腫瘤的免疫療法及其作用機(jī)制概述

施米麗，劉曉波

(大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000)

腫瘤的治愈一直都是臨床難題，三大傳統(tǒng)抗癌手段在臨床上都有一定的治療效果，這三種治療手段的進(jìn)步，在延長(zhǎng)癌癥患者的生存時(shí)間，改善患者的晚期生存質(zhì)量中做出了突出貢獻(xiàn)，但在大部分癌癥的治愈中仍面臨著嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，其療效的提高依然受到很大的限制[1]。

手術(shù)切除腫瘤只局限于癌癥早期，然而很多癌癥早期無(wú)法發(fā)現(xiàn)，此方法對(duì)晚期癌癥預(yù)后非常差，手術(shù)治療不僅會(huì)促使腫瘤轉(zhuǎn)移還會(huì)使身體機(jī)能受到或多或少的損傷?；瘜W(xué)療法的療效并不確切，其特異性很小，所以在抗腫瘤的同時(shí)會(huì)損害正常身體組織，其帶來(lái)的不良反應(yīng)非常多，致使癌癥患者在治療期間非常痛苦。放射療法同樣也會(huì)損傷正常細(xì)胞，放射療法的副作用也普遍存在[2]。傳統(tǒng)的抗腫瘤的方法基本無(wú)法治愈，還帶有患者無(wú)法承受的副作用，所以人們一直在尋找新的治療手段來(lái)彌補(bǔ)傳統(tǒng)手段的不足。尤其是腫瘤的免疫療法[3]，這是目前腫瘤治療的補(bǔ)充[4]。腫瘤的免疫療法是通過(guò)增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的能力，加強(qiáng)和指導(dǎo)人體免疫系統(tǒng)識(shí)別腫瘤特異性抗原，從而根除腫瘤細(xì)胞。 18世紀(jì)末期，研究人員就一直在試圖研究免疫療法在腫瘤方面的應(yīng)用，其正式開始于1891年，在1909年，Paul Ehrlich的假設(shè)中指出，免疫系統(tǒng)可以抵抗癌癥的發(fā)展而保護(hù)宿主，從而為“癌癥免疫監(jiān)視”理論奠定基礎(chǔ)。1999年Rosenberg S的主流癌癥治療的研究達(dá)到了免疫療法的高潮，被《Science》雜志提名為“突破”。直到過(guò)去10年，免疫療法在癌癥治療中才真正進(jìn)入主流臨床實(shí)踐[5]。2013年Couzin-Frankel J的免疫治療在癌癥歷史上是抗腫瘤免疫療法的里程碑[6]。腫瘤的免疫療法是通過(guò)抗原來(lái)刺激先天免疫和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)，從而提高免疫系統(tǒng)的激活狀態(tài)，來(lái)達(dá)到抗腫瘤的目的[7]。

1　腫瘤的主動(dòng)免疫療法

1.1　腫瘤疫苗的研究背景

腫瘤的主動(dòng)免疫治療主要是利用腫瘤細(xì)胞的免疫原性，采用各種有效的免疫手段，使宿主免疫系統(tǒng)產(chǎn)生對(duì)腫瘤抗原的抗腫瘤免疫應(yīng)答，具體是給宿主注射以具有抗原性的疫苗[8](腫瘤疫苗)，腫瘤疫苗接種是一項(xiàng)具有吸引力的理論戰(zhàn)略基礎(chǔ)，許多正在進(jìn)行的試驗(yàn)中，正在使用肽疫苗、細(xì)胞疫苗或基于病毒的方法來(lái)刺激適應(yīng)性免疫系統(tǒng)識(shí)別和攻擊腫瘤細(xì)胞[9]。早在1902年就有研究人員利用瘤苗進(jìn)行抗腫瘤的實(shí)例，這也是免疫療法用于抗癌癥的開端。腫瘤疫苗治療癌癥經(jīng)歷了盲目嘗試階段，此階段腫瘤疫苗治療癌癥未獲肯定的療效。之后又經(jīng)歷曲折進(jìn)展階段和發(fā)展階段，此階段的突破是瘤苗研究新的里程碑。隨著腫瘤疫苗研究的不斷進(jìn)步和發(fā)展，腫瘤疫苗的耐受性好、毒性低、靶向性高等優(yōu)點(diǎn)也陸續(xù)的體現(xiàn)出來(lái)了，并預(yù)示著其在抗腫瘤方面的發(fā)展前景。臨床很多的癌癥實(shí)例證明，腫瘤疫苗對(duì)很多種類的癌癥患者都有很好的療效。研究顯示，腫瘤疫苗具有部分有效性、 安全性和耐受性等特點(diǎn)，這為癌癥的免疫治療展示了新的研究前景。

