2007-2016 年間山西雞禽流感和新城疫的免疫狀況調(diào)查分析＊

劉華棟，王彩先，唐娟，陸冰洋，李婷婷，丁樹(shù)榮，詹麗娥

（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 太原 030032）

新城疫在1927 年是由Doyle從英國(guó)的紐卡斯?fàn)柺校∟ewcastle）病雞中分離到的病原，命名為新城疫。新城疫的病原為新城疫病毒（NDV），屬于副粘病毒科、副粘病毒亞科、腮腺炎病毒屬的成員，是一種急性和高度接觸性傳染病，對(duì)養(yǎng)雞業(yè)造成了嚴(yán)重危害。國(guó)際獸醫(yī)局將新城疫列為A 類疫病。本病自從傳入我國(guó)后，在全國(guó)各地不斷有發(fā)病的報(bào)道，已經(jīng)成為危害我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)，造成經(jīng)濟(jì)損失最嚴(yán)重的禽病之一。我國(guó)動(dòng)物防疫與檢疫名錄也將其列為一類傳染性疾病。

禽流行性感冒（簡(jiǎn)稱禽流感，Avian Influenza，AI）主要的病原為流感病毒中的A 型流感病毒，其在感染后主要引起禽類的全身性或呼吸器官性傳染病。本病于1878年在意大利首次暴發(fā)，現(xiàn)已遍布世界各地。高致病性禽流感已經(jīng)被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織列為A 類動(dòng)物傳染病，我國(guó)也將其列為一類動(dòng)物疫病，禽流感的暴發(fā)和流行已經(jīng)給家禽養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失?，F(xiàn)已嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)，并危及到人類安全。

本調(diào)查從不同的地區(qū)采樣，對(duì)山西省不同市、區(qū)、縣的雞場(chǎng)進(jìn)行抗體監(jiān)測(cè)，通過(guò)數(shù)據(jù)的整理和總結(jié)，可以從這些數(shù)據(jù)中看出當(dāng)前山西省內(nèi)整體的雞場(chǎng)禽流感和新城疫的免疫狀況，并根據(jù)數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果可以為本省的養(yǎng)雞場(chǎng)在這兩種病的防控中提供一些思路和參考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 抗原和抗體 新城疫抗原、禽流感H9 抗原和禽流感H5 抗原購(gòu)于哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司，禽流感標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性和陰性血清購(gòu)于北京康農(nóng)興牧科技發(fā)展中心，新城疫病毒陽(yáng)性血清和陰性血清購(gòu)于哈爾濱獸醫(yī)研究所。

1.1.2 血清樣品 2007 年1 月—2016 年12 月，在山西不同地區(qū)不同規(guī)模的養(yǎng)雞場(chǎng)/戶按比例隨機(jī)采集血清樣品。

1.1.3 PBS緩沖液（p H7.0～7.2） 稱7.9g Na Cl，0.2g KCl，1.44g Na2HPO4和1.8g K2HPO4， 溶 于800mL 蒸餾水中，用HCl 調(diào)節(jié)溶液的p H 值至7.4，最后加蒸餾水定容至1L。121℃高壓滅菌20min，保存于4℃冰箱。

1.1.4 Alsever 液（ 阿 氏液） 葡萄糖 20.5g，檸檬酸三鈉（Na3C6H5O7·5H2O）8.0g， 氯化鈉4.2g，檸檬酸0.55g，加蒸餾水至1,000mL，充分溶解后用濾紙過(guò)濾，加熱溶解后將p H 值調(diào)到6.1，經(jīng)過(guò)69k Pa，15min 高壓滅菌，4℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.5 0.7%雞紅細(xì)胞懸液 用注射器吸取阿氏液1m L，采集雞血約2～4m L，與阿氏液混合離心。經(jīng)過(guò)3 次洗滌后，棄去上清液，配成0.7%的紅細(xì)胞懸液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.6 儀器與設(shè)備 96 孔V 型微量血凝反應(yīng)板，稀釋棒，滴管，微量振蕩器，分析天平，普通天平，普通離心機(jī)，高壓滅菌鍋，普通冰箱。

1.2 方法

1.2.1 抽樣方法和地區(qū) 本研究的抽樣方法為按照雞群大小抽樣，從中抽取0.5%～1%比例。抽樣地區(qū)為山西省的不同地區(qū)，在不同年份中，抽樣地區(qū)略有差異。本研究的抽樣地區(qū)有：文水、清徐、祁縣、太谷、原平、晉中、平遙、大同、運(yùn)城、介休、太原、昔陽(yáng)、長(zhǎng)治、中陽(yáng)、榆社、左權(quán)等16 個(gè)縣市。

