氫，同時(shí)還可以清除脂質(zhì)過氧化物[25]。丙二醛(MDA)是自由基與多聚不飽和脂肪酸反應(yīng)的終末產(chǎn)物，在機(jī)體內(nèi)其含量的高低間接反映了細(xì)胞受到自由基攻擊后的損傷程度[26]。實(shí)驗(yàn)期間，牙周炎組SOD和GSH-Px這兩種酶的活性明顯下降，MDA的含量升高?？赡苡捎谘乐苎装Y期間外周血中PMNs處于較敏感的反應(yīng)狀態(tài)，產(chǎn)生并釋放大量的自由基[27]。茄尼醇灌胃2周、4周、6周后，SOD和GSH-Px的活性都出現(xiàn)增加，MDA含量降低，與牙周炎組相比，有顯著性差異(P<0.05)。茄尼醇組的抗氧化作用效果和維生素C組相似，暗示茄尼醇潛在的抗氧化活性，但是茄尼醇的抗氧化機(jī)制尚不清楚。

綜合體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)茄尼醇有較好的抗炎和抗氧化的性能，但作用機(jī)制尚不清除。根據(jù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和結(jié)果推測可能有以下的原因：首先，大鼠通過結(jié)扎誘導(dǎo)牙周炎癥模型，創(chuàng)傷和感染引起宿主的免疫應(yīng)答反應(yīng)，宿主細(xì)胞在清除病原體的過程由于“呼吸爆發(fā)”作用產(chǎn)生大量的自由基。茄尼醇其自身特殊的多共軛雙鍵結(jié)構(gòu)可以清除自由基[19]，改善大鼠的氧化應(yīng)激狀態(tài)，阻止機(jī)體細(xì)胞胞漿中對(duì)氧化還原敏感的核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB入核[28]，下調(diào)炎性細(xì)胞因子的生成。其次，茄尼醇可能作用于機(jī)體內(nèi)的抗氧化反應(yīng)原件(antioxidant responsive element, ARE)誘導(dǎo)機(jī)體抗氧化酶系統(tǒng)產(chǎn)生抗氧化需要成分(SOD、CAT、GSH-Px)，從而增強(qiáng)大鼠抗氧化能力影響其牙周炎的進(jìn)展。

總之，灌胃茄尼醇后減輕了結(jié)扎誘導(dǎo)的牙周炎大鼠全身氧化應(yīng)激狀態(tài)和炎性因子的表達(dá)，研究結(jié)果可為茄尼醇的臨床應(yīng)用及改善牙周狀態(tài)提供實(shí)驗(yàn)參考數(shù)據(jù)。但是實(shí)驗(yàn)中茄尼醇促使牙周炎愈合的機(jī)理尚不明確，后續(xù)實(shí)驗(yàn)中需要深入探索明確其作用機(jī)理。

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