1.2　腫瘤疫苗抗腫瘤的作用機(jī)制

1.2.1通過(guò)激活免疫系統(tǒng)攻擊腫瘤細(xì)胞基因疫苗是根據(jù)免疫反應(yīng)的特性而設(shè)計(jì)的。一般情況癌細(xì)胞表面具有特異性抗原，并且能被免疫系統(tǒng)識(shí)別、破壞和清除[10]。當(dāng)腫瘤細(xì)胞缺乏抗原表位或有非常弱的抗原的情況下，腫瘤會(huì)發(fā)生免疫逃逸，腫瘤細(xì)胞就不會(huì)被免疫系統(tǒng)識(shí)別[11]，而發(fā)揮不了清除腫瘤細(xì)胞的作用。因此可以從增強(qiáng)其免疫原性方面來(lái)入手，設(shè)計(jì)一個(gè)抗腫瘤的方法(基因疫苗的接種)。將基因片段插入到真核表達(dá)載體中，形成基因疫苗質(zhì)粒。然后肌肉注射基因疫苗質(zhì)粒到癌癥患者體內(nèi)，這種基因會(huì)編碼能被免疫系統(tǒng)攻擊的抗原，能促使患者的免疫系統(tǒng)攻擊腫瘤細(xì)胞[12]。

1.2.2通過(guò)激活T細(xì)胞抗腫瘤當(dāng)腫瘤發(fā)生免疫逃逸時(shí)，會(huì)出現(xiàn)共刺激分子及某些黏附因子的缺乏，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)不能發(fā)揮強(qiáng)大的抗腫瘤作用[13]。由此設(shè)計(jì)了肽和蛋白疫苗(腫瘤抗原肽)，腫瘤抗原肽以抗原遞呈細(xì)胞(antigen presenting cells,APC)的MHCⅠ遞呈途徑到達(dá)T細(xì)胞表面,以抗原肽為基礎(chǔ)的疫苗直接表達(dá)腫瘤相關(guān)性抗原(tumor-associated antigen，TAA), TAA來(lái)源的抗原肽能夠成功誘導(dǎo)CD8和CD4相關(guān)的特異性T細(xì)胞免疫應(yīng)答，其治療效果強(qiáng)、毒性更低[14-15]，抗原肽疫苗能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性T細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)反應(yīng)。在腫瘤進(jìn)展過(guò)程中，盡管抗原特異性T細(xì)胞可誘發(fā)適應(yīng)性免疫應(yīng)答，但免疫選擇產(chǎn)生損失主要組織相容性復(fù)合物(MHC)Ⅰ類和Ⅱ類抗原的腫瘤細(xì)胞變體，并減少平衡期腫瘤抗原量。 此外，腫瘤衍生的可溶性因子有助于逃避免疫攻擊，允許進(jìn)展和轉(zhuǎn)移[16]，因此，腫瘤會(huì)發(fā)生免疫逃逸，引起不徹底的免疫反應(yīng)，所以設(shè)計(jì)了樹突狀細(xì)胞(dendritic cell,DC)疫苗，DC疫苗被分類為“人體細(xì)胞、組織或細(xì)胞”為基礎(chǔ)的疫苗。DC疫苗是利用體外培養(yǎng)得到的，從體內(nèi)分離白細(xì)胞CD14+單核細(xì)胞，體外培養(yǎng)5 d～6 d，在粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor，GM-CSF)和白細(xì)胞介素4(interleukin 4，IL-4)刺激下，單核細(xì)胞分化為未成熟的樹突狀細(xì)胞，然后給予促炎癥細(xì)胞因子腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、IL-1β、IL-6的雞尾酒，以及前列腺E2(prostaglandin E2,PGE2)2 d可誘導(dǎo)DC成熟，可得DC疫苗，將其皮內(nèi)注射到淋巴結(jié)附近皮膚后，DC會(huì)使用它們的趨化因子受體從皮膚遷移,通過(guò)淋巴管到達(dá)淋巴結(jié)[17]，激發(fā)T細(xì)胞參與的抗腫瘤免疫反應(yīng)，還能發(fā)揮DC抗原遞呈功能，來(lái)達(dá)到抗腫瘤的目的[18]。

