低離子強度鹽溶液在交叉配血試驗和不規(guī)則抗體檢測中的應用

朱立新 許瑞軍

不規(guī)則抗體是引起臨床輸血反應的主要原因之一［1-2］。為確保臨床輸血安全，要求對既往有輸血、妊娠、血液病史［3-4］的所有受血者和供血者等都常規(guī)檢測不完全抗體以及受血者和供血者交叉配血是否相容［5］。1984年Yves lapierre博士發(fā)明了微柱凝膠技術，1988年瑞士達亞美公司將專利產(chǎn)品推向市場。這一技術是基于游離紅細胞和聚集紅細胞能否通過具有分子篩作用的凝膠顆粒構(gòu)成的膠體介質(zhì)的原理，從而使不同狀態(tài)的紅細胞得以分離，是一種在微柱管中用凝膠介質(zhì)進行的凝集反應。微柱凝膠廣譜抗人球蛋白試劑檢測卡是微柱凝膠技術和抗人球蛋白試驗方法相結(jié)合的新型產(chǎn)品，近年來在國內(nèi)外得到廣泛應用。在日常工作中，對用于交叉配血的紅細胞懸液或不規(guī)則抗體篩選譜的紅細胞懸液，是用生理鹽水還是低離子強度鹽溶液配制的問題，似乎并未引起多數(shù)業(yè)務人員的足夠重視，而其對微柱凝集法試驗結(jié)果的影響，也未有太多報道。對此，本研究收集本院3 125例受血者交叉配血及不規(guī)則抗體篩選標本和3 125例供血者的血液標本，分別用生理鹽水、低離子強度鹽溶液配制的紅細胞懸液進行微柱凝集法交叉配血和抗篩試驗，探討兩種紅細胞配制方法在微柱凝集法交叉配血試驗和不規(guī)則抗體檢測中的影響。

1 材料與方法

1.1 檢測對象 收集2015年10月—2016年12月本院3 125例門診與住院申請輸血和手術備血患者（受血者）的交叉配血標本和紅細胞不規(guī)則抗體檢測標本，以及3 125例供血者的血液標本，其中受血者血樣于輸血前3 d內(nèi)采集。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 微柱凝集卡（IgG+C3d檢測卡）和2號稀釋液（ID-Diluent 2）為瑞士達亞美公司產(chǎn)品；低離子強度鹽溶液和抗人球蛋白檢測卡為長春博迅生物技術公司產(chǎn)品；生理鹽水為四川科倫藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品。儀器為瑞士達亞美公司微柱凝膠卡專用孵育器及離心機、長春博研醫(yī)用離心機。

1.2.2 低離子強度鹽溶液的配制 將NaCl、甘氨酸、葡萄糖和磷酸鹽按設定的比例混合，加入防腐劑后，調(diào)整pH至6.6～6.8。

1.2.3 交叉配血試驗 用EDTA-K2抗凝管采集患者血液2.0～3.0 mL，以3 000 r/min（離心半徑為12 cm），離心5 min后分離血漿。取受血者與供血者紅細胞，分別用生理鹽水、低離子強度鹽溶液配成0.8%的紅細胞懸液。抗人球蛋白檢測卡主側(cè)管加入受血者血漿50 μL和供血者0.8%的紅細胞懸液50 μL，次側(cè)管中加入供血者血漿50 μL和受血者0.8%的紅細胞懸液50 μL，置37 ℃孵育15 min，用長春博研醫(yī)用離心機離心5 min，觀察結(jié)果。用達亞美2號稀釋液配制的0.8%紅細胞懸液，達亞美微柱凝膠卡主側(cè)管加入受血者血漿25 μL和供血者的0.8%紅細胞懸液50 μL，次側(cè)管中加入供血者的血漿25 μL和受血者的0.8%紅細胞懸液50 μL，置37 ℃孵育15 min，達亞美專用離心機離心10 min，觀察并記錄交叉配血結(jié)果。

