劉位芬， 梁 鋮， 苗春輝， 楊 爽，2

(1.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所，云南蒙自 661101； 2.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山西太谷 030801)

大蠟螟(GalleriamellonellaL.)屬鱗翅目(Lepidoptera)螟蛾科(Pyralidae)蠟螟亞科(Galleriinae)蠟螟屬(GalleriaFabricius)昆蟲，在我國1年發(fā)生2～5代，世代重疊，每個(gè)世代都經(jīng)歷卵、幼蟲、蛹和成蟲4個(gè)發(fā)育階段，幼蟲(別稱巢蟲)以蜜蜂巢脾為食，容易在群勢較弱的蜂群和長時(shí)間存放不加以處理的巢脾上孳生，鉆蛀隧道、吐絲做繭、破壞巢脾，使蜜蜂幼蟲和蛹都受到傷害，造成大量“白頭蛹”，為害輕時(shí)，子脾受損、群勢減弱、產(chǎn)蜜量減少；為害嚴(yán)重時(shí)，擾亂蜜蜂在蜂群中的正?；顒?dòng)，使成蜂無法安身，導(dǎo)致蜂群(中華蜜蜂)飛逃，給養(yǎng)蜂生產(chǎn)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[1-3]。

目前，防治大蠟螟的方法有物理的、化學(xué)的、生物的和飼養(yǎng)管理等。物理防治是對巢脾進(jìn)行冷凍、冷藏、加熱和射線等處理，此法對貯存巢脾效果較好，但對設(shè)施要求較高；化學(xué)防治是采用硫磺、甲酸、乙酸、氯化鈣、二溴化乙烯、溴代甲烷及二氯苯等藥劑進(jìn)行防治，長期用藥不符合蜂產(chǎn)品無公害生產(chǎn)的要求；在生物防治上主要采用蠟螟絨繭蜂、線蟲和蘇云金芽孢桿菌等寄生性天敵對大蠟螟幼蟲進(jìn)行防治，但此法對大蠟螟成蟲不起作用；在飼養(yǎng)管理方面，通過保持蜂群強(qiáng)壯的群勢，定期清掃蜂箱、更換巢脾、安裝巢蟲阻隔器等措施，效果雖好但費(fèi)工費(fèi)時(shí)，不利于養(yǎng)蜂機(jī)械化和規(guī)模化生產(chǎn)，因此迫切須要尋求新的大蠟螟防治技術(shù)[4]。

利用昆蟲性信息素防治害蟲是一項(xiàng)極具前景的綠色防治技術(shù)，在國內(nèi)外均已有成功實(shí)例，但在國內(nèi)對防治大蠟螟方面還未見報(bào)道。對大蠟螟性信息素成分的研究已有報(bào)道，Roller等從大蠟螟雄蛾翅腺鑒定出第1種性信息素成分十一烷醛(n-undecanal)[5]；Leyrer等鑒定了第2種大蠟螟雄性信息素成分壬醛(n-nonanal)，并報(bào)道壬醛和十一烷醛的比率為 7 ∶3，該混合物能刺激引起大蠟螟雌蛾的求偶行為，壬醛在這一過程中占主導(dǎo)地位[6]；Schmidt等利用人工合成性信息素的方法進(jìn)一步證實(shí)了壬醛和十一烷醛的存在，但蜂場試驗(yàn)結(jié)果表明，按7 ∶3比例混合的壬醛和十一烷醛混合物并不能有效地引誘雌蛾，推測大蠟螟性信息素還含有其他成分[7]；Svensson等研究報(bào)道了第3種大蠟螟雄性信息素5，11-二甲基-二十五烷，并人工合成其4種立體異構(gòu)物，但這3種雄性信息素的混合物吸引雌蛾水平依然遠(yuǎn)低于自然狀態(tài)下雄蛾釋放性信息素的引誘力[8]。目前，國內(nèi)有關(guān)大蠟螟性信息素成分的研究尚未見報(bào)道，但國外已有相關(guān)報(bào)道，例如，Lebedeva等研究報(bào)道俄羅斯不同地區(qū)間大蠟螟性信息素成分存在差異[9]。因此，本研究采用全自動(dòng)頂空固相微萃取(headspace solid phase microextraction，簡稱HS-SPEM)和氣相色譜-質(zhì)譜(gas chromatography-mass spectrometer，簡稱GC-MS)法對山西省晉中地區(qū)大蠟螟外激素成分進(jìn)行初步分析鑒定，以期為今后更好地利用性信息素對大蠟螟進(jìn)行防治提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試材料 大蠟螟雌、雄蛾由山西農(nóng)業(yè)大學(xué)養(yǎng)蜂學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供，試驗(yàn)前2 h取剛羽化的雌、雄蛾各10頭，剪去其翅膀(保持活體)，轉(zhuǎn)入20 mL頂空瓶中，密閉瓶口。

1.1.2 儀器 檢測試驗(yàn)全部在山西農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心完成，儀器有美國Thermo Fisher公司氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(Trace ISQ型GC-MS聯(lián)用儀)、美國CTC公司轉(zhuǎn)盤式自動(dòng)進(jìn)樣器(G6500型)、美國Supelco公司固相微萃取裝置，萃取纖維頭為65 μm PDMS/DVB。

