革蘭染色在真菌菌絲鑒別中的價(jià)值

王秀媛

侵襲性肺真菌?。╥nvasive fungal disease，IFD）的主要病原體有曲霉、隱球菌和假絲酵母菌［1-2］，已經(jīng)成為臨床常見的感染性疾病，合理選擇抗真菌藥物治療至關(guān)重要［3］。對(duì)涂片進(jìn)行革蘭染色檢查是病原學(xué)診斷的經(jīng)典方法，也是最直接、最簡便、最快捷的鑒定方法［4］。通常鏡下鑒別真菌時(shí)，是依據(jù)其形態(tài)學(xué)特點(diǎn)來進(jìn)行區(qū)分的，但是在不同來源的標(biāo)本中，有的真菌菌絲的形態(tài)特點(diǎn)并不典型，很難區(qū)分［5］。而規(guī)范的標(biāo)本涂片革蘭染色可將不同的真菌菌絲染成陰性或陽性菌絲體，可作為真假菌絲鑒別方法之一。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集2016年1月—2017年6月我院門診及住院患者的1 718例痰液標(biāo)本。

1.2 儀器和試劑 VITEK 2 Compact全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)及真菌鑒定卡（法國生物梅里埃公司），奧林巴斯顯微鏡，沙保弱瓊脂平板（金章公司），革蘭染色液（貝索生物技術(shù)有限公司）。

1.3 方法 對(duì)收集的1 718例痰液標(biāo)本進(jìn)行涂片，涂片應(yīng)薄切均勻（透過涂片部位可看清下面印刷品的字跡）。自然干燥后，經(jīng)火焰快速固定3次，革蘭染色，晾干后讀片。之后將痰涂片上發(fā)現(xiàn)真菌菌絲的370例痰液標(biāo)本接種于沙保弱瓊脂平板，培養(yǎng)24～48 h，并進(jìn)行鑒定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 對(duì)上述革蘭染色不同的兩種真菌菌絲的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，非配對(duì)資料用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 1 718例痰液標(biāo)本革蘭染色鏡檢結(jié)果 1 718例痰液標(biāo)本中，有318例經(jīng)革蘭染色涂片后發(fā)現(xiàn)革蘭陽性的真菌菌絲，如圖1a；有52例經(jīng)革蘭染色涂片后發(fā)現(xiàn)革蘭陰性的真菌菌絲，如圖1b；其他標(biāo)本未發(fā)現(xiàn)真菌菌絲。

圖1 1 718例痰涂片革蘭染色鏡檢結(jié)果

2.2 370例痰液標(biāo)本培養(yǎng)鑒定結(jié)果 上述370例發(fā)現(xiàn)真菌菌絲的痰液標(biāo)本中，318例革蘭陽性的真菌菌絲痰液標(biāo)本生長的菌落均為酵母型，經(jīng)鑒定其中286例為白假絲酵母菌，32例為其他酵母菌，如熱帶假絲酵母菌、副熱帶假絲酵母菌、近平滑假絲酵母菌、克柔假絲酵母菌等；52例革蘭陰性的真菌菌絲痰液標(biāo)本生長的菌落均為霉菌型，經(jīng)鑒定其均為曲霉菌。

2.3 兩種方法結(jié)果比較 370例痰液標(biāo)本中真菌菌絲的革蘭染色結(jié)果和培養(yǎng)鑒定結(jié)果一致（P＞0.05），見表1。

表1 痰標(biāo)本涂片革蘭染色結(jié)果與培養(yǎng)鑒定結(jié)果的比較

3 討論

我國IFD的主要病原體為曲霉、隱球菌和假絲酵母菌，而肺是IFD最常見的靶器官［6-8］。通常感染真菌的患者痰液中可見真菌的真菌絲體，如曲霉菌感染患者；以及假菌絲體，如白假絲酵母菌感染患者［4，9-10］。兩種菌絲在痰液標(biāo)本中有時(shí)依據(jù)形態(tài)特點(diǎn)不太容易區(qū)別。如果對(duì)規(guī)范的標(biāo)本涂片進(jìn)行革蘭染色后，由于假絲酵母菌的假菌絲被染成革蘭陽性，曲霉菌菌絲被染成革蘭陰性，故可作為鑒別菌絲的主要依據(jù)［6］。

在選擇抗真菌感染用藥方面，氟康唑?qū)Τ巳峒俳z酵母菌和光滑假絲酵母菌外的其他假絲酵母菌都是高度敏感的，而且易口服吸收、安全、組織穿透力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)；而曲霉菌中的煙曲霉、黃曲霉、土曲霉等對(duì)氟康唑是天然耐藥的［11-14］。我們通過痰液涂片革蘭染色觀察真菌的形態(tài)特點(diǎn)，結(jié)合染色屬性區(qū)分感染的真菌類型，可在1～2 h內(nèi)為臨床提供抗真菌用藥的參考依據(jù)，為臨床有效的診斷治療提供重要信息。

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