1.2.4 不規(guī)則抗體篩檢 用無添加劑的普通管采集受血者血液3.0～4.0 mL，以3 000 r/min（離心半徑為12 cm），離心5 min后分離血清，將篩選譜紅細胞分別用生理鹽水、低離子強度鹽溶液配成0.8%的紅細胞懸液。分別在標記好的抗人球蛋白檢測卡微管中加入篩選譜紅細胞各1滴（或50 μL），后立即加入被檢者血清 1 滴（或 50 μL），置 37 ℃孵育 15 min，用長春博研醫(yī)用離心機離心5 min，觀察結(jié)果。用達亞美2號稀釋液將譜紅細胞配制成0.8%的紅細胞懸液，分別在標記好的達亞美微柱凝膠卡微管中加入篩選譜紅細胞各1滴（或50 μL），之后立即加入被檢者血清25 μL，置37 ℃孵育15 min，用達亞美專用離心機離心10 min，觀察并記錄抗篩結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料以率或百分比表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種介質(zhì)紅細胞懸液交叉配血和抗體篩檢結(jié)果陽性率比較 6 250份交叉配血標本用低離子強度鹽溶液配制紅細胞懸液，微柱凝集法交叉配血，檢測出現(xiàn)58例陽性反應；用生理鹽水配制的紅細胞懸液檢測出現(xiàn)33例陽性反應。6 250份紅細胞不規(guī)則抗體檢測標本（含3 125份供血者血樣）用低離子強度鹽溶液配制紅細胞懸液，微柱凝集法進行抗體篩檢，檢測出現(xiàn)62例陽性反應；用生理鹽水配制的紅細胞懸液檢測出現(xiàn)42 例陽性反應。兩種介質(zhì)紅細胞懸液交叉配血、抗體篩檢結(jié)果陽性率比較差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。見表1和表2。

2.2 兩種介質(zhì)紅細胞懸液交叉配血和抗體篩檢反應強度比較 在微柱凝膠卡的反應凝集強度用生理鹽水配制的紅細胞懸液較低離子強度鹽溶液配制的紅細胞懸液敏感性明顯降低，尤其在（3+）～（4+）的凝集反應強度下，低離子強度鹽溶液法較生理鹽水法檢測敏感性明顯升高，提高了反應強度，增加了檢測的準確性。兩種介質(zhì)紅細胞懸液交叉配血、抗篩檢測反應強度比較差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。見表3和表4。

表1 生理鹽水和低離子強度鹽溶液兩種介質(zhì)紅細胞懸液交叉配血試驗結(jié)果比較

表2 生理鹽水和低離子強度鹽溶液兩種介質(zhì)紅細胞懸液不規(guī)則抗體篩查結(jié)果比較

表3 生理鹽水和低離子強度鹽溶液兩種介質(zhì)紅細胞懸液交叉配血試驗反應強度比較

表4 生理鹽水和低離子強度鹽溶液兩種介質(zhì)紅細胞懸液不規(guī)則抗體篩查反應強度比較

3 討論

低離子強度鹽溶液主要由葡萄糖，NaCl，甘氨酸及防腐劑等組成。由于低離子強度鹽溶液可降低介質(zhì)的離子強度，且降低紅細胞的Zeta電位可增加抗原抗體結(jié)合［6-7］，從而使原來在鹽水介質(zhì)中不能凝集紅細胞的抗體發(fā)生凝集。交叉配血試驗和不規(guī)則抗體篩檢試驗的陽性檢測率在低離子強度鹽溶液介質(zhì)中均顯著增加，檢測結(jié)果的準確性明顯提高。