1.2.3誘導(dǎo)內(nèi)源性抗原特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)來(lái)抗腫瘤細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)識(shí)別腫瘤相關(guān)抗原(tumor-associated antigen,TAA)，在抗腫瘤免疫反應(yīng)表現(xiàn)出明顯的抗腫瘤作用[19]。腫瘤細(xì)胞能夠在體內(nèi)不斷的惡性增殖,主要的原因在于它能夠逃避免疫系統(tǒng)的識(shí)別,使得體內(nèi)不能產(chǎn)生特異殺傷腫瘤的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞[20]。CTL是細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫的主要效應(yīng)因子。管理體外操縱自體腫瘤特異性T細(xì)胞和單克隆抗體對(duì)T細(xì)胞抑制信號(hào)的阻斷作用，對(duì)黑色素瘤和肺癌患者有客觀的臨床益處。研究表明，CTL可以說(shuō)明腫瘤疫苗是獲得腫瘤特異性細(xì)胞毒性CD8+T淋巴細(xì)胞(CTL)的一種有效途徑，可以介導(dǎo)腫瘤的保護(hù)性免疫[21]。一些能與T細(xì)胞表面受體結(jié)合的小肽能明顯刺激CTL的產(chǎn)生，而發(fā)揮抗腫瘤作用，腫瘤疫苗通過(guò)接種于體內(nèi)，由典型的MHC-Ⅰ限制的CT8+T細(xì)胞介導(dǎo)[22]，并誘導(dǎo)內(nèi)源性抗原特異性CTL的反應(yīng)，發(fā)揮抗腫瘤的作用。

1.2.4通過(guò)分泌細(xì)胞因子參與抗腫瘤細(xì)胞因子治療是目前常用的腫瘤免疫療法，采用化學(xué)合成或基因重組的方法生產(chǎn)出的抗原多肽、T細(xì)胞表位多肽及腫瘤抗原等形式的分子疫苗，以及將某些細(xì)胞因子基因、輔助刺激分子基因、MHCⅠ類抗原分子基因等轉(zhuǎn)移入腫瘤細(xì)胞后，所制成的免疫原性增強(qiáng)的基因修飾疫苗，這些腫瘤疫苗免疫后能激發(fā)宿主分泌一些具有免疫應(yīng)答的因子，如IL-2、α干擾素(interferon,IFN-α)、IFN-γ、粒細(xì)胞-集落刺激因子(granulocyte-colony stimulating factor，G-CSF)以及GM-CSF而產(chǎn)生抗腫瘤作用，將癌癥患者的腫瘤細(xì)胞取出在體外進(jìn)行培養(yǎng)，并將自體或異體的多個(gè)或單個(gè)基因與之進(jìn)行融合，這個(gè)復(fù)合體會(huì)分泌一些刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的因子，這些細(xì)胞因子可以產(chǎn)生一個(gè)使腫瘤細(xì)胞無(wú)反應(yīng)性的環(huán)境，進(jìn)而激發(fā)機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答[23]。

