胃癌組織中BTG2蛋白的表達(dá)及其臨床意義

鄭艷紅　劉文文　林建波　曹璋

【摘 要】目的：探討B(tài)TG2基因在胃癌中的表達(dá)及臨床意義。方法：采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)76例胃癌組織及癌旁組織中BTG2表達(dá)情況，結(jié)合胃癌患者臨床資料分析BTG2表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果：BTG2在胃癌組織和癌旁組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為39.47%和76.32%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；BTG2表達(dá)水平與患者年齡、性別、病理分化程度、腫瘤大小及部位無(wú)關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P<0.05）有關(guān)。結(jié)論：BTG2在胃癌組織中表達(dá)降低，與淋巴轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)，BTG2可能在胃癌發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮一定的作用。

【關(guān)鍵詞】胃癌；BTG2；臨床意義

中圖分類號(hào)： R735.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 2095-2457（2018）31-0091-003

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.31.043

【Abstract】Objective To investigate the expression of BTG2 in gastric cancer tissue and detect its clinical significance. Methods The expression of BTG2 in 76 cases of primary gastric cancer specimens and adjacent tissue specimens were detected by immunohistochemmistry. Results The positive expresssion rate of BTG2 was 39.47% and 76.32% in gastric cancer specimens and adjacent tissue specimens， respectively. Differences were statistically significant （p<0.05）. The expression levels of BTG2 were not correlated with age， gender， degree of differentiation， tumor size and location，but correlated with lymph node metastasis. Conclusion The downregulation of BTG2 is closely correlated with lymph node metastasis of gastric cancer. BTG2 may be used as a molecular marker to identify and predict the progression， metastasis of gastric cancer.

【Key words】BTG2； Gastric cancer； Clinico-pathology

胃癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人們的身體健康。雖然近年來(lái)在西方國(guó)家胃癌的發(fā)生率有所下降，但在我國(guó)仍是最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤。據(jù)統(tǒng)計(jì)，胃癌居我國(guó)惡性腫瘤發(fā)病率第2位，死亡率第3位，且我國(guó)胃癌有發(fā)病率和死亡率高、早期胃癌比例低（僅約10%）、進(jìn)展期病例為主等特點(diǎn)[1]。胃癌的發(fā)生有多個(gè)癌基因和抑癌基因參與，是一個(gè)多階段多途徑逐步演變的過(guò)程，140多種基因及其蛋白產(chǎn)物與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。隨著分子生物學(xué)、基因?qū)W的不斷發(fā)展，尋找與胃癌發(fā)生發(fā)展及預(yù)后相關(guān)的生物學(xué)指標(biāo)，檢測(cè)基因及其表達(dá)產(chǎn)物與胃癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系，有助于胃癌的早期診斷、病情判斷及預(yù)后評(píng)估，并能為胃癌的靶向治療提供方向。BTG2是B細(xì)胞易位基因2（B cell translocation gene2），是BTG基因家族成員之一，它是細(xì)胞增殖抑制基因，可以抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖[2-3]。有研究表明，BTG2作為靶點(diǎn)在胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖狀態(tài)、細(xì)胞周期和凋亡狀態(tài)和成瘤、侵襲轉(zhuǎn)移能力中起著非常重要的作用[4-6]。但目前尚無(wú)其在胃癌標(biāo)本中的表達(dá)情況及與胃癌臨床病理關(guān)系的研究，本研究通過(guò)采用免疫組化方法檢測(cè)胃癌組織及癌旁組織中BTG2的表達(dá)情況，并結(jié)合臨床病理及隨訪資料分析，探討其表達(dá)與胃癌的臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

收集我院住院患者外科手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的胃腺癌組織標(biāo)本76例，所有病例術(shù)前均未作任何放化療及其他治療。其中男性45例，女性31例，年齡<60歲31例，≥60歲45例。按分化程度，高分化10例，中分化腺癌19例，低分化腺癌47例。56例患者有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，20例患者無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，未侵及漿膜層48例，侵及漿膜層18例。同時(shí)76例距癌邊緣2cm以上的癌旁胃粘膜作正常對(duì)照。所有標(biāo)本取材后盡快用10%甲醛固定，予以常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)4μm厚度切片。術(shù)后所有患者均有完整的臨床資料和隨訪資料。

