蒙藥冬青葉-7膠囊的鎮(zhèn)咳祛痰抗炎藥理作用及急性毒性實(shí)驗(yàn)研究

李英格 薩仁圖雅 安 達(dá) 王 歡

(1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000;2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

蒙藥冬青葉-7膠囊由冬青葉、北沙參等7味藥組成的民間驗(yàn)方。該方具有清“巴達(dá)干”、熱邪、化痰散結(jié)、平喘通絡(luò)作用。臨床上多年用于急、慢性氣管炎，支氣管炎，肺氣腫，肺心病，哮喘，慢性咳嗽等癥療效較佳［1，2］。本實(shí)驗(yàn)對冬青葉-7膠囊進(jìn)行了鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎作用的研究，為該方劑的進(jìn)一步開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器與試劑:YP型電子天平，上海越平科學(xué)儀器有限公司;AR:1140型電子天平，奧豪斯國際貿(mào)易(上海)有限公司;UV-240型號紫外分光光度計(jì)(島津);氨水、酚紅、二甲苯市售。

1.2 動物:昆明種小鼠，18～22g，雌雄各半，購于吉林省長春市億斯實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司;批準(zhǔn)號:SCXK(吉)-2011-0004。

1.3 藥物:蒙藥冬青葉-7膠囊，由內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院蒙藥制劑室提供，批準(zhǔn)號:2012091601;七味冬青葉散，內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院蒙藥制劑室提供，批準(zhǔn)號:20120809:桂龍咳喘寧膠囊，桂龍藥業(yè)(安微)有限責(zé)任公司，批準(zhǔn)號:Z20053135。

2 實(shí)驗(yàn)方

2.1 鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn)［3］:取84只小鼠，按體重隨機(jī)分為空白組，陽性組，七味冬青葉散組，蒙藥冬青葉-7膠囊低(0.225g/Kg)、中(0.45g/Kg)、高(0.9g/Kg)劑量等 6 組，每組 12 只。每組小鼠分別灌胃0.2ml/10g(體重)0.3%CMC-Na溶液，桂龍咳喘寧膠囊混懸液，七味冬青葉散混懸液，連續(xù)給藥7d。末次給藥1h后，將小鼠放入引喘儀內(nèi)，以20%氨水噴霧10s并記錄2min內(nèi)咳嗽次數(shù)及首次咳嗽時(shí)間(潛伏期)，以小鼠腹肌收縮或縮胸，同時(shí)張大嘴為咳嗽指標(biāo)，結(jié)果見表1。

2.2 酚紅祛痰法［4］:按上述分組給藥，末次給藥后1h，各小鼠按0.2ml/10g(體重)腹腔注射3%酚紅。注射酚紅1h后，脫頸椎處死小鼠，剝離氣管周圍組織，剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管并放入盛有2ml生理鹽水的試管中，再加入5%碳酸氫鈉溶液0.1ml，離心0.5h，取上清液，用紫外可見分光光度計(jì)于波長546nm測吸光度，結(jié)果見表2。

2.3 二甲苯耳腫脹實(shí)驗(yàn)［5，6］:分組和給藥法跟上述一致，末次給藥0.5h后，用微量進(jìn)樣器取0.04ml二甲苯均勻涂在各小鼠右耳正反面，同樣左耳涂等量的蒸餾水。致炎1h后，頸椎脫臼處死小鼠，用直徑為6mm打孔器雙耳同一部位等面積打下耳片并用電子天平稱重(mg)，求左右耳片重量之差作為耳腫脹度。腫脹度(mg)=致炎耳重(mg)-對照耳重(mg)。結(jié)果見附表3。

2.4 急性毒性實(shí)驗(yàn)［7，8］

2.4.1 急性毒性預(yù)試驗(yàn):將小鼠禁食12h后按體重隨機(jī)分兩組，給藥組和空白組，每組6只，雌雄各半。給藥組按0.3ml/10g(體重)灌胃蒙藥冬青葉-7膠囊混懸液1次，空白組灌胃等體積0.3%CMC-Na溶液。根據(jù)小鼠死亡情況作適當(dāng)調(diào)整，找出蒙藥冬青葉-7膠囊100%死亡率(LD100值)、0%死亡率(LD0值)和相應(yīng)的劑量組間距r值并進(jìn)行半數(shù)致死量(LD50)的測定。按最大容積(0.3ml/10g)2次/1d，間隔6h，灌胃給藥進(jìn)行最大耐受量(MTD)和最大給藥量的測定。

