鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤與微血管密度及基底膜層粘連蛋白相關(guān)性分析

賀學(xué)勤(內(nèi)蒙古自治區(qū)腫瘤醫(yī)院頭頸外科，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤(nasal inverted papilloma，NIP)是比較常見的鼻腔鼻竇良性腫瘤，其病理上屬于良性，但臨床上有破壞周圍骨質(zhì)，切除后易復(fù)發(fā)及惡變傾向，據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)其惡變率為6%～13%，多數(shù)為鱗狀細(xì)胞癌，也可惡變?yōu)橄侔1]。手術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)與手術(shù)術(shù)式及腫瘤生物學(xué)行為有關(guān)[2]。腫瘤血管生成在實(shí)體腫瘤的惡變、生長及轉(zhuǎn)移等方面至關(guān)重要，是腫瘤發(fā)生發(fā)展的基礎(chǔ)，而目前認(rèn)為微血管密度(microvasular density，MVD)是判斷腫瘤血管生成的金標(biāo)準(zhǔn)。CD34分子是一種階段特異性白細(xì)胞分化抗原，是一種可靠的內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物，目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為CD34抗體是檢驗(yàn)微血管構(gòu)筑的較好的方法，有較強(qiáng)的可重復(fù)性[3]?；啄诱尺B白(Laminin，LN)是一種大分子非膠原糖蛋白，對(duì)維持細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的完整結(jié)構(gòu)起著重要作用。研究表明，LN在介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的浸潤過程中發(fā)揮著重要的作用[4]。介于NIP的易惡變易復(fù)發(fā)的特殊性，尋找細(xì)胞因子在腫瘤發(fā)病、惡變的中的作用，找到能判定其增生活性的客觀定量指標(biāo)，對(duì)該病的深入研究有重要價(jià)值，同時(shí)對(duì)臨床上能夠有效防治該病有廣泛的應(yīng)用前景。

1 材料和方法

1.1標(biāo)本來源收集2013年2月至2015年12月年我經(jīng)病例證實(shí)的NIP標(biāo)本30例，其中男25例，女5例，年齡32～72歲；平均年齡為51.9歲，腫瘤分期：按Krouse腫瘤分期法：1期 8例，2期10 例，3期 7例，4期 5例，鼻中隔偏曲矯正術(shù)后切除的下鼻甲組織10例為對(duì)照組，其中男7例，女3例，年齡16～46歲，平均年齡為27.4歲。

1.2方法所有標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋。免疫組化染色采用s-p法。陰性對(duì)照采用PBS緩沖液代替一抗，其它步驟不變。

1.3染色結(jié)果判定LN：以基底膜染為棕黃色為陽性信號(hào)?；啄こ蔬B續(xù)、完整、均勻的線狀結(jié)構(gòu)為(+++)，為陽性表達(dá)；呈不連續(xù)、粗細(xì)不均勻分布或波浪狀、枝丫狀、條索狀或小灶區(qū)間段位(++)，呈明顯間斷、區(qū)域缺失為(+)，呈大部分缺失或碎片狀或完全缺失為(-)，以上均為陰性表達(dá)。CD34：血管內(nèi)皮被染成棕黃色或棕褐色。先在低倍鏡下尋找瘤內(nèi)微血管密集區(qū)，然后在200倍視野下計(jì)數(shù)5個(gè)不同視野的微血管數(shù)，取其平均值。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用 SPSS 14.0 統(tǒng)計(jì)軟件包處理。計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，陽性表達(dá)率的比較采用卡方檢驗(yàn)、陽性細(xì)胞數(shù)比較用t檢驗(yàn)。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1MVD在NIP和下鼻甲中的表達(dá)在陰性對(duì)照中CD34抗原未見表達(dá)，CD34陽性表達(dá)呈現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒狀，表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，在NIP主要表達(dá)于腫瘤間質(zhì)，尤以瘤團(tuán)周圍近基底膜的間質(zhì)內(nèi)及炎性細(xì)胞浸潤的部位顯著，血管管腔多層圓形、橢圓形，有少量扭曲變形、分叉呈分支狀(如圖1a)。在下鼻甲散在表達(dá)于黏膜固有層血管，血管管腔多呈圓形、橢圓形(如圖1b)。MVD在NIP、下鼻甲組織中的表達(dá)分別為42.64±7.43，25.48±2.94，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05)。

2.2LN在NIP和下鼻甲中的表達(dá)LN在陽性結(jié)果為深棕色，在NIP主要分布于瘤體周圍的基底膜中及血管周圍基底膜，血管全層均可見呈規(guī)則的強(qiáng)陽性反應(yīng)(+++)，而瘤體周圍的基底膜多表現(xiàn)為不完整，可變薄、斷裂呈小灶區(qū)缺失(圖2a)。LN在下鼻甲的基底膜中均表現(xiàn)為線樣連續(xù)、均勻完整結(jié)構(gòu)(如圖2b)。二者相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.01)。

圖2 LN在在組織中的表達(dá) (S-P法，×200) a.鼻內(nèi)翻性乳頭狀瘤；b.下鼻甲

2.3MVD的表達(dá)和LN在NIP臨床各期中的分布MVD的計(jì)數(shù)和LN的表達(dá)在腫瘤臨床分期(T1、T2、T3、T4)中各組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05)，說明隨著病程進(jìn)展其值呈上升趨勢(shì)。見表1、表2。