1.2 主要試劑與儀器

鼠抗人單克隆BTG2抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，第二抗體購(gòu)自生物晶美工程有限公司。免疫組織化學(xué)MaxVision試劑盒購(gòu)自福州邁新公司。實(shí)驗(yàn)皆按照試劑盒使用說(shuō)明進(jìn)行操作。OlympusAH-2型顯微鏡為日本OLYMPUS公司產(chǎn)品。

1.3 免疫組織化學(xué)染色

采用免疫組織化學(xué)Max VisionTM法， DAB顯色試劑盒及免疫組織化學(xué)Max VisionTM試劑盒均為北京中杉公司產(chǎn)品。常規(guī)切片脫蠟水化，抗原修復(fù)后，其具體操作步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，DAB顯色及蘇木精復(fù)染，脫水后中性樹(shù)膠封片。

1.4 結(jié)果判定

鏡下觀察胞質(zhì)和胞膜內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為蛋白表達(dá)，以兩種計(jì)分方法相結(jié)合來(lái)進(jìn)行陽(yáng)性結(jié)果判定，（1）以10個(gè)高倍視野內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞的百分比計(jì)分：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞記0分，陽(yáng)性細(xì)胞率<25%記1分，陽(yáng)性細(xì)胞率26%～50%記2分，陽(yáng)性細(xì)胞率>51%記3分。（2）以染色強(qiáng)度計(jì)分：細(xì)胞不著色記0分，黃色記1分，棕黃色記2分，黃褐色記3分。采用二級(jí)計(jì)分法，兩項(xiàng)分值相加，≥3分視為BTG2蛋白表達(dá)陽(yáng)性，<3分則視為BTG2蛋白表達(dá)陰性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SSPS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，等級(jí)分組資料采用秩和檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)用Pearson法。以P<0.05為組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

（1）BTG2蛋白在胃癌與癌旁組織中的表達(dá) 免疫組化結(jié)果顯示76例胃癌組織中30例BTG2蛋白表達(dá)陽(yáng)性， 陽(yáng)性表達(dá)率39.47%，76例癌旁正常組織中58例表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性表達(dá)率76.32%。胃癌組織中BTG2蛋白的表達(dá)低于癌旁組織的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

（2）BTG2蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 BTG2在不同年齡、性別、分化程度、腫瘤大小、發(fā)病部位胃癌患者間的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而在有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者間的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，表1）。

3 討論

胃癌是普外科臨床常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，近年來(lái)，胃癌的早期診斷及治療技術(shù)水平明顯提高，但80%患者就診時(shí)已到晚期，現(xiàn)有治療手段有限，單純手術(shù)治療后的總體生存率為20%左右，總體療效仍然較差，仍然是我國(guó)造成癌癥相關(guān)死亡的常見(jiàn)原因[7]。胃癌的發(fā)生是從正常胃粘膜上皮發(fā)生慢性胃炎到胃癌前病變，經(jīng)過(guò)一系列基因突變導(dǎo)致胃癌發(fā)生，其病因及其發(fā)病機(jī)制尚未闡明，現(xiàn)認(rèn)為其發(fā)生發(fā)展過(guò)程涉及多種基因的激活與失活，引起相應(yīng)表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)的質(zhì)或量發(fā)生改變，細(xì)胞凋亡失去控制，發(fā)生癌變并進(jìn)一步侵襲轉(zhuǎn)移，而浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是晚期胃癌最顯著的病理學(xué)特征，與患者預(yù)后直接相關(guān)[8]。隨著腫瘤分子生物學(xué)的發(fā)展，胃癌的分子靶向治療和個(gè)體化治療被認(rèn)為是提高生存率的重要措施[9]。因此，有必要對(duì)胃癌相關(guān)的基因及其表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行研究，明確其與胃癌臨床病理特征的關(guān)系，有助于發(fā)現(xiàn)指導(dǎo)胃癌靶向治療和個(gè)體化治療的分子標(biāo)記物。

