HPLC法測定藏藥白花秦艽不同部位中龍膽苦苷的含量△

陳 靜

(西藏藏醫(yī)學(xué)院，西藏 拉薩 850000)

白花秦艽藏語解吉嘎保Gentiana straminea Marin.，為龍膽科麻花秦艽，主要分布于西藏、四川西部、湖北西部、青海、甘肅、寧夏，生長在海拔2000～4950m的山坡、草地、灌叢、河灘，其以花入藥，性味苦、平，藏醫(yī)臨床用于清熱消腫，解毒熱，治胃?。?-3］。文獻(xiàn)報(bào)道［4-6］，龍膽苦苷是龍膽科植物的特征性成分，可用于理化鑒別和品質(zhì)評價(jià)。本文采用高效液相色譜法測定白花秦艽不同部位中的龍膽苦苷含量，進(jìn)行含量分析，為藏藥白花秦艽藥材的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器:Waters-e2695高效液相色譜儀(美國Waters，2998型紫外檢測器)，PL202-L型電子天平(Metteler Tole Do)。

1.2 試藥:龍膽苦苷對照品購于成都普菲德生物技術(shù)有限公司，批號:130426;白花秦艽藥材采于西藏自治區(qū)林芝地區(qū)，經(jīng)西藏自治區(qū)藥材鑒定專家嘎務(wù)副教授鑒定為正品;甲醇為色譜純(進(jìn)口)，水為去離子水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn):色譜柱:Waters SunFire C18(4.6mm ×150mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇 -水(30:70);流速1.0mL/min;檢測波長:254nm;理論塔板數(shù)按龍膽苦苷峰算不低于3000。該條件下，龍膽苦苷對照品與供試品保留時(shí)間相同，如圖1所示。

圖1 龍膽苦苷與供試品高效液相色譜圖

2.2 對照品溶液的配制:精密稱取已處理的龍膽苦苷對照品 0.0100g，加甲醇制成 10mL，濃度為 1.0mgμmL-1的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備:精密稱取白花秦艽莖、花樣品粉末約0.2g，分別置于50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，超聲處理30min，0.45μm濾膜濾過，續(xù)濾液作供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察:精密吸取對照品溶液 0.1，0.3，0.5，1.0，2.0mL，置于 10mL 容量瓶中，以甲醇定容至刻度，每次進(jìn)樣10μL，依次注入高效液相色譜儀，得線性回歸方程:Y=7895.9X+4752.5，r2=0.9996。結(jié)果表明，龍膽苦苷在0.05～2μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度考察:精密吸取一批對照品溶液，分別注入液相色譜儀，測定龍膽苦苷的峰面積，RSD為0.99%，結(jié)果顯示精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性考察:取同一供試品溶液，分別放置0，4，8，12，18，24(h)，注入液相色譜儀，測定龍膽苦苷峰面積，RSD為2.41%，表明在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性考察:取同一樣品粉末6份，按供試品溶液制備方法制備成樣品溶液，分別注入液相色譜儀，依法測定龍膽苦苷峰面積，RSD為1.91%。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn):取已知含量的同一樣品白花秦艽花粉末5份，每份約0.1g，精密稱定，精密加入對照品適量，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，注入高效液相色譜儀，測定龍膽苦苷的峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

3 含量測定

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

分別精密吸取白花秦艽不同部位供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，按建立的方法測定龍膽苦苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 白花秦艽莖、花中龍膽苦苷的含量測定結(jié)果

4 討論

檢測波長的選擇:采用Waters-e2695 2998型紫外檢測器在200～400nm波長范圍掃描，龍膽苦苷在254nm處有最大吸收，選定254nm為檢測波長。

檢測結(jié)果表明，白花秦艽不同部位中龍膽苦苷的含量存在較大差異，花的含量明顯高于莖，與藏醫(yī)臨床用藥部位選擇相符。

［1］帝瑪爾·丹增彭措著.毛繼祖，林鵬程，吉守祥，等譯.晶珠本草［M］.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，2012:144.

［2］國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草·藏藥卷［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2002:260-261.

［3］羅達(dá)尚.中華藏本草［M］.北京:民族出版社，1997:185.

［4］紀(jì)蘭菊，馬玉花，陳桂琛，等.藏藥麻花秦艽中苦苷類成分的含量測定及品質(zhì)評價(jià)［J］.西北植物學(xué)報(bào)，2004，24(2):292～295.

［5］馬玉花，孫峰，孫菁，等.藏藥麻花秦艽的研究進(jìn)展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，33(9):1698 ～1699，1746.

［6］李海歐，唐傳禹，宋宏春.HPLC法測定蒙藥材小秦艽花中龍膽苦苷的含量［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，2012，(2):54～55.