多功能凈化柱—高效液相色譜法測定食品中毒黃素殘留

沈瀟冰　錢朝峰

摘 要：建立了MycoSep 226高效液相色譜測定食品中毒黃素殘留的方法。結(jié)果表明，毒黃素在0.05 mg/L～10.0 mg/L范圍內(nèi)線性相關(guān)良好，線性相關(guān)系數(shù)大于0.999?；厥章试?0.0%～89.0%，相對標準偏差為1.8%～3.1%，方法檢出限為0.1mg/kg。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；毒黃素；多功能凈化柱

中圖分類號：TS210.7 文獻標識碼：A 文章編號：1671-2064（2018）04-0000-00

毒黃素（TXF）是椰毒假單胞菌酵米面亞種（簡稱椰酵伯菌） [1]產(chǎn)生的毒性代謝產(chǎn)物，屬水溶性小分子脂肪酸類外毒素[2-4]，其引起的食物中毒是一種病死率很高的細菌性食物中毒[5，6]。通常發(fā)生于5-8月，多因陰雨天氣、食品儲存不當而變質(zhì)，主要隨加工原料或不衛(wèi)生的加工方法污染多種食品。常見的污染食品為：發(fā)酵玉米面、糯玉米湯圓粉、吊漿粑、玉米淀粉、發(fā)酵糯小米、醋涼粉等；變質(zhì)銀耳；高粱米面制品；薯類制品如馬鈴薯粉條等[7]。食用被椰酵伯菌污染的食物易發(fā)生食物中毒[8]，重者將出現(xiàn)肝腎損傷及中毒性休克等癥。因此，建立快捷、高效的毒黃素檢測方法顯得尤為重要。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備與試劑

LC-20 AD高效液相色譜儀配DAD檢測器（島津）；標準物質(zhì)：毒黃素（Sigma-Aldrich）；多功能凈化柱：MycoSep 226 （Romer）。

標準溶液的配制：稱取毒黃素10.0 mg于10.0 mL容量瓶，甲醇溶解，配制成1.0 mg/mL儲備液；各取上述儲備液適量于10 mL容量瓶中，水定容，配制成一系列濃度標準工作液。

1.2 色譜條件

液相色譜柱：Zobax SB-C18柱（4.6 mm×150 mm，5.0μm，Agilent公司）；柱溫：35 ℃；進樣量20μL；流動相為：甲醇A與水B梯度洗脫，體積比為（0～8 min，7A：93B；8～12 min，90A：10B；12 ～17min，7A：93B）；流速1.0 mL/min。檢測波長： 258 nm。

1.3 樣品前處理

稱取20 g樣品，100 mL提取液（80乙腈+20水）混合后，超聲提取30 min，取提取液，10000 r/min離心5 min。取上清液10 mL，過多功能凈化柱。凈化后，取凈化液5.0 mL，N2吹干，1.0 mL純水定容，渦旋溶解，0.22 μm濾膜過濾，待測。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的優(yōu)化

采用甲醇和水梯度洗脫流動相，有利于毒黃素和其他干擾化合物的有效分離，從而達到準確定量的目的。優(yōu)化后的樣品加標譜圖及標準品譜圖如圖1所示。

2.2不同提取試劑的比較

選擇70%甲醇水、70%乙醇水及70%乙腈水，考察其對回收效果的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乙腈的提取效率、凈化效果優(yōu)于甲醇和乙醇。同時研究了不同體積分數(shù)乙腈水對提取效率的影響。選取10%～100%乙腈水，超聲30 min，離心，取3.0 mL提取液N2吹干，1.0 ml水定容后分析發(fā)現(xiàn)乙腈體積分數(shù)為80%時提取效率最高，故選擇80%乙腈水作為提取試劑。

2.3 線性范圍及線性回歸方程

配制毒黃素0.05mg/L～10.0mg/L系列標準溶液，以儀器響應(yīng)的峰面積Y對應(yīng)濃度X計算線性回歸方程為Y=189.52X-13.314，相關(guān)系數(shù)r=0.9992，在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)線性良好。

2.4 回收率和精密度及檢出限

在陰性樣品中加入三個不同濃度水平的毒黃素標物進行加標實驗， 平均回收率和RSD如表1所示。以S/N=3計算方法的檢出限為0.1mg/kg。

3 結(jié)語

建立了毒黃素的高效液相色譜法。樣品經(jīng)乙腈水提取，經(jīng)多功能凈化柱凈化，有效的去除了干擾。該方法準確，快速，適用于食品中毒黃素的檢測。

參考文獻

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[8]劉秀梅.我國椰毒假單胞菌酵米面亞種食物中毒流行趨勢淺析[J].中華預防醫(yī)學雜志， 1996，30（6）：372-374.

作者簡介：沈瀟冰（1986—），男，浙江杭州人，本科，工程師，從事食品檢測分析工作。