HPLC測定丹參莖葉花中迷迭香酸和丹酚酸B的含量

翟宏宇，郝羚竹，王海洋，單柏宇，楊獻玲*

(1.吉林省藥品檢驗所，吉林　長春　130033；2.白城市食品藥品檢驗所，吉林　白城　137000)

丹參別名紅丹參、赤參、血參、紫丹參，為唇形科植物丹參SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根莖，主產(chǎn)于四川、山東、山西、河北、江蘇、安徽等省。春秋季均可采收，以秋季為好[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明，丹參具有擴冠狀動脈血管、防止心肌缺血、改善微循環(huán)、降低心肌耗氧量等作用[2-5]。丹參中主要含脂溶性的二萜醌類和水溶性的酚酸類成分，其傳統(tǒng)用藥部位為根和根莖，棄去莖葉部分，但現(xiàn)代藥理實驗已證明丹參莖葉的藥理作用與根、根莖相似，臨床療效類似[6]。丹參地上部分約占全株植物的67%[7]，藥源豐富，對其加以開發(fā)利用意義重大。本文采用不同產(chǎn)地的丹參莖、葉、花作為研究對象，采用HPLC建立其迷迭香酸、丹酚酸B的含量測定方法，并對其進行分析，旨在為丹參莖、葉、花的藥用價值的進一步開發(fā)利用提供一定的實驗依據(jù)。

1　儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀(美國Agilent)；BT-125D型分析天平(德國Sartorius)；KQ-700DV型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑與材料

對照品迷迭香酸(批號：111871-2011102，純度：99.8%)、丹酚酸B(批號：111562-201514，純度：93.7%)，購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純(Fisher)；其他試劑均為分析純，水為超純水。

丹參樣品購自藥材市場，由吉林省藥品檢驗所副主任中藥師溫立義鑒定為丹參SalviamiltiorrhizaBge.的莖、葉、花，產(chǎn)地分別為山東、四川、安徽、河北、甘肅、山西、江蘇。

2　方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent 1200高效液相色譜儀，Gemini C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.05%磷酸水作為流動相進行梯度洗脫，梯度洗脫時間及比例見表1；流速：0.8 mL·min-1，柱溫：30 ℃，檢測波長：286 nm。

表1　丹參中迷迭香酸、丹酚酸B測定的流動相梯度洗脫表

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取迷迭香酸、丹酚酸B對照品適量，加甲醇配制成每1 mL各含迷迭香酸和丹酚酸B 0.1 mg的混合溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取丹參藥材，粉碎后過篩，精密稱取0.5 g于具塞錐形瓶中，加入50 mL甲醇溶液，稱定質(zhì)量，超聲30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關(guān)系考察分別精密吸取上述對照品溶液1、2、5、10、15、20、25 μL注入色譜儀，按2.1項下的色譜條件進行測定，分別以迷迭香酸和丹酚酸B的含量(μg)和相應(yīng)的峰面積進行線性回歸，計算回歸方程。迷迭香酸的回歸方程為Y=1 251.7X+7.454 7，r=1.000 0，線性范圍為0.08～2.09 μg；丹酚酸B的回歸方程為Y=1 100.2X+17.416，r=0.999 9，線性范圍為0.11～2.67 μg。

2.4.2 精密度試驗精密吸取迷迭香酸、丹酚酸B混合對照品溶液，按2.1項下色譜條件，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，迷迭香酸、丹酚酸B峰面積的RSD均小于0.5%，表明儀器的精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗精密吸取2.3項下的供試品溶液，按2.1項下色譜條件分別于0、4、8、12、18、24、48 h進樣，記錄峰面積。結(jié)果顯示，迷迭香酸、丹酚酸B峰面積的RSD均小于0.5%，表明供試品溶液48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.4 重復性試驗取丹參藥材6份，分別按照2.3項下方法制備，照2.1項下方法測定，記錄峰面積。結(jié)果顯示，迷迭香酸、丹酚酸B峰面積的RSD均小于0.5%，表明此方法的重復性良好。

2.4.5 回收率試驗分別精密稱取樣品0.25 g，共6份，分別加入迷迭香酸、丹酚酸B對照品適量，按2.2項下方法制備，按2.1項下色譜條件進行測定，分別計算迷迭香酸、丹酚酸B的回收率。結(jié)果見表2。

表2　丹參中迷迭香酸、丹酚酸B的回收率試驗結(jié)果

2.5 樣品測定

分別取不同產(chǎn)地全株丹參的莖、葉、花，按2.3項下的方法制備供試品溶液，照2.1項下色譜條件進樣，記錄色譜圖，計算含量，結(jié)果見圖1、表3。

注：A.對照品；B.供試品；1.迷迭香酸；2.丹酚酸B。圖1　丹參樣品及對照品HPLC圖

表3　丹參中迷迭香酸、丹酚酸B的含量測定結(jié)果(n=3) %

3　討論

丹參作為傳統(tǒng)中藥，具有活血化瘀、祛瘀止痛、涼血消癰、除煩安神的功效，其根及根莖中含有豐富的丹參酮類和丹酚酸類化學成分，目前市場上已有多種丹參及其復方制劑，如復方丹參片、丹參注射液、香丹注射液、丹參酮膠囊、丹紅注射液等，均以丹參根入藥，而其地上部分除少量應(yīng)用外，大多被廢棄造成資源浪費和環(huán)境污染[8]。本實驗以不同產(chǎn)地丹參的地上部分——丹參莖、葉、花作為主要的研究對象，采用高效液相色譜法對其中的丹酚酸類成分——迷迭香酸和丹酚酸B進行含量測定，結(jié)果顯示，丹參莖、葉、花中迷迭香酸和丹酚酸B的含量均很高，提示可將丹參莖、葉、花作為獲取丹酚酸類化學成分的新資源，提高丹參藥材的綜合利用率。

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