1.2 方法

1.2.1 外激素成分的提取 檢測前先將PDMS/DVB萃取纖維在GC進(jìn)樣口250 ℃老化1 h。自動(dòng)進(jìn)樣器條件為：50 ℃保持15 min，50 ℃吸附5 min，解吸附5 min，分析時(shí)間為 60 min，每個(gè)樣品重復(fù)2次。

1.2.2 GC-MS分析條件 HP-5MS彈性石英毛細(xì)管柱(30.00 m×0.25 mm×0.25 μm)；進(jìn)樣口溫度為250 ℃；載氣為高純氦氣，純度≥99.99%，柱流量為1.0 mL/min；升溫程序：初始溫度為40 ℃，保持3 min，以5 ℃/min升至270 ℃，保持6 min；不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量為2 μL。MS條件：離子源溫度為 230 ℃，發(fā)射電流為34.6 μA，轉(zhuǎn)接口溫度為280 ℃，電子倍增器電壓為350 V，全掃描采集，采用氫火焰離子化檢測器(flame ionization detector，簡稱FID)進(jìn)行檢測。

2 結(jié)果與分析

按照GC-MS分析條件分別對大蠟螟雌、雄蛾外激素?fù)]發(fā)性成分進(jìn)行分析，得到總離子流色譜(圖1、圖2)，外激素成分分析結(jié)果如表1、表2所示。通過GC-MS分析得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)經(jīng)計(jì)算機(jī)在標(biāo)準(zhǔn)譜庫進(jìn)行檢索，得出分析報(bào)告(100個(gè)峰)，根據(jù)質(zhì)譜匹配度分別對大蠟螟雌、雄蛾外激素組分進(jìn)行核對(要求匹配率>20%)。

表1 大蠟螟雄蛾外激素組分的GC-MS分析結(jié)果

由表1可知，在大蠟螟雄蛾提取物中共鑒定出揮發(fā)物外激素成分8種，占總提取物的18.66%，其中酮類占8.29%(5種)，醇類占10.25%(2種)，醛類占0.12%(1種)；1種8碳化合物(1.18%)、3種9碳化合物(7.26%)、1種10碳化合物(0.65%)、2種11碳化合物(3.60%)、1種18碳化合物(5.97%)。由表2可知，在大蠟螟雌蛾提取物中鑒定4種揮發(fā)物外激素成分，占總提取物的1.29%，其中1種醇類，3種酮類，分別是乙醇(0.45%)、辛酮(0.34%)、壬酮(0.21%)和癸酮(0.29%)。

通過對比成分發(fā)現(xiàn)，雄蛾外激素種類和含量明顯較雌蛾

表2 大蠟螟雌蛾外激素組分的GC-MS分析結(jié)果

多；酮類外激素組分辛酮、壬酮和癸酮為大蠟螟雌、雄蛾共有組分；乙醇為雌蛾特有成分，但壬醛、十一烷醇(酮)和6，10，14-三甲基十五烷酮-2為大蠟螟雄蛾特有成分，鑒于昆蟲性信息素成分多為不飽和烴，推測壬醛、十一烷酮和6，10，14-三甲基十五烷酮-2為大蠟螟雄性信息素組分(分子結(jié)構(gòu)如圖3)。

3 結(jié)論與討論

本研究通過頂空固相微萃取與GC-MS初步測定山西省晉中地區(qū)大蠟螟雌、雄蛾外激素?fù)]發(fā)物成分的差異，經(jīng)成分差異對比推測大蠟螟雄性信息素組分為壬醛(nonanal)、十一烷酮(醇)(2-undecanone)和6，10，14-三甲基十五烷酮-2(2-pentadecanone)，這與國外研究報(bào)道的大蠟螟雄性信息素成分[5-8]略有差異。在此次檢測中未檢測到十一烷醛(n-undecanal)和5，11-二甲基-二十五烷，但檢測出十一烷酮和十一烷醇，這可能與試驗(yàn)中取樣時(shí)間和檢測條件不同有關(guān)。同時(shí)在試驗(yàn)中檢測出壬醛與十一烷酮的量都較小，分別為 0.12%、0.27%，比率接近3 ∶7，這與Leyrer等研究報(bào)道的壬醛占主導(dǎo)地位的結(jié)論[6]不符，表明不同地區(qū)間大蠟螟性信息素組分存在一定的差異。對于國內(nèi)外不同地區(qū)大蠟螟的種類及信息素成分的差異有必要進(jìn)行深入研究。

目前，利用昆蟲性信息素防治害蟲是害蟲綜合治理對策的有效途徑之一，因其高效、無毒、無污染、不傷害天敵昆蟲，不會(huì)像化學(xué)農(nóng)藥產(chǎn)生環(huán)境污染及“3R”現(xiàn)象，被稱為“第3代綠色農(nóng)藥”，有著巨大的發(fā)展前景[10]。檢測中發(fā)現(xiàn)，6，10，14-三甲基十五烷酮-2的比率較高，達(dá)到5.97%，分別為壬醛和十一烷酮的49.75、22.11倍，推測6，10，14-三甲基十五烷酮-2在大蠟螟羽化初期發(fā)揮了重要作用。因此，在今后養(yǎng)蜂生產(chǎn)實(shí)踐中，可以針對6，10，14-三甲基十五烷酮-2這一雄性信息素設(shè)計(jì)引誘劑或驅(qū)避劑對大蠟螟雌蛾進(jìn)行防控。

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