血府逐瘀湯對動脈粥樣硬化金黃地鼠血清血脂和炎癥因子的影響

林敏瑜+林紹彬+余碧菁++劉菁

[摘要] 目的 觀察血府逐瘀湯對動脈粥樣硬化金黃地鼠主動脈的病理變化、血脂和炎癥因子的影響。 方法 32只雄性金黃地鼠隨機(jī)分四組：正常組、模型組、血府逐瘀湯組[8.125 g/（kg·d）]、立普妥組 [2 mg/（kg·d）]，正常組喂食基礎(chǔ)飼料，余組喂食高脂飼料8周，同時給予藥物干預(yù)4周后處死，HE染色觀察主動脈病理形態(tài)變化，ELISA檢測血脂四項、血清炎癥因子表達(dá)水平。 結(jié)果 模型組主動脈管腔狹窄、內(nèi)膜增厚、泡沫細(xì)胞堆積、平滑肌細(xì)胞排列紊亂，總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、白細(xì)胞介素-6顯著升高（P<0.01）；血府逐瘀湯組、立普妥組脂質(zhì)斑塊面積減小，三層結(jié)構(gòu)較清晰，甘油三酯、白細(xì)胞介素-6、腫瘤壞死因子-α、髓過氧化物酶降低（P<0.05）。 結(jié)論 血府逐瘀湯可縮小斑塊面積，改善血管壁結(jié)構(gòu)，其作用機(jī)制可能是通過降低血脂水平，減少炎癥因子的表達(dá)以減緩動脈粥樣硬化病程。

[關(guān)鍵詞] 動脈粥樣硬化；血府逐瘀湯；血脂；炎癥因子

[中圖分類號] R289.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701（2017）34-0032-03

Effect of Xuefu Zhuyu decoction on serum lipids and inflammatory factors in atherosclerotic golden hamster

LIN Minyu LIN Shaobin YU Bijing LIU Jing

Department of Cardiology， Fuzhou Second Hospital， Fuzhou 350007， China

[Abstract] Objective To observe the effect of Xuefu Zhuyu decoction on the pathological changes， blood lipids and inflammatory factors in atherosclerosis golden hamster aorta. Methods 32 male golden hamsters were randomly divided into 4 groups including normal group， model group， Xuefu Zhuyu decoction group [8.125 g/（kg·d）]， Lipitor group [2 mg/（kg·d）] . Normal group was fed with basal diet. Other groups were fed with high-fat diet for 8 weeks， while were sacrificed after drug intervention for 4 weeks. HE staining was used to observe pathological changes of aorta. And ELISA was used to detect the expressions of four items of blood lipids and serum inflammatory cytokines. Results In the model group， the aortic lumen was narrow， endometrial was thickened， foam cell accumulated and smooth muscle cells arranged disorderly. And total cholesterol， triglyceride， high density lipoprotein， low density lipoprotein and interleukin-6 were significantly increased（P<0.01）. In the Xuefuzhuyu decoction group and the Lipitor group， the lipid plaque area was reduced and the three-layer structure was clear. The levels of triglyceride， interleukin-6， tumor necrosis factor α and myeloperoxidase were decreased（P<0.05）. Conclusion Xuefu Zhuyu decoction can reduce the area of plaque and improve the structure of blood vessel wall. Its mechanism may be to slow down the course of atherosclerosis by reducing blood lipid level and reducing the expression of inflammatory factors.