1.2.2 血清樣品的采集及處理方法 本研究采取血樣的方法為：準(zhǔn)備長(zhǎng)約13cm 左右的輸液管，將被采樣雞的翅下靜脈刺破后收集到輸液管中，而后對(duì)其一端進(jìn)行火燒封口。封口后將其置于37℃恒溫培養(yǎng)箱，觀察血清析出情況，待析出血清后，置于4℃保存。

1.2.3 監(jiān)測(cè)方法 監(jiān)測(cè)方法是使用血凝和血凝抑制試驗(yàn)進(jìn)行，參考農(nóng)業(yè)部1999 年頒布的14 種動(dòng)物疫病檢測(cè)方法中的紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)（HI），微量法檢測(cè)被檢血清HI抗體效價(jià)。同一地區(qū)采樣的抗體水平為其所有樣品的平均值。

2 結(jié)果

1）通過(guò)試驗(yàn)對(duì)所收集到的樣品進(jìn)行抗體監(jiān)測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表1。

農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定雞新城疫和禽流感的抗體≥4log2 時(shí)判定為合格，參照此標(biāo)準(zhǔn)對(duì)10 年間的抗體效價(jià)分析，可以看出NDV 在2007、2009 和2013 年都存在不合格的情況，尤其是2013 年，在左權(quán)縣抗體水平最低，只有2.81log2。AIV（H5）抗體水平在2008、2012 和2016 年全部地區(qū)都合格，其他年份均有不合格地區(qū)。AIV（H9）抗體水平在2009、2010 和2013 年都存在不合格地區(qū)。

2）2007-2016 年抗體效價(jià)規(guī)律變化情況見(jiàn)圖1。

表1 不同年份山西地區(qū)抗體效價(jià)匯總表

由圖1 可見(jiàn)，經(jīng)過(guò)整體分析NDV、AIV（N5、N9）三種抗體平均水平在10 年間呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)，但是在2009 和2013 年抗體水平迅速下降。特別是在2009 年AIV（H5）抗體平均水平下降到合格線以下，以后年份的抗體水平均值都在合格線以上。

3）太谷縣連續(xù)6 年來(lái)雞群抗體水平變化情況見(jiàn)圖2 和圖3。

由圖2 可見(jiàn)，太谷縣10 年間血樣抗體水平變化情況，在2007-2010 年NDV、AIV（H5、H9）三種抗體水平高低差距較大，禽流感不同的型AIV（H5）和AIV（H9）之間的差距很大，2011-2014 年三種抗體水平高低比較接近，2015 年三種抗體水平高低差距最大，AIV（H5）抗體水平出現(xiàn)10 年內(nèi)的最低均值，為3.40log2，未達(dá)到農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)。2016 年三種抗體水平高低又接近。

太谷縣雞場(chǎng)10 年間抗體水平變化趨勢(shì)，NDV 的抗體效價(jià)在2012年前呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)，2012-2014年出現(xiàn)抗體水平極速下降，2015 年又迅速上升，2016 年又開(kāi)始下降。10 年整體來(lái)看，NDV 的抗體水平在6log2 上下，沿水平線發(fā)展。AIV（H5）的抗體水平在2012 年前也呈現(xiàn)緩慢上升趨勢(shì)，2012-2015 年又出現(xiàn)緩慢下降，2015 年達(dá)到最低點(diǎn)，在4log2 合格線以下。2016 年抗體水平有所上升，達(dá)到4.14log2，超過(guò)了4log2 合格線。AIV（H9）的抗體效價(jià)則10年整體呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，已經(jīng)從2007年 的7.56log2 下 降 到2016 年 的4.08log2，雖然在2008、2009、2012、2015 年都出現(xiàn)上升，但下降趨勢(shì)更明顯。NDV 和AIV（H9）的抗體水平在10 年間基本保持同升同降。

