針刺聯(lián)合補(bǔ)陽還五湯對(duì)大鼠急性脊髓損傷后相關(guān)血清學(xué)指標(biāo)的影響

孫慧麗　

(長春醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，吉林　長春　130031)

脊髓損傷是由于外界暴力作用于脊髓導(dǎo)致?lián)p傷節(jié)段各種感覺、運(yùn)動(dòng)和括約肌功能障礙，病理反射和肌張力異常等相應(yīng)改變，外周神經(jīng)聯(lián)系部分則完全中斷，造成機(jī)體感覺運(yùn)動(dòng)功能嚴(yán)重障礙，患者多表現(xiàn)為不全癱或全癱〔1〕。目前在治療上有脊髓神經(jīng)減壓、激素沖擊、后期神經(jīng)生長因子應(yīng)用、細(xì)胞移植、中醫(yī)藥等方法，其中中醫(yī)藥是治療急性脊髓損傷重要步驟，本研究探討針刺聯(lián)合補(bǔ)陽還五湯對(duì)急性脊髓損傷大鼠相關(guān)指標(biāo)的影響。

1　資料與方法

1.1臨床資料隨機(jī)選取36只大鼠分成3組，分別為模型對(duì)照組、激素組、針刺聯(lián)合補(bǔ)陽還五湯組各12只，雌雄各半，平均體重(125±15)g，衛(wèi)生部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物長春繁育場(chǎng)中心提供，均為普通大鼠，先飼養(yǎng)10 d后開始造模。再進(jìn)行藥物配置，模型對(duì)照組予0.9%氯化鈉注射液10 ml，激素組應(yīng)用地塞米松5 mg，補(bǔ)陽還五湯組成有生黃芪、當(dāng)歸尾、赤芍、地龍、川芎、紅花、桃仁等，來源為長春中醫(yī)藥大學(xué)提供的顆粒物。

1.2方法大鼠均喂養(yǎng)10 d，采用脊髓打擊造模方法，先用2%烏拉他按7 ml/kg腹腔內(nèi)麻醉，成功后將大鼠俯臥在手術(shù)臺(tái)上，以胸12為中心去除大鼠毛發(fā)，常規(guī)消毒鋪巾，取后正中切口，切開皮膚約3 cm，暴露出棘突和椎板咬除后暴露硬膜囊，在硬膜表面放置一曲度和表面一致，面積約為0.5 cm的墊片，將玻璃墊片垂直放置在墊片上，然后將12 g克氏針在玻璃墊片引導(dǎo)下從約6 cm處垂直落下，打擊墊片，以大鼠雙下肢劇烈抽搐為有效打擊，取出墊片后棉片壓迫止血，縫合后無菌敷料包扎，術(shù)后青霉素80萬U肌肉注射，1次/d，連續(xù)1 w預(yù)防感染。

模型對(duì)照組以10 ml/kg胃內(nèi)灌注0.9%氯化鈉注射液，2次/d，連續(xù)2 w。激素組以5 mg/kg向靜脈內(nèi)注射地塞米松，2次/d，連續(xù)2 w。針刺聯(lián)合補(bǔ)陽還五湯組則以1∶200 ml生理鹽水稀釋后配制灌胃液，按10 ml/kg灌胃，2次/d，連續(xù)2 w；選22-24號(hào)針刺針為電極，在脊髓損傷平面的上下各一個(gè)節(jié)段的夾脊穴分別刺入2對(duì)針刺針針尖斜刺入脊柱方向，對(duì)L5-S1損傷者遠(yuǎn)側(cè)電極針可自骶裂孔連續(xù)刺入，1次/d，每次30 min，2 w為1個(gè)療程。

1.3實(shí)驗(yàn)試劑方法采用酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法檢測(cè)血清學(xué)指標(biāo)基質(zhì)衍生因子(SDF)-1和血清髓鞘堿性蛋白(MBP)，分別在動(dòng)物損傷后3、7、14 d取腹主動(dòng)脈血后置于4℃冰箱內(nèi)2 h，凝固離心后放置在離心機(jī)上經(jīng)1 500 r/min離心15 min，分離出血清后置于-80℃冰箱內(nèi)保存，檢測(cè)方法嚴(yán)格按照說明書步驟進(jìn)行操作。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS16.0軟件行方差分析。