[Key words] Atherosclerosis； Xuefu Zhuyu decoction； Blood lipids； Inflammatory factor

動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是慢性全身性炎癥性疾病，是多種心腦血管疾病的病理基礎(chǔ)。單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎細(xì)胞浸潤，低密度脂蛋白氧化，泡沫細(xì)胞形成，平滑肌細(xì)胞增殖，血小板集聚，血栓形成，促使斑塊形成，血管內(nèi)皮的炎癥反應(yīng)貫穿病程的始終。血府逐瘀湯是臨床治療和實驗研究多用的方劑[1，2]，本實驗建立金黃地鼠動脈粥樣硬化模型，觀察血府逐瘀湯對主動脈形態(tài)結(jié)構(gòu)，血清總膽固醇（TC）、甘油三酯 （TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和髓過氧化物酶（MPO）的影響，為其臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。endprint

1 材料與方法

1.1 實驗動物

普通級雄性金黃地鼠32只，體重（120±10）g，許可證號碼SCXK（滬）2012-0011，飼養(yǎng)于福建省中醫(yī)藥研究院比較醫(yī)學(xué)中心（合格證號：醫(yī)動學(xué)第23-016號）。

1.2 實驗藥物

血府逐瘀湯由桃仁12 g、紅花9 g、當(dāng)歸9 g、生地黃9 g、牛膝9 g、川芎4.5 g、桔梗4.5 g、赤芍6 g、枳殼6 g、甘草6 g、柴胡3 g生藥組成，顆粒劑由福州市第二醫(yī)院顆粒藥房提供。阿托伐他汀鈣片（立普妥，20 mg，輝瑞制藥有限公司）。

1.3 模型建立及干預(yù)

金黃地鼠采用高脂喂養(yǎng)建立動脈粥樣硬化模型[3，4]，32只金黃地鼠隨機(jī)分為四組：正常組、模型組、血府逐瘀湯組、立普妥組，每組8只。正常組喂食基礎(chǔ)飼料，余組喂食高脂飼料：1%膽固醇、15%豬油、84%基礎(chǔ)飼料，4周后進(jìn)行藥物干預(yù)，灌胃劑量按實驗動物體表面積換算，血府逐瘀湯組給藥量為8.125 g/（kg·d），立普妥組給藥量為2 mg/（kg·d），模型組給予等量生理鹽水，干預(yù)4周。

1.4 儀器和試劑

生物組織自動脫水機(jī)（亞光，TS-12U）；石蠟包埋機(jī)（亞光，BM-VⅡ）；切片機(jī)（Leica，RM2235）；顯微鏡（Leica，DM4000B）；多功能酶標(biāo)儀（TECAN，Infinite 200 PRO）；蘇木素染液、伊紅染液（索萊寶）；TC、TG、HDL-C、LDL-C測試盒（南京建成）；IL-6、TNF-α、MPO測試盒（Invitrogen）。

1.5 樣本收集

干預(yù)4周后取材，腹主動脈采血，3000 r/min，離心10 min，取血清，嚴(yán)格按測試盒說明書操作，酶標(biāo)儀測定各孔吸光度。夾閉腹主動脈，取心臟、主動脈根部至腹主動脈待檢。

1.6 組織形態(tài)學(xué)觀察

置10%甲醛中常溫固定24 h，取主動脈弓梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋，橫斷面為切面，4 μm厚連續(xù)切片。切片脫蠟至水，蘇木素15 min，1%鹽酸酒精分色，返藍(lán)20 min，伊紅1 min，脫水、透明，封片，光鏡下觀察。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS18.0軟件分析，計量資料以（x±s）表示，正態(tài)分布檢驗齊采用單因素方差分析，正態(tài)分布檢驗不齊采用非參數(shù)檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

正常組一般情況良好，毛發(fā)光澤，進(jìn)食正常，活動靈敏。模型組高脂飼料造模期間出現(xiàn)毛發(fā)晦暗無光澤，進(jìn)食減少，活動笨拙，精神狀態(tài)較差，血府逐瘀湯組、立普妥組一般情況較模型組有所改善。