表1 NIP組臨床各期MVD計(jì)數(shù)的比較

表2 NIP組臨床各期LN表達(dá)的比較

3 討論

NIP屬上皮源性良性腫瘤，高復(fù)發(fā)性、破壞性生長方式及易惡性變?yōu)槠渑R床特征，因而有人認(rèn)為NIP當(dāng)屬一種臨界性腫瘤。

CD34是敏感性和特異性均較高的血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物。腫瘤血管的形成是腫瘤組織得以生存并賴于迅速生長和遠(yuǎn)距離轉(zhuǎn)移的必要條件，新生血管網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)可為腫瘤生長提供充分的營養(yǎng)，保證腫瘤快速增殖，血管增生的程度反映了腫瘤誘導(dǎo)血管生成的能力，從而在一定程度上決定了腫瘤的生物學(xué)行為[5]，目前認(rèn)為，早期腫瘤新生血管密度的增加預(yù)示腫瘤可能進(jìn)入一個(gè)快速增長、加速侵襲和惡變潛能增加的時(shí)期。因此，高M(jìn)VD的腫瘤，表現(xiàn)出更快的生長速度和更強(qiáng)的侵襲性。

在本研究中我們發(fā)現(xiàn)，CD34的表達(dá)與腫瘤臨床分期有關(guān)，隨臨床分期的增高，MVD的數(shù)量也呈逐漸增加趨勢(shì)，同時(shí)與對(duì)照組相比較，腫瘤血管有表現(xiàn)為不規(guī)則形，有扭曲分叉等現(xiàn)象。因此早期了解腫瘤新生血管的密集程度可幫助我們預(yù)知腫瘤惡變或復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)度，近年來也有研究表明MVD有助于判斷NIP復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)及預(yù)后。

LN是基底膜的一個(gè)重要組成部分，大量研究表明基底膜的層粘連蛋白的缺失程度與腫瘤的局部侵襲轉(zhuǎn)移及惡性程度密切相關(guān)，檢測(cè)腫瘤組織中基底膜的分布狀況有助于估價(jià)其浸潤生長趨勢(shì)，判斷其惡性程度[6]。

在本研究中我們發(fā)現(xiàn)，在正常下甲組織中的LN均表現(xiàn)為完整均勻一致，而在NIP中我們發(fā)現(xiàn)隨著臨床分期的增加，LN的陽性表達(dá)有逐漸降低的趨勢(shì)，尤其在臨床四期中多表現(xiàn)為部分小灶區(qū)的缺失，這與臨床中腫瘤發(fā)生惡變相符合，同時(shí)也說明隨著臨床分期的增加，腫瘤的破壞程度及惡變概率在逐漸增加，這與Artese等研究表明LN和腫瘤臨床分期有關(guān)相符合。

血管形成固然是腫瘤生長、侵襲、轉(zhuǎn)移過程中的必要條件，但這一過程中腫瘤與宿主血管的相互作用關(guān)系尤其是腫瘤細(xì)胞表面的具有高度親和力的LN與血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的關(guān)系尤為密切，其促進(jìn)腫瘤血管形成及浸潤轉(zhuǎn)移中的作用更不可忽視。LN作為基底膜的主要成份之一，在腫瘤血管生成早期起著關(guān)鍵性的作用，這與其形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，作為一個(gè)成熟的血管內(nèi)皮細(xì)胞與基底膜上的LN連接緊密，一些體外實(shí)驗(yàn)認(rèn)為，層粘連蛋白A鏈上的SIKVAV肽段與內(nèi)皮細(xì)胞的關(guān)系密切。Grant等[7]建立了體外模型系統(tǒng)，并認(rèn)為層粘連蛋白上的SIKVAV肽段是具有新的血管生成活性的，并能促進(jìn)腫瘤的血管化和腫瘤的生長。本實(shí)驗(yàn)中未能證明兩因子之間有相關(guān)性?？赡芘c各組例數(shù)偏少有關(guān)。

腫瘤的惡變、轉(zhuǎn)移是多種因素作用下的一個(gè)復(fù)雜過程，血管形成使腫瘤得以獲得足夠的營養(yǎng)物質(zhì)而持續(xù)性生長，腫瘤細(xì)胞從原發(fā)部位脫落，進(jìn)入血液或淋巴系統(tǒng)并且再次傳出循環(huán)系統(tǒng)，入侵新的器官，誘導(dǎo)新生血管形成，最終形成轉(zhuǎn)移灶，在此過程中，細(xì)胞與基底膜的相互作用可以說是貫穿始終的。由于在腫瘤發(fā)生的早期階段就有活躍的血管生成[8～12]，因而在癌前病變活檢中可應(yīng)用MVD檢測(cè)作為判斷癌前病變惡變傾向的評(píng)價(jià)指標(biāo)之一[13～15]。

介于NIP的特殊的生物學(xué)特性，目前臨床治療方法主要是鼻內(nèi)鏡下手術(shù)切除，同時(shí)行術(shù)后長期甚至終身隨訪，我們研究目的在于為NIP的治療提供一種新的思路，即在手術(shù)之后通過有效的抗血管生成和抑制LN降解療法控制或逆轉(zhuǎn)癌前病變的惡變、減少惡性腫瘤的發(fā)病率。

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