經(jīng)蒙藥冬青葉-7膠囊急性毒性預(yù)試驗(yàn)，全部小鼠存活，未測出LD50。所以進(jìn)一步進(jìn)行最大耐受量(MTD)和最大給藥量的正式試驗(yàn)。

2.4.2 急性毒性正式實(shí)驗(yàn):取40只小鼠，雌雄各半，按體重分兩組，分別為給藥組和空白組，每組20只。將小鼠禁食12h后，給藥組按0.3ml/10g(體重)灌胃蒙藥冬青葉-7膠囊混懸液1次，空白組灌胃等體積CMC-Na溶液。隔6h再同量給藥1次。給藥后4h結(jié)束禁食，連續(xù)14d觀察小鼠毒性反應(yīng)情況(如，出現(xiàn)毒性反應(yīng)詳細(xì)記錄癥狀出現(xiàn)、加重、減輕或死亡的時(shí)間和出現(xiàn)反應(yīng)的動物數(shù)量，計(jì)算動物死亡率)。第14d處死存活動物，解剖肉眼觀察臟器情況，計(jì)算MTD值及人臨床你用計(jì)量的倍數(shù)。

觀察指標(biāo):小鼠的體重，外觀，行為，分泌物，排泄物等詳細(xì)記錄毒性反應(yīng)出現(xiàn)的起始時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間和是否可逆等。如果有死亡的應(yīng)及時(shí)進(jìn)行大體解剖并肉眼觀察，任何器官出現(xiàn)體積、顏色、質(zhì)地等改變時(shí)，應(yīng)記錄并進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

2.5 數(shù)據(jù)處理:實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS21.0軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間差異用單因素方差分析，作F檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 對小鼠鎮(zhèn)咳作用的影響:與空白對照組相比，蒙藥冬青葉-7膠囊中、高劑量組和陽性對照組都明顯減少咳嗽次數(shù)并顯著延長咳嗽潛伏期(P＜0.01);蒙藥冬青葉-7膠囊低組，原藥組有減少咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期(P＜0.05)。表明蒙藥冬青葉-7膠囊對氨水誘導(dǎo)的小鼠咳嗽具有一定的鎮(zhèn)咳作用，結(jié)果見表1。

表1 蒙藥冬青葉-7膠囊的鎮(zhèn)咳作用±S)

表1 蒙藥冬青葉-7膠囊的鎮(zhèn)咳作用±S)

注:與空白對照組相比:*P ＜ 0.05，＊＊ P ＜0.01;n=12

組別 引咳潛伏期(s) 咳嗽次數(shù)(次)空白對照組16.00 ±3.13 14.20 ±2.20冬青葉 -7 膠囊低 20.40 ±2.01* 10.70 ±1.57*冬青葉 -7 膠囊中 22.60 ±3.06* 9.30 ±1.16*冬青葉 -7 膠囊高 20.90 ±2.56* 7.50 ±1.58＊＊七味冬青葉散 20.50 ±1.72* 7.20 ±1.14*陽性對照組組 28.20 ±4.65* 6.70 ±0.95＊＊

3.2 對小鼠祛痰作用的影響:與空白對照組比較，蒙藥冬青葉-7膠囊中、高劑量組，原藥組和陽性對照組都明顯祛痰作用(P＜0.01);蒙藥冬青葉-7膠囊低劑量組有排痰作用(P＜0.05)。表明蒙藥冬青葉-7膠囊能增加小鼠呼吸道分泌物，通過稀釋痰液起到祛痰作用，結(jié)果見表2。

表2 蒙藥冬青葉-7膠囊的祛痰作用±S)

表2 蒙藥冬青葉-7膠囊的祛痰作用±S)

注:與空白對照組相比:*P ＜ 0.05，＊＊ P ＜0.01;★P ＜0.05，n=12

組別 吸光度空白對照組0.4695 ±0.1051冬青葉 -7膠囊低 0.7022±0.1409*冬青葉 -7 膠囊中 0.8921 ±0.0751★冬青葉 -7 膠囊高 0.9810 ±0.1301★七味冬青葉散 0.8331 ±0.1037★陽性對照組組 0.9951 ±0.5718★

3.3 對小鼠抗炎作用的影響:與空白對照組比較，蒙藥冬青葉-7膠囊中、高劑量組，原藥組和陽性對照組對耳腫脹都有明顯抑制作用(P＜0.01);蒙藥冬青葉-7膠囊低劑量組對耳腫脹有抑制作用(P＜0.05)。表明蒙藥冬青葉-7膠囊能抑制小鼠耳腫脹而起到抗炎作用。結(jié)果見表3。