2.2 主動脈病理形態(tài)學(xué)觀察

正常組主動脈管腔大，血管壁三層結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)膜光滑連續(xù)完整，內(nèi)皮下層未見脂質(zhì)沉積，中膜以彈性膜為主，彈性纖維緊密相連，其間可見排列規(guī)則的長梭形平滑肌細(xì)胞，外膜為疏松結(jié)締組織（封三圖6A）。模型組可見脂質(zhì)斑塊，內(nèi)腔縮窄，內(nèi)膜增厚并向管腔內(nèi)凸出，內(nèi)皮細(xì)胞下大量泡沫細(xì)胞聚集、少量炎細(xì)胞浸潤，該處中膜變薄，彈性纖維破壞，平滑肌細(xì)胞排列紊亂，可見少量泡沫細(xì)胞、脂質(zhì)沉積（封三圖6B）。血府逐瘀湯組血管內(nèi)膜部分增厚，內(nèi)皮細(xì)胞下可見少許泡沫細(xì)胞，彈性膜結(jié)構(gòu)較模糊，平滑肌細(xì)胞排列較規(guī)則（封三圖6C）。立普妥組管壁三層結(jié)構(gòu)較清晰，內(nèi)膜連續(xù)，內(nèi)皮細(xì)胞下少量炎細(xì)胞浸潤，中、外膜結(jié)構(gòu)較好（封三圖6D）。

2.3 對血脂四項的影響

與正常組比較，模型組5只金黃地鼠為乳糜血，TC、TG、HDL-C、LDL-C水平均顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，血府逐瘀湯組2只為乳糜血，TG水平顯著降低（P<0.05），TC、HDL-C、LDL-C水平降低。見表1。

2.4 對炎癥因子的影響

與正常組相比，模型組血清IL-6、TNF-α、MPO表達(dá)顯著升高（P<0.01），與模型組相比，血府逐瘀湯組、立普妥組IL-6、TNF-α、MPO水平降低（P<0.05）。見表2。

3 討論

AS可分為脂質(zhì)條紋（早期）、纖維斑塊、粥樣斑塊（進(jìn)展期），不穩(wěn)定斑塊、斑塊破裂和血栓形成（后期）。脂質(zhì)代謝紊亂是AS高危因素[5]，LDLC氧化修飾后形成氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL），ox-LDL損傷內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)單核細(xì)胞、T細(xì)胞等黏附，巨噬細(xì)胞吞噬大量脂質(zhì)而成泡沫細(xì)胞[6]，形成脂質(zhì)條紋。單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞可釋放IL-6、TNF-α等炎癥因子，誘導(dǎo)血小板源生長因子分泌，促使中膜平滑肌細(xì)胞向內(nèi)膜遷移并大量增殖，纖維斑塊形成，血管重構(gòu)進(jìn)入進(jìn)展期。炎癥細(xì)胞浸潤可促使血管內(nèi)皮細(xì)胞壞死凋亡[7]，又可分泌MMP-2、MMP-9，降解纖維帽，引起纖維斑塊破裂、出血和繼發(fā)性血栓的形成[8]，引發(fā)急性心腦血管缺血性疾病。

血管內(nèi)皮炎癥反應(yīng)貫穿病程的始終，與AS的發(fā)生發(fā)展呈正相關(guān)[9，10]。IL-6是單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等產(chǎn)生的多功能細(xì)胞因子，參與機(jī)體各種調(diào)節(jié)作用，促使血管平滑肌細(xì)胞增生，激活巨噬細(xì)胞，分泌單核細(xì)胞趨化蛋白、TNF-α，可與TNF-α形成免疫復(fù)合物，進(jìn)入血管內(nèi)皮下參加纖維斑塊的形成，也可刺激MMPs合成，降解細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原纖維導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定、破裂。TNF-α是單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的具廣泛的生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，可作為炎癥強(qiáng)度的標(biāo)志，主要損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的完整性、促進(jìn)炎性細(xì)胞的聚集和炎癥因子的釋放，促進(jìn)疾病進(jìn)程。MPO與中性粒細(xì)胞激活程度密切相關(guān)，是新型炎癥標(biāo)志物，參與炎癥反應(yīng)的發(fā)展的整個過程。本研究結(jié)果顯示，模型組主動脈管腔狹窄，內(nèi)膜增厚，內(nèi)膜下泡沫細(xì)胞堆積，IL-6、TNF-α、MPO較正常組顯著升高，表明炎癥因子與AS的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。endprint