2　腫瘤的被動(dòng)免疫療法

2.1　腫瘤被動(dòng)免疫療法概述

被動(dòng)免疫治療中最具代表性的是過(guò)繼性細(xì)胞免疫治療，它是將自體免疫效應(yīng)細(xì)胞在體外擴(kuò)增[24]，將自體或異體的對(duì)腫瘤細(xì)胞具有免疫應(yīng)答的免疫細(xì)胞回輸?shù)桨┌Y患者體內(nèi)，激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)的免疫反應(yīng)，來(lái)達(dá)到消滅腫瘤細(xì)胞的目的，也可以發(fā)揮直接的抗腫瘤作用。隨著過(guò)繼性細(xì)胞免疫治療(adoptive cell immunotherapy,ACI)在抗腫瘤方面的不斷研究和發(fā)展，ACI的腫瘤免疫療法在臨床上已經(jīng)取得很好的療效，在抗腫瘤的作用中起著很重要的作用。腫瘤的被動(dòng)免疫療法是給機(jī)體輸注外源性的免疫效應(yīng)物質(zhì)，包括各種類型的抗體與某些能夠直接殺傷腫瘤細(xì)胞的物質(zhì)，如毒素、化療藥物、放射性核素等結(jié)合的腫瘤特異性單克隆抗體，或能結(jié)合兩種特異性抗原的雙功能抗體[8]，以及免疫效應(yīng)細(xì)胞包括細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine-induced killer，CIK)、DC。由這些外源性的免疫效應(yīng)物質(zhì)在宿主體內(nèi)發(fā)揮抗腫瘤作用，該療法不十分依賴于宿主本身的免疫功能狀態(tài)，即使在宿主免疫功能低下狀態(tài)，仍能比較快速的發(fā)揮治療作用。

CIK是一種異質(zhì)的自然效應(yīng)CD3+、CD56+自然殺傷T細(xì)胞，CIK通過(guò)體外培養(yǎng)外周血單個(gè)核細(xì)胞，可以很容易地獲得。CIK細(xì)胞作為腫瘤免疫治療的藥理學(xué)工具，表現(xiàn)出MHC不受限制、安全有效的抗腫瘤活性[25]。將人骨髓或血液的單個(gè)核細(xì)胞在體外由多細(xì)胞因子和抗CD3單克隆抗體刺激后，誘導(dǎo)而得到的一類具有增殖速度快、殺瘤活性高、殺瘤譜廣，低毒性特點(diǎn)的免疫效應(yīng)細(xì)胞，是自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell，NK)活性的T淋巴細(xì)胞，屬于T淋巴細(xì)胞范疇[26]，將CIK細(xì)胞用于抗腫瘤具有很多優(yōu)點(diǎn)，如可以提高患者的免疫功能，清除癌癥患者體內(nèi)的微轉(zhuǎn)移灶，延長(zhǎng)癌癥患者的生存期，還可以減少術(shù)后的復(fù)發(fā)而且輸注安全，適當(dāng)數(shù)量的CIK細(xì)胞對(duì)人體的骨髓干細(xì)胞和造血祖細(xì)胞毒性非常小，基本可以忽略[27]。國(guó)內(nèi)外研究證實(shí)，C1K治療無(wú)明顯不良反應(yīng)，是腫瘤治療的一個(gè)新的突破，因此，可廣泛應(yīng)用于臨床。

DC是體內(nèi)具有啟動(dòng)、調(diào)控、維持免疫應(yīng)答作用的細(xì)胞，具有攝取、加工、處理和遞呈抗原的功能，能殺傷多種腫瘤細(xì)胞[28]。當(dāng)癌細(xì)胞發(fā)生壞死，DC釋放高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)激活樹突狀細(xì)胞，活化樹突狀細(xì)胞(DCs)作為APC細(xì)胞成熟[29]，有研究已經(jīng)揭示了DC抗腫瘤疫苗制備方法，DC疫苗可激活體內(nèi)的免疫功能，發(fā)揮抗腫瘤作用，這是DC在抗腫瘤方面研究的突破性進(jìn)展。根據(jù)DC在各種腫瘤的臨床治療中的效果可以看出，其治療效果確切，非常具有研究?jī)r(jià)值。

