種雞場ELISA數(shù)據(jù)分析淺析

華裕農(nóng)業(yè)科技有限公司 河北蛋雞繁育工程技術研究中心 056000

ELISA檢測已成為種雞場評估雞群健康狀況的一種常用手段，主要用于垂直傳播性疾病感染水平、疫苗免疫后效果的評價，以及雛雞產(chǎn)品質量的評估等。目前常用試劑為IDEXX產(chǎn)品，但在檢測過程中會對數(shù)據(jù)產(chǎn)生質疑，故對此進行簡單的分析，也希望與同行進行交流。

1 白血病檢測

簡稱ALV，屬于腫瘤性疾病，可以垂直和水平傳播，ALV-Ag檢測采用雙抗體捕獲法檢測抗原，也就是我們常說的P27抗原檢測，為IDEXX家禽產(chǎn)品ELI檢測唯一的抗原檢測方法。樣本為蛋清、肛拭子等，該檢測陽性不能區(qū)分是否為內(nèi)源性白血病。血清檢測方面主要包括ALV-J亞型抗體及ALV-A/B亞型，目前通常日齡較大的雞群會有抗體陽性檢出，但ALV-Ag檢測多為陰性，表明雞群還在安全狀態(tài)。很多公司現(xiàn)在把血清學檢測作為一個參考，重點是把P27抗原結果和抗凝全血病原分離結果作為最終判定。目前常用的病原分離細胞為DF-1細胞，病原分離也是公認的白血病檢測標準。

2 網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥抗體檢測

簡稱REV，與季節(jié)性有很大關系，和蚊蟲傳播相關?，F(xiàn)在國內(nèi)報道會有抗體陽性檢出的結論，但抗體陽性率普遍較低，維持在3%以內(nèi)。驗證是否存在野毒感染，也常用到病毒分離的方法，一般會用到DF-1細胞，樣品是抗凝全血，最終用PCR或免疫熒光手段進行鑒定。陽性場區(qū)要加強種雞管理，注意病毒性疾病的發(fā)生，同時也要關注種雞下一代的抗體水平。

REV在大日齡雞中會有檢出，但雞群不會有臨床癥狀。目前普遍認為10%以內(nèi)為安全范圍，但是小日齡陽性率較高可能會出現(xiàn)腫瘤疾病的發(fā)生，可以跟蹤檢測抗體陽性率及抗體滴度變化做動態(tài)觀測。

3 滑液囊支原體抗體檢測

簡稱MS，為眼下困擾種雞養(yǎng)殖的主要疾病之一。IDEXX公司認為，無滅活苗免疫轉陽前6周為感染日齡，而且在MS滅活苗免疫后抗體滴度超過6000，就存在野毒感染。現(xiàn)在普遍認為抗體滴度高于6000，表明關節(jié)腔內(nèi)已經(jīng)感染，再用藥物防控效果不會很好。目前MS活苗在國內(nèi)已開始少量使用，因其主要是占位效應，所以免疫時間很重要，應盡早免疫，控制在20日齡以內(nèi)，而且免疫后不要使用MS防控藥物。評估辦法是免疫后陽性率很低，同時在不同日齡采集咽拭子進行PCR檢測，并要區(qū)分是否為野毒感染，最終制定防控方案。

4 MG抗體檢測

目前MG的感染情況要低于MS，常用疫苗為F株、6/85和TS-11，如果想開展疾病凈化，就要按照毒株強弱進行使用。目前MG的免疫也屬于占位效應，產(chǎn)生體液抗體的能力較弱。普遍認為6/85免疫后6周檢測均為陰性、TS-11免疫后6周陽性率在20%以內(nèi)，而且抗體滴度控制在2000以內(nèi)，做該免疫要做到免疫前雞群為陰性，免疫后2周不用藥物防控。如果免疫前轉陽，會對疫苗的效果產(chǎn)生影響?，F(xiàn)實中支原體的防控藥物常為泰樂菌素、土霉素和利高霉素等。

目前MG、MS免疫是同日齡免疫，TS-11與MSH株在咽喉在存在競爭占位效應，同時保證免疫前雞群為陰性狀態(tài)，可以在免疫前進行藥物凈化。目前采集咽拭子進行MS PCR檢測較為常用，但對于免疫活苗場區(qū)活苗和野毒區(qū)分仍是國內(nèi)檢測的難點。

5 CAV抗體檢測

CAV可感染早期雛雞，因此母源抗體很重要。IDEXX建議在16周齡開展檢測，無論免疫雞群或野毒感染均要達到100%抗體陽性。如果雛雞35日齡之內(nèi)沒有疾病發(fā)生，表明母源保護良好。如果出現(xiàn)免疫抑制、皮膚潰爛等現(xiàn)象，即表明可能存在感染。目前CAV抗體水平在各場的差異較大，有的能達到100%陽性，有的則很低，因此也要進行綜合評價。

目前活疫苗免疫后抗體陽性率并不高，可能與細胞免疫有關，而且可以長期處于較低陽性率水平，可能表示與免疫后感染壓力不大有關。尤其CAV檢測同場區(qū)個別大日齡批次陽性率高比較好，但是發(fā)現(xiàn)個別批次陽性率較低，此時可能與環(huán)境生物安全較好有關。此時可以在短時間內(nèi)降低標準或進行免疫，提高陽性率，以降低下一代雛雞早期感染的風險。

6 REO抗體檢測

目前國內(nèi)的陽性率偏高，有人認為可以將其作為場區(qū)生物安全是否良好的一個指標。因其屬于環(huán)境中常在病毒，抗體滴度可能很高，但無臨床癥狀。個人認為，目前評價場區(qū)REO情況的主要指標為臨床表現(xiàn)，但要注意與MS進行區(qū)分。

7 IBV抗體檢測

IBV屬于免疫項目，目前我們檢測到父母代0日齡母源抗體滴度基本在600～4000，離散度為40%左右，28日齡檢測陽性率在40%以內(nèi)，抗體值處于臨界值。56天抗體值在1000～4000，離散度在60%以內(nèi)，抗體陽性率接近100%。84天陽性率在4000～5000，陽性率為100%，離散度在40%左右。有人認為，抗體滴度超過15000，雞群可能存在感染，因此要注意防控，尤其在雛雞階段。

IBV檢測由于疫苗種類較多，如果單純的疫苗免疫產(chǎn)生的抗體，離散度會很大，介于60%以上也屬于正常狀態(tài)，過低的離散度反而是病毒耐過后表現(xiàn)。同時指出父母代雛雞抗體滴度不能低于2000，商品代不能低于1500。

8 IBD抗體檢測

目前我們檢測到的父母代0日齡母源抗體滴度基本在4000～5000，陽性率接近100%，離散度在40%以內(nèi)。28日齡陽性率為40%～60%，處于母源抗體衰減階段。IBD對雛雞早期影響較大，目前抗體檢測整體良好。就IBV、IBD等免疫項目的研究，IDEXX建議進行基準線確立，因每個場區(qū)環(huán)境壓力不同，因此我們的數(shù)據(jù)不是絕對值。

AE現(xiàn)在有流行趨勢，大日齡雞無明顯病理變化，但是降蛋會很嚴重，雛雞感染會有一定的臨床表現(xiàn)。

綜上所述，種雞場ELISA評估涉及到很到方面，如疫苗種類、免疫途徑、雞群臨床表現(xiàn)等，因此數(shù)據(jù)分析設計的面很廣，如果能做到全面分析，對雞群的潛在風險就可以起到預警作用。