BTG2基因是B細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子家族成員之一，由158個(gè)氨基酸殘基組成，目前國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果表明，B細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子家族成員包括BTG2具有抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞成熟分化、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、調(diào)解細(xì)胞周期進(jìn)程的功能，但其具體調(diào)控機(jī)制尚未形成明確結(jié)論[10-13]。研究表明，BTG2在腸癌、肝癌、喉癌細(xì)胞中表達(dá)顯著降低，并和腫瘤的臨床病理參數(shù)具有相關(guān)性[12， 14]。本研究驗(yàn)證了BTG2蛋白在胃癌組織及癌旁組織的表達(dá)程度及其與臨床病例特征的關(guān)系。

本研究通過(guò)免疫組化方法發(fā)現(xiàn)BTG2蛋白在胃癌組織及癌旁組織中有不同程度的表達(dá)，在胃癌組織中的表達(dá)顯著減低，胃癌組織中BTG2蛋白表達(dá)呈陰性，而對(duì)照組癌旁組織中患者BTG2蛋白表達(dá)呈陽(yáng)性。分析BTG2蛋白表達(dá)水平變化與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，其表達(dá)與胃癌患者年齡、性別、分化程度、腫瘤大小及部位無(wú)關(guān)，而與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，BTG2蛋白表達(dá)缺失可能促進(jìn)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。綜上所述，BTG2作為一個(gè)候選抑癌基因，其蛋白在胃癌組織中缺失表達(dá)可能參與胃癌的進(jìn)展。

【參考文獻(xiàn)】

[1]陳萬(wàn)青， 鄭榮壽， 張思維， 曾紅梅， 鄒小農(nóng)， 赫捷. 2013年中國(guó)惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析. 中國(guó)腫瘤. 2017. 26（01）： 1-7.

[2]Duriez C， Falette N， Audoynaud C， et al. The human BTG2/TIS21/PC3 gene： genomic structure， transcriptional regulation and evaluation as a candidate tumor suppressor gene. Gene. 2002. 282（1-2）： 207-14.

[3]Mao B， Zhang Z， Wang G. BTG2： a rising star of tumor suppressors （review）. Int J Oncol. 2015. 46（2）： 459-64.

[4]Zhang L， Huang H， Wu K， Wang M， Wu B. Impact of BTG2 expression on proliferation and invasion of gastric cancer cells in vitro. Mol Biol Rep. 2010. 37（6）： 2579-86.

[5]Yang Q， Xu E， Dai J， et al. miR-21 regulates N-methyl-N-nitro-N'-nitrosoguanidine-induced gastric tumorigenesis by targeting FASLG and BTG2. Toxicol Lett. 2014. 228（3）： 147-56.

[6]Zhou L， Liang X， Zhang L， et al. MiR-27a-3p functions as an oncogene in gastric cancer by targeting BTG2. Oncotarget. 2016. 7（32）： 51943-51954.

[7]宋杰，陳鳳格，趙偉，趙冬.胃癌的發(fā)病率現(xiàn)狀與治療研究進(jìn)展. 中國(guó)慢性病預(yù)防與控制. 2016. 24（09）： 704-707.

[8]朱正綱. 晚期胃癌轉(zhuǎn)化治療的理念與臨床意義. 外科理論與實(shí)踐. 2017. 22（01）： 1-4.

[9]李加樁， 王凱冰， 鄭紅艷， 陳丹， 隋紅. 胃癌分子靶向藥物治療的研究進(jìn)展. 中國(guó)腫瘤. 2017. 26（04）： 279-285.

[10] 姜潤(rùn)學(xué)， 胡萬(wàn)寧， 孫國(guó)貴， 李軍， 韓曉晨， 蔡海峰. BTG1對(duì)喉癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其機(jī)制研究. 中國(guó)癌癥雜志. 2015. （12）： 959-965.

[11]韓小輝，連亞軍. B細(xì)胞易位基因1在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及意義. 中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志. 2017. （08）： 5-9.

[12] 葉云飛， 肖何， 羅佳， 皮國(guó)成， 王閣. 原發(fā)性肝癌BTG2的表達(dá)及臨床意義. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). ： 1-7.

[13]Lv C， Wang H， Tong Y， et al. The function of BTG3 in colorectal cancer cells and its possible signaling pathway. J Cancer Res Clin Oncol. 2018. 144（2）： 295-308.

[14]姜忠敏，鄭末，張立東等.大腸癌中B細(xì)胞異位基因-2的異常表達(dá)及其抑癌機(jī)制.廣東醫(yī)學(xué).2016.（14）：2169-2172.