表1 （續(xù)）

圖1 山西地區(qū)不同年份抗體效價(jià)圖

圖2 太谷縣養(yǎng)殖場(chǎng)十年間三種抗體效價(jià)變化走勢(shì)圖

3 討論

從各地區(qū)在10 年間NDV、AIV（H5、H9）抗體水平監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的平均值可以發(fā)現(xiàn)抗體水平呈現(xiàn)出波浪式的變化，但總體呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，只 有AIV（H5）在2007 和2009年的抗體水平平均值未達(dá)到農(nóng)業(yè)部規(guī)定的抗體標(biāo)準(zhǔn)≥4log2，此后年份均未出現(xiàn)不達(dá)標(biāo)情況。這與山西地區(qū)發(fā)展側(cè)重具有相關(guān)性，山西地處中國(guó)中北部，地處黃土高原，多山地和丘陵地貌，不利于發(fā)展農(nóng)業(yè)，由于地下具有豐富的礦產(chǎn)資源，所以一直以來(lái)以發(fā)展重工業(yè)為主導(dǎo)，導(dǎo)致農(nóng)業(yè)發(fā)展相對(duì)滯后，農(nóng)業(yè)中又以畜牧業(yè)發(fā)展較為緩慢。早期，畜牧業(yè)多分散在偏遠(yuǎn)的農(nóng)村，以散養(yǎng)戶為主，不成規(guī)模，養(yǎng)殖技術(shù)落后，沒(méi)有科學(xué)的養(yǎng)殖方法，尤其是對(duì)疫苗免疫認(rèn)識(shí)不足，甚至不接受疫苗免疫，有的養(yǎng)殖戶雖然免疫，但沒(méi)有科學(xué)合理的免疫程序，以及操作技術(shù)不當(dāng)?shù)仍?，?dǎo)致免疫效果整體不好[1]。隨著養(yǎng)殖業(yè)的逐漸擴(kuò)大，養(yǎng)殖場(chǎng)逐漸認(rèn)識(shí)到免疫的重要性，抗體水平也呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)，但波動(dòng)較為明顯。很多因素在制約疫苗刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)力從而影響免疫效果。這就導(dǎo)致一些養(yǎng)殖場(chǎng)雖然免疫，但抗體水平較低。也可能是市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)的影響導(dǎo)致養(yǎng)殖數(shù)量增減，養(yǎng)殖成本投入增減具有相關(guān)性。但整體上升趨勢(shì)明顯，說(shuō)明養(yǎng)殖場(chǎng)的養(yǎng)殖水平在提高，觀念在轉(zhuǎn)變。

有研究表明在NDV 強(qiáng)毒流行的時(shí)候，沒(méi)有抗體或HI 抗體效價(jià)很低的雞群，通常會(huì)首先被感染，其感染后通過(guò)向周圍排毒而使得抗體水平較高的其它雞群也會(huì)感染發(fā)病[2]。農(nóng)業(yè)部規(guī)定，以抗體水平達(dá)到24 為合格參考線。有人也進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)，當(dāng)HI 滴度≤22，雞100% 死 亡； 在22～25 時(shí)，10%死 亡；在24～26，0% 死 亡[3-4]。由此可以認(rèn)為，HI 抗體水平的高低與雞群受強(qiáng)毒攻擊時(shí)的免疫保護(hù)力呈正相關(guān)。但也有學(xué)者認(rèn)為不能僅靠HI 抗體水平高低來(lái)判斷雞群是否安全，認(rèn)為HI 抗體水平與新城疫保護(hù)力兩者之間不一致[5-6]。抗體水平較高并不能阻止病毒的感染和增殖[7]。于是就有人提出HI 抗體平均水平才是衡量雞群免疫保護(hù)力的重要指標(biāo)，并通過(guò)試驗(yàn)證明當(dāng)HI抗體平均水平大于25，保護(hù)率可達(dá)90%～100%[8]。本調(diào)查采樣的雞群抗體平均水平在2009 年以后均達(dá)到24 農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)線，并未發(fā)現(xiàn)有任何臨床癥狀，這與其他學(xué)者的研究相符。由此可見(jiàn)，做好家養(yǎng)禽新城疫的免疫仍然是控制新城疫疫情的有效手段[9]。

有學(xué)者研究禽流感的抗體效價(jià)和抵抗禽流感感染保護(hù)力的相關(guān)性，在試驗(yàn)中證明當(dāng)HI 抗體臨界值為5log2 時(shí)，能夠抵抗致死劑量AIV（H5N2）的攻擊[10]。本調(diào)查結(jié)果顯示2011 年基本上可以作為一個(gè)分界，之前基本都不合格，在之后只有2015 年平均水平不合格，其他年份均達(dá)到5log2，說(shuō)明隨著年份增加，養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)AIV（H5）免疫的重視程度有所提高。

通過(guò)對(duì)太谷地區(qū)10 年的跟蹤監(jiān)測(cè)，可看出太谷縣相同養(yǎng)雞場(chǎng)在不同年間抗體水平波動(dòng)較大，尤其是AIV（H9）的抗體水平在2009年最高達(dá)到10.09log2，到2016年達(dá)到最低點(diǎn)4.08log2，NDV 和AIV（H5）也呈現(xiàn)出類似的波動(dòng)曲線，甚至在2015 年，AIV（H5）的抗體水平為3.4log2，下降到農(nóng)業(yè)部4log2 的合格標(biāo)準(zhǔn)線以下。經(jīng)過(guò)和養(yǎng)殖場(chǎng)管理人員溝通交流，確定這種抗體水平出現(xiàn)波動(dòng)與市場(chǎng)行情變化導(dǎo)致管理人員的重視程度、飼養(yǎng)人員的流動(dòng)以及疾病的流行情況有很大關(guān)系。

4 總結(jié)

養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)該具有嚴(yán)格的飼養(yǎng)管理制度，盡量避免外界因素的干擾，減少飼養(yǎng)人員的流動(dòng)，維持相對(duì)穩(wěn)定的、均衡的高抗體水平有利于抵御病毒的侵襲。■