2.2　腫瘤被動(dòng)免疫療法的作用機(jī)制

2.2.1CIK腫瘤免疫療法的作用機(jī)制

2.2.1.1對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接殺傷CIK細(xì)胞是過(guò)繼性免疫治療的主力軍。與其他抗腫瘤藥物相比,它可以在沒有損傷機(jī)體免疫系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的前提下,直接殺傷腫瘤細(xì)胞[30]，癌癥患者體內(nèi)外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)對(duì)腫瘤細(xì)胞沒發(fā)揮出很好的殺傷活性，或許是因?yàn)榘┌Y患者體內(nèi)穿孔素和顆粒溶素的量達(dá)不到正常水平，當(dāng)CIK表面的CD3與TCR結(jié)合后，可誘導(dǎo)胞漿釋放穿孔素和顆粒溶素，所以可以人工激活CIK細(xì)胞表面的CD3受體，從而發(fā)揮直接的抗腫瘤作用。此外，淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原1(lymphocyte function associated antigen 1,LFA-1)和動(dòng)物細(xì)胞黏附分子(cell adhesion molecule 1，ICAM-1)也可激活CIK細(xì)胞發(fā)揮直接抗腫瘤作用。

2.2.1.2分泌大量的細(xì)胞因子除CIK直接殺傷作用癌細(xì)胞外，也可以通過(guò)調(diào)節(jié)免疫功能,分泌多種細(xì)胞因子。許多研究表明，經(jīng)腫瘤細(xì)胞刺激后，促炎癥水平細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor，TNF-α)、γ干擾素(interferon-γ,IFN-γ)和CIK細(xì)胞分泌的白介素2 (interleukin 2,IL-2)顯著上調(diào)，這些細(xì)胞因子進(jìn)一步增強(qiáng)全身抗腫瘤活性[31],誘導(dǎo)Th1免疫應(yīng)答。細(xì)胞因子介導(dǎo)的(IL-12)和依賴性(CD58)信號(hào)促進(jìn)CIK細(xì)胞的殺傷能力，細(xì)胞因子提高了CIK細(xì)胞的抗腫瘤活性。這些細(xì)胞因子可促進(jìn)細(xì)胞的增殖和細(xì)胞毒性部分通過(guò)抑制調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory cell,Treg)的產(chǎn)生，它們既能直接抑制癌細(xì)胞，也能間接調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)間接殺傷癌細(xì)胞。

2.2.1.3誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡CIK是一個(gè)異質(zhì)群體的CD8+T 細(xì)胞，從人外周血淋巴細(xì)胞(peripheral blood leukocyte，PBL)中產(chǎn)生，經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的體外擴(kuò)增，通過(guò)一抗的孵育，分泌IFN-γ、IL- 2，可以通過(guò)由FasL介導(dǎo)的穿孔素殺死腫瘤細(xì)胞[25]， Shan Y H觀察促姜黃素與CIK細(xì)胞對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞的凋亡作用，用免疫印跡法檢測(cè)Curcumin治療后卵巢癌細(xì)胞表面Fas蛋白和CIK細(xì)胞表面FasL蛋白的水平，發(fā)現(xiàn)姜黃素能促進(jìn)Fas對(duì)SKOV3細(xì)胞和CIK細(xì)胞膜表面表達(dá)FasL。姜黃素能促進(jìn)Fas對(duì)SKOV3細(xì)胞和CIK細(xì)胞膜表面表達(dá)FasL，這說(shuō)明腫瘤細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致具有抗腫瘤活性的效應(yīng)細(xì)胞發(fā)生凋亡，CIK細(xì)胞可阻止這種效應(yīng)細(xì)胞的凋亡，一些腫瘤凋亡基因處于靜息狀態(tài)，CIK對(duì)此具有活化的作用， 并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。

2.2.2DC抗腫瘤的作用機(jī)制

2.2.2.1通過(guò)T細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤作用最近由Khalil等在一份概述中提到，免疫療法涉及腫瘤抗原的攝取和加工， APC激活CD4輔助T細(xì)胞，和隨后招募的CD8細(xì)胞毒性T細(xì)胞直接殺傷腫瘤細(xì)胞[32]。DC產(chǎn)生IL-12，激活效應(yīng)T細(xì)胞CD4 Th1和CD8 T，Th1產(chǎn)生IL-2進(jìn)一步促進(jìn)效應(yīng)T細(xì)胞的增殖。CD4 Th1和CD8 T細(xì)胞殺死癌細(xì)胞[33]。在體外用腫瘤抗原修飾DC后，將其與MHC融合，將此融合體回輸入癌癥患者體內(nèi)，其附著在細(xì)胞表面，與TCR結(jié)合，同時(shí)與DC表面高表達(dá)的CD80、CD86等共刺激分子協(xié)同作用，共同激活T細(xì)胞，啟動(dòng)CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答[34]。