表3 蒙藥冬青葉-7膠囊對二甲苯致小鼠耳腫脹影響±S)

表3 蒙藥冬青葉-7膠囊對二甲苯致小鼠耳腫脹影響±S)

注:與空白對照組相比:＊＊P＜0.01;n=12

組別 腫脹度(mg)空白對照組3.49 ±0.17冬青葉 -7膠囊低 3.06±0.14＊＊冬青葉 -7膠囊中 2.70±0.19＊＊冬青葉 -7膠囊高 2.53±0.23＊＊七味冬青葉散 2.82 ±0.10＊＊陽性對照組組 2.46 ±0.26＊＊

3.4 急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果:蒙藥冬青葉-7膠囊連續(xù)2次灌胃給予小鼠后，在給藥即可出現(xiàn)短暫的活動減少，但給藥2h后恢復(fù)正常。其余外觀、飲食、飲水、一般行動、分泌物、排泄物連續(xù)觀察14d均無異常。空白組小鼠灌胃等體積CMC-Na后，外觀、飲食、飲水、一般行動、分泌物、排泄物均無異常，病理解剖未見臟器明顯而由藥物引起的病理變化。連續(xù)觀察14d，兩組無動物死亡。蒙藥冬青葉-7膠囊灌胃給予小鼠，小鼠的最大耐受量(MTD)9g/Kg，相當(dāng)于成人臨床你用劑量的133.3倍。小鼠的最大耐受量倍數(shù)=(小鼠的耐受藥量(g)/成人平均體重(g))/(小鼠的平均體重(g)成人每日用藥量(g))

4 討論

蒙藥冬青葉-7膠囊為原來七味冬青葉散劑改為膠囊的新劑型，臨床上多年用于急、慢性氣管、支氣管炎，慢性咳嗽，肺纖維化等癥療效較理想。但對其該方的鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎作用研究至今尚未見相關(guān)報(bào)道。冬青葉是該方的主要配方，研究表明冬青葉的有效成分倍半萜類化合物，對小鼠濃氨水誘導(dǎo)的咳嗽有明顯的鎮(zhèn)咳作用;對小鼠酚紅排泄試驗(yàn)證明，所含倍半萜和萜類化合物對組胺所致支氣管痙攣有防治等作用［9］。丹參也是該方的成分之一，肌注丹參注射液對角叉菜致大鼠足跖部炎癥有明顯的抑制作用。甘草具有抗炎，鎮(zhèn)咳，祛痰作用。從本試驗(yàn)研究表明蒙藥冬青葉-7膠囊能明顯延長氨水誘導(dǎo)的小鼠咳嗽潛伏期，降低咳嗽次數(shù)，提示該方具有明顯的鎮(zhèn)咳作用;同樣劑量還可促進(jìn)小鼠氣管的酚紅排泌量，增加小鼠氣管痰液分泌量，提示該方具有明顯祛痰作用;該方對二甲苯致小鼠耳腫脹也有明顯的抑制作用，表明該方具有明顯的抗炎作用。

［1］李英格.蒙藥復(fù)方冬青葉膠囊治療肺間質(zhì)纖維化的臨床療效觀察［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，2008，(11):26

［2］李英格.蒙藥復(fù)方冬青葉膠囊治療慢性咳嗽240例療效觀察［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，2010，7

［3］周延萌，張小敏，王一林，等.苦苣菜水提物的鎮(zhèn)咳祛痰及抗炎作用研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012，23(4):1027

［4］侯仙明，張凱，王亞利，等.肉桂鎮(zhèn)咳祛痰及平喘作用的藥效學(xué)研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2009，20(4):831

［5］李學(xué)堅(jiān)，胡文姬，杜正彩，等.析因分析法研究槲皮素對芒果苷抗炎祛痰作用的影響［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012，23(1):27，28

［6］趙協(xié)慧，袁明，馬玉花.藏藥茜草膠囊鎮(zhèn)痛抗炎藥效學(xué)研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2010，21(2):382

［7］李儀奎，金諾敏，王欽茂.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.上海，上海科學(xué)技術(shù)出版社，2006

［8］謝元璋，孫蓉，張亞囡，等.養(yǎng)血生發(fā)膠囊對小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國藥物警戒，2011，4:209

［9］國家中醫(yī)藥管理局.中華本草(蒙藥卷)［M］.上海:上?？茖W(xué)出版社，2004，9:171