2　結(jié)　果

2.1損傷后3組血清學(xué)指標(biāo)MBP水平比較模型對(duì)照組損傷后隨著時(shí)間推移MBP水平均升高，而激素組、針刺聯(lián)合補(bǔ)陽還五湯組則逐漸下降。模型對(duì)照組在損傷后3、7 d MBP水平明顯低于激素組和針刺聯(lián)合補(bǔ)陽還五湯組，14 d MBP水平明顯高于激素組和針刺聯(lián)合補(bǔ)陽還五湯組(P<0.05)，激素組和針刺聯(lián)合補(bǔ)陽還五湯組損傷后3、7、14 d MBP水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.2損傷后3組血清學(xué)指標(biāo)SDF-1水平比較3組損傷后隨著時(shí)間推移SDF-1水平均下降，其中模型對(duì)照組最高，針刺聯(lián)合補(bǔ)陽還五湯組最低。模型對(duì)照組損傷后3、7、14 d SDF-1水平明顯高于激素組、針刺聯(lián)合補(bǔ)陽還五湯組(P<0.05)，激素組和針刺聯(lián)合補(bǔ)陽還五湯組損傷后3、7、14 d SDF-1水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

與模型對(duì)照組比較：1)P<0.05

3　討　論

在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，髓鞘蛋白質(zhì)是由MBP等組成的，其占蛋白質(zhì)總量的30%左右〔2〕，該物質(zhì)位于髓鞘多層膜結(jié)構(gòu)的漿面，和髓鞘脂質(zhì)結(jié)合較為緊密，能維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓鞘結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定性，但由于血腦屏障作用，髓鞘堿性蛋白質(zhì)很容易釋放到腦脊液中，只有少量會(huì)釋放到血液中。研究〔3〕稱，中樞神經(jīng)出現(xiàn)實(shí)質(zhì)性損害后，特別是出現(xiàn)了髓鞘脫失時(shí)，構(gòu)成髓鞘主要蛋白質(zhì)的髓鞘堿性蛋白就會(huì)和結(jié)合脂質(zhì)出現(xiàn)分離現(xiàn)象，造成MBP劇烈升高。腦損傷后血清MBP水平和損傷嚴(yán)重程度為正相關(guān)，而MBP染色則明顯減少〔4〕。

急性脊髓損傷后神經(jīng)干細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)增殖、遷移和分化成神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞，而其中內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞則有修復(fù)損傷脊髓作用。研究〔5，6〕稱，SDF-1在小腦中能調(diào)節(jié)突觸傳遞作用，在成年大鼠損傷脊髓區(qū)其在損傷后2 h則會(huì)出現(xiàn)下降趨勢(shì)，這提示其對(duì)神經(jīng)具有可塑性和修復(fù)作用。

中醫(yī)將急性脊髓損傷辨證屬“痿證”范圍。由于外傷損傷督脈，導(dǎo)致瘀血阻滯不通，久則使病人元?dú)鈹?，或外感熱邪，耗傷津液，日久肝腎或腎督虧虛所致。其病位在督脈為主，與肺、肝、腎有關(guān)，其病性，早期以實(shí)證為主，晚期多為虛證〔7〕。中醫(yī)針刺抗脊髓損傷的機(jī)制認(rèn)為針刺抗脊髓損傷的作用可能與針刺改善患病部位的微循環(huán)和組織的新陳代謝，減輕受損組織的水腫和脊髓神經(jīng)的壓迫有關(guān)，同時(shí)，針刺可反射性地調(diào)節(jié)大腦和脊髓相應(yīng)神經(jīng)的細(xì)胞功能，提高脊神經(jīng)細(xì)胞對(duì)病變?cè)斐傻膲浩取⑷毖醯饶褪苄?，也屬針刺治療脊髓損傷機(jī)制〔8，9〕。