DC表面的分子與T細(xì)胞表面的配體結(jié)合后，可產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子，激發(fā)初始T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)特異性CTL反應(yīng)，調(diào)控機(jī)體的免疫應(yīng)答增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫[35]。DC還能分泌趨化因子，專一性地趨化初始型T細(xì)胞，通過(guò)促進(jìn)T細(xì)胞聚集，增強(qiáng)對(duì)T細(xì)胞的激發(fā)來(lái)啟動(dòng)和誘導(dǎo)免疫應(yīng)答[36-37]。

2.2.2.2通過(guò)B細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤作用 DC在B細(xì)胞腫瘤的免疫療法中也起著決定性作用，DC直接參了與B細(xì)胞的成熟和分化，從而促進(jìn)B細(xì)胞分泌大量的免疫球蛋白IgM和IgA[32]，此外漿樹突細(xì)胞(plasmacytoid dendritic cell,PDC )通過(guò)Ⅰ型干擾素(interferon，IFN)的分泌，直接誘導(dǎo)初始和記憶B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞[38]，發(fā)揮抗腫瘤作用。

3　問(wèn)題及展望

腫瘤免疫治療在臨床上的研究已經(jīng)取得了突破性的效果，但是在各個(gè)領(lǐng)域仍然面臨著很多挑戰(zhàn)。

腫瘤疫苗治療癌癥時(shí)也會(huì)出現(xiàn)跟傳統(tǒng)癌癥治療方法一樣的漏洞，腫瘤疫苗在參與免疫系統(tǒng)的免疫應(yīng)答時(shí)，對(duì)腫瘤細(xì)胞不夠敏感，有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞突變，而導(dǎo)致瘤疫苗不攻擊腫瘤細(xì)胞，轉(zhuǎn)而攻擊對(duì)其敏感性的正常細(xì)胞，引發(fā)其他疾病。除此之外，腫瘤疫苗在臨床上還有很多的不足，例如，腫瘤疫苗治療腫瘤時(shí)，會(huì)發(fā)生腫瘤細(xì)胞避開免疫系統(tǒng)的攻擊等問(wèn)題。疫苗的免疫原性不夠強(qiáng)，不能很好的發(fā)揮抗腫瘤作用，最重要的就是腫瘤疫苗的輸注安全性和特異性還不能保證，這是今后腫瘤疫苗研究的重點(diǎn)[29]。

CIK細(xì)胞的制備工藝非常復(fù)雜，制備方法不夠完善，目前正在尋找最佳的獲得途徑，在臨床上雖然有很好的療效，但是應(yīng)用多少劑量，應(yīng)用怎樣的回輸方式，什么時(shí)候什么癥狀開始回輸入患者體內(nèi)能發(fā)揮最好的療效，怎樣把握好臨床護(hù)理可以使患者恢復(fù)到最好的狀態(tài)，目前還在摸索階段。CIK細(xì)胞的質(zhì)量還沒有確切的控制方法,如何與其他藥物聯(lián)合應(yīng)用等都是接下來(lái)需要突破的問(wèn)題。

DC在抗腫瘤治療中也有很多需要改進(jìn)的地方，例如，合適的DC接種劑量、最佳接種的間隔時(shí)間、DC疫苗佐劑聯(lián)合應(yīng)用、最佳DC負(fù)載方法、免疫頻率、DC疫苗效果評(píng)價(jià)指標(biāo)、合適的接種次數(shù)、有效的腫瘤抗原、最佳注射途徑等，都會(huì)影響DC的抗腫瘤作用的強(qiáng)弱，這將是今后免疫治療研究有待解決的問(wèn)題。