本研究的檢測結(jié)果說明，用低離子強度鹽溶液稀釋紅細胞時，其檢測靈敏度明顯高于用生理鹽水。我們認為，低離子強度鹽溶液用于微柱凝集法交叉配血試驗和不規(guī)則抗體篩檢有很多優(yōu)點： ① 使用低離子強度鹽溶液稀釋紅細胞，可使抗原抗體的結(jié)合能力增強，大大減少了孵育時間，使輸血相關試驗的檢測效率增加［8］； ② 增加了不規(guī)則抗體的檢出率，尤其是弱抗體或低濃度抗體的檢出率，提高了輸血安全性； ③ 提高了微柱凝集法交叉配血和抗篩檢測試驗的敏感性，且結(jié)果穩(wěn)定［2，9-10］。值得注意的是，低離子強度鹽溶液并不適合用作紅細胞儲存溶液，紅細胞在低離子強度鹽溶液的儲存時間超過12 h后，會耗損部分抗原。在配制紅細胞懸液時尚需注意紅細胞的稀釋濃度，以便獲得最佳離子強度，而改變紅細胞濃度可能會影響間接抗人球蛋白試驗的特異性或敏感性［11］。采取適當?shù)姆椒ū４娴碗x子強度鹽溶液，也是確保交叉配血試驗結(jié)果可靠性的重要手段［12］?？傊趯嶋H臨床輸血過程中，影響因素很多且無法避免［13-15］。首先應嚴格按照說明書進行試驗操作，以確保試驗的準確性；同時應運用微柱凝集法、凝聚胺法和生理鹽水法等多種方法聯(lián)合配血，有助于最大限度地減少輸血事故的發(fā)生，保證臨床輸血安全。

1 王淑英，周武，汪德清.中國漢族人群通用血漿制備方法研究［J］.實用檢驗醫(yī)師雜志，2011，3（1）：9-12.

2 李慧，徐煥銘，張毅，等.輸血前患者不規(guī)則抗體篩查及鑒定結(jié)果分析［J］.中國實驗血液學雜志，2015，23（3）：861-865.

3 葉有玩，何春輝，廖長征，等.聯(lián)合輸注冰凍單采血小板與新鮮冰凍血漿治療急性大出血的比較［J］.中華危重病急救醫(yī)學，2006，18（9）：563-564.

4 劉玲，郭鳳梅，邱海波.《2004嚴重感染和感染性休克治療指南》系列講座(5)嚴重感染的重組活化蛋白C應用成分輸血和深靜脈血栓預防［J］.中華危重病急救醫(yī)學，2004，16（11）：643-645.

5 王立人，段方.手術備血常規(guī)RH抗原檢測及自身輸注［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2002，9（2）：120.

6 American Association of Blood Banks. The technical manual of the American Association of Blood Banks［M］. USA：American Association of Blood Banks，1977.

7 Moore HC，Mollison PL. Use of a low-ionic-strength medium in manual tests for antibody detection［J］. Transfusion， 1976，16（4）：291-296.

8 周守容，鄧安彥，吳春磊，等.低離子強度溶液在輸血相關檢驗中的應用研究［J］.國際檢驗醫(yī)學雜志，2013，34（22）：3063-3064.

9 秦立紅，蔣利星.微柱凝膠法配血試驗2 316例結(jié)果分析［J］.國際檢驗醫(yī)學雜志，2012，33（4）：500-502.

10 李慧，徐煥銘，張毅，等.輸血前患者不規(guī)則抗體篩查及鑒定結(jié)果分析［J］.中國實驗血液學雜志，2015，23（3）：861-865.

11 蘇秀瓊，陳奕霞，藍建崇，等.不規(guī)則抗體篩查對提高臨床輸血安全的價值研究［J］.檢驗醫(yī)學與臨床，2014，11（4）：448-449，452.

12 周鵬，朱倩雯.低離子溶液不同保存方法對微柱凝膠配血試驗的影響［J］.國際檢驗醫(yī)學雜志，2014，35（7）：912-913，914.

13 張時民.一例嚴重冷凝集樣本的血常規(guī)檢驗解決方案［J］.實用檢驗醫(yī)師雜志，2011，3（2）：122-124.

14 張勇萍，安寧，楊世明，等.血型不規(guī)則抗體的篩查和抗體特異性分析［J］.細胞與分子免疫學雜志，2014，30（9）：980-982.

15 羅紅敏.嚴重創(chuàng)傷患者成分輸血比例對患者預后的影響：一項多中心隨機對照試驗［J］.中華危重病急救醫(yī)學，2016，28（3）：261.