補(bǔ)陽還五湯具有補(bǔ)氣活血、疏通經(jīng)絡(luò)的功效，其中君藥味黃芪，有補(bǔ)益脾胃，促使氣血運(yùn)行通暢，瘀祛絡(luò)通作用；臣藥為當(dāng)歸，具有活血養(yǎng)血功效，加赤芍、桃仁、紅花等為佐藥，有活血祛瘀作用，全方優(yōu)勢(shì)是大量補(bǔ)氣藥和少量活血藥物相配合，氣行則血行，活血不傷正。而從現(xiàn)代藥理學(xué)上看，該中藥方劑能改善微循環(huán)，能改善血液流變學(xué)性質(zhì)，抗動(dòng)脈硬化，能促進(jìn)組織修復(fù)和再生，抑制膠原纖維合成，能增強(qiáng)免疫代謝功能，增加組織細(xì)胞興奮性，可促進(jìn)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞生長、存活和向神經(jīng)元分紅，促使神經(jīng)功能恢復(fù)正常。研究〔10，11〕稱，補(bǔ)陽還五湯能促進(jìn)大鼠海馬低糖低氧腦損傷作用，能誘導(dǎo)骨髓干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化，改善腦損傷后微環(huán)境，能降低SDF-1含量從而促進(jìn)細(xì)胞增殖和再生。研究〔12，13〕證實(shí)，其對(duì)脊髓損傷有恢復(fù)和促進(jìn)作用，而其機(jī)制可能是能促進(jìn)軸突再生；能抑制脂質(zhì)過氧化作用；能抑制細(xì)胞死亡，能保護(hù)神經(jīng)功能；能降低血小板活化因子含量，能抑制水通道蛋白-4表達(dá)，改善損傷后缺血和炎癥反應(yīng)。

本研究結(jié)果說明針刺聯(lián)合補(bǔ)陽還五湯能改善脊髓損傷功能，能促進(jìn)脊髓損傷后神經(jīng)再生和康復(fù)，可作為臨床上手術(shù)治療后的輔助治療方法之一。

1石繼祥，曹成福，紀(jì)斌，等.補(bǔ)陽還五湯對(duì)急性脊髓損傷大鼠神經(jīng)功能康復(fù)作用的研究〔J〕.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012；11(21)：1684-6.

2陳建良，張龍君，王水橋，等.補(bǔ)陽還五湯加味合甲基強(qiáng)的松龍治療急性脊髓損傷16例〔J〕.浙江中醫(yī)雜志，2013；45(2)：125.

3侯兆陽，陳哲，魏家森，等.補(bǔ)陽還五湯對(duì)急性脊髓損傷模型大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響〔J〕.浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015；5(1)：8-11，106.

4Inada T，Takahashi H，Yamazaki M，etal.Multicenter prospective nonrandomized controlled clinical trial to prove neurotherapeutic effects of granulocyte colony-stimulating factor for acute spinal cord injury：analyses of follow-up cases after at least 1 year〔J〕.Spine，2014；39(3)：213-9.

5彭祖年，姚曉勃.補(bǔ)陽還五湯對(duì)大鼠脊髓損傷后神經(jīng)功能影響的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012；14(5)：109-10.

6李保林，何洪陽，鄭重，等.加味補(bǔ)陽還五湯治療急性脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中醫(yī)正骨，2011；13(6)：3-4.

7柯曉華，葛杜鵑，王文春，等.運(yùn)動(dòng)點(diǎn)電針對(duì)急性脊髓損傷大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和降鈣素基因相關(guān)肽表達(dá)的影響〔J〕.中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2014；29(10)：913-7.

8徐斌，侯顯濤，于志海，等.一例犬急性脊髓損傷的針刺治療體會(huì)〔J〕.山東畜牧獸醫(yī)，2015；(2)：37-7，38.

9馬睿杰，孫連珠，張柳娟，等.電針結(jié)合減重步行訓(xùn)練對(duì)急性脊髓損傷大鼠巢蛋白和神經(jīng)生長因子表達(dá)的影響〔J〕.中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2015；30(6)：532-7.

10Zamarioli A，Battaglino RA，Morse LR，etal.Standing frame and electrical stimulation therapies partially preserve bone strength in a rodent model of acute spinal cord injury〔J〕.Am J Physical Med Rehabil，2013；92(5)：402-10.

11周葉軍，王興中.補(bǔ)氣活血通絡(luò)中藥治療急性脊髓損傷實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.浙江中醫(yī)雜志，2012；47(3)：208-10.

12趙永青，黃長勝，孫叢曉，等.脊復(fù)康對(duì)急性脊髓損傷大鼠行為影響的觀察〔J〕.中國骨傷，2013；16(4)：213-6.

13張敏，柴勇，楊成，等.補(bǔ)陽還五湯對(duì)大鼠脊髓損傷后移植神經(jīng)干細(xì)胞存活、增殖與遷移的影響〔J〕.神經(jīng)解剖學(xué)雜志，2